Содержание

Содержание. 2

Введение. 3

Методы и технологические подходы.. 4

Общие методы выделения кДНК белков человека. 4

Оптимизация генной экспрессии. 4

Выделение ДНК интерферонов. 5

Свойства природных и генно-инженерных интерферонов. 6

Гормон роста человека, полученный методом генной инженерии. 7

Ферменты.. 8

ДНКаза. 8

Альгинат-лиаза. 9

Моноклональные антитела как лекарственные средства. 10

Структура и функция антител. 11

Профилактика отторжения трансплантированных органов. 12

Лекарственные вещества, связанные с моноклональными антителами. 12

Моноклональные антитела человека. 14

Заключение. 17

Литература. 18

Введение

До появления технологии рекомбинантных ДНК многие лекарственные препараты на основе белков человека удавалось получать только в небольших количествах, их производство обходилось очень дорого, а механизм биологического действия иногда был недостаточно изучен. Предполагалось, что с помощью новой технологии можно будет получать весь спектр таких препаратов в количествах, достаточных как для их эффективного тестирования, так и для применения в клинике. На сегодняшний день клонировано более 400 генов ( в основном в виде кДНК) различных белков человека, которые могут стать лекарственными препаратами. Большинство этих генов уже экспрессированы в клетках-хозяевах, и сейчас их продукты проходят проверку на возможность применения для дечения различных заболеваний человека. Некоторые рекомбинантные белки получили одобрение Департамента по контролю за качеством пищевых продуктов, медикаментов и косметических средств (США) на применение для лечения заболеваний человека, вот некоторые из этих рекомбинантных белков: антигемофильный фактор, глюкоцереброзидаза, гормон роста, ДНКазаI, инсулин, интерлейкин-2, ИФa_2а, ИФa₂_b, ИФa_n3, ИФb_1b, ИФg_1b, соматотропин, тканевой активатор плазминогена, эритропоэтин [1, 155].

Привлекательно выглядит и перспектива применения в качестве терапевтических средств специфических антител; их можно будет использовать для нейтрализации токсинов, борьбы с бактериями, вирусами. Антитело либо нейтрализует чужеродный агент, либо участвует в разрушении клетки-мишени. До сих пор антитела редко применялись в качестве медицинских препаратов. Возможно, эта ситуация изменится в связи с появлением и разработкой технологий получения моноклональных антител и с дальнейшей расшифровкой молекулярных функций иммуноглобулинов [1, 122].

Методы и технологические подходы

Общие методы выделения кДНК белков человека

Для выделения генов или кДНК белков человека используют разные подходы:

a. В ряде случаев выделяют нужный белок и определяют аминокислотную последовательность участка белка, затем, исходя из этого, определяют кодирующую нуклеотидную последовательность того же участка, синтезируют олигонуклеотид, который используют в качестве гибридизационного зонда для выделения нужного гена или кДНК из геномных или кДНК-библиотек.

b. Вырабатывают антитела к высокоочищенному препарату белка и используют эти антитела для скрининга библиотек, в которых происходит экспрессия определяемых генов.

Если клетки какой-то ткани синтезируют преимущественно один белок, то кДНК-библиотека, полученная на основе мРНК, выделенной из этой ткани, будет обогащена последовательностью кДНК исследуемого белка. Например, основным белком, синтезируемым клетками островков Лангерганса поджелудочной железы, является инсулин, и 70% мРНК, выделенных из этих клеток, кодируют именно его. Таким образом, метод выделения кДНК искомого белка из кДНК-библиотеки, полученной из определенной ткани, подходит, например, для инсулина, но не подходит для тех белков человека, которые синтезируются в организме в малых количествах или если место синтеза этих белков неизвестно. В этих случаях требуются иные экспериментальные подходы [1, 133].

Оптимизация генной экспрессии

Недостаточно только создать новый белок, необходимо также оптимизировать экспрессию его гена. Для начала определяют возможность синтеза достаточных количеств аутентичного белка прокариотической или эукариотической системе. Предпочтение отдается прокариотическим системам, поскольку их производительность выше, а работа с ними обходится дешевле. Но не все микроорганизмы синтезируют функциональные формы гетерологичных белков с одинаковой эффективностью, поэтому необходимо проводить сравнительные количественные оценки [4, 271].

При изучении экспрессии интерлейкина-3 человека наилучшим хозяином оказалась Bacillus licheniformis. Хотя в одной из систем E. coli

Был достигнут несколько более высокий уровень экспрессии, пролученный белок с молекулярной массой 20 кДа представлял собой продукт слияния интерлейкина-3 с участком b-галактозидазы E. Coli, а не зрелый аутентичный белок молекулярной массой 15 кДа. Как правило, подобный химерный белок нельзя использовать в качестве лекарственного препарата. Клетки дрожжей Kluyveromyces lactis и Sacharomyces cerevisiae, а также клетки человека были способны гликозилировать интерлейкин-3, однако уровень экспрессии в них был относительно низок. Гликозилирование не оказывает существенного влияния на активность интерлейкина-3, однако ведт к ощутимой разнице в размерах молекулы.

Выделение ДНК интерферонов

Интерфероны (ИФ) человека, включающие ИФa, ИФb, ИФg—это природные белки, каждый из которых может найти свое терапевтическое применение для лечения таких заболеваний, как гепатит С, злокачественная меланома, множественные миеломы, болезнь Крона, ВИЧ-инфекция, цервикальная дисплазия, рассеянный склероз, рак почки, хронический гранулематоз. При выделении их кДНК пришлось разработать новый подход, позволяющий преодолеть трудности, связанные с низким содержанием соответствующих мРНК и белков. Процедура выделения кДНК интерферонов состояла в следующем:

1. Из лейкоцитов человека выделили мРНК и фракционировали ее по размерам; провели обратную транскрипцию и встроили в сайт PSTI плазмиды pBR322.

2. Полученным продуктом трансформировали Eschechia coli. Образовавшиеся 6114 клонов разделили на 12 групп: по 512 клонов в каждой. Тестирования проводили на группе клонов, что позволило ускорить процесс их идентификации.

3. Каждую группу клонов гибридизовали с неочищенным препаратом мРНК интерферона.

4. Из образовавшихся гибридов, содержащих клонированную ДНК и мРНК, выделили мРНК и провели ее трансляцию в бесклеточной системе синтеза белка.

5. Определили интерферонную противовирусную активность каждой смеси, полученной в результате трансляции. Группы, проявившие интерферонную активность, содержали клон с кДНК, гибридизовавшейся с интерфероновой мРНК.

6. Позитивные группы разбили на 8 подгрупп, содержавших по 84 клона, и вновь провели тестирование. Разбиение на подгруппы повторяли до тех пор, пока не идентифицировали клон, содержавший полноразмерную интерфероновую кДНК человека.

Если нужно получить большие количества интерферона, то соответствующую кДНК можно субклонировать в экспрессирующем векторе в Eschechia coli, который позволяет достичь высокого уровня экспрессии.

Свойства природных и генно-инженерных интерферонов

Первый ген интерферона был выделен в начале 80х гг. С тех пор было обнаружено несколько разных интерферонов. Интерфероны можно подразделить на три группы: ИФa, ИФb, ИФg. ИФa и ИФb синтезируются клетками, обработанными препаратами вирусов или вирусной РНК, а ИФg вырабатывается в ответ на действие веществ, стимулирующих рост клеток. ИФa кодируется семейством генов, включающих как минимум, 15 неаллельных генов, в то время как ИФb и ИФg кодируются одним геном каждый. Подтипы ИФa проявляют разную специфичность к разным типам клеток и разным вирусам.

Было предпринято несколько попыток создать интерферон с комбинированными свойствами, используя тот факт, что члены семейства ИФa различаются по специфичности своей противовирусной активности. Теоретически этого можно достичь, соединив части последовательностей генов разных ИФa. Это приведет к образованию гибридного белка с другими свойствами, чем у каждого из исходных белков. Сравнение последовательностей кДНК ИФa₁ и ИФa₂ показало, чтоони содержат одинаковые сайты рестрикции в позициях 60, 92 и 150. После расщепления обеих ДНК в этих сайтах и последующего лигирования фрагментов было получено несколько гибридных генов. Эти гены экспрессировали в Eschechia coli, синтезированные белки очистили и исследовали их биологические функции. Проверка защитных свойств гибридных интерферонов на культуре клеток млекопитающих показала, что некоторые из гибридных молекул проявляли большую активность, чем родительские молекулы. Кроме того, многие гибридные интерфероны индуцировали образование 2´–5´-олигоизоаденилатсинтетазы в контрольных клетках. Этот фермент участвует в синтезе 2´–5´-связанных олигонуклеотидов, которые в свою очередь активируют латентную клеточную эндорибонуклеазу, расщепляющую вирусную мРНК. Другие гибридные интерфероны проявляли большую, чем родительские молекулы, антипролиферативную активность в культурах различных раковых клеток человека.

Гормон роста человека, полученный методом генной инженерии

Стратегию конструирования новых белков путем замены функциональных доменов или с помощью направленного мутагенеза можно использовать для усиления или ослабления биологического действия белка. Например, нативный гормон роста человека связывается с в разных типах клеток как с рецептором гормона роста, так и с пролактиновым рецептором

Чтобы избежать нежелательных побочных эффектов в процессе лечения, нужно исключить присоединение гормона роста к пролактиновому рецептору. Поскольку сайт связывания гормона с рецептором гормона роста лишь частично перекрывается с сайтом связывания с рецептором пролактина, удалось избирательно снизить связывание гормона с последним. Для этого был использован сайт-направленный мутагенез, в результате которого произошли определенные изменения в боковых группах некоторых аминокислот (His-18, His-21, Glu-174) —лигандов для ионов Zn²⁺, необходимых для высокоаффинного связывания гормона роста человека с пролактиновым рецептором. Полученный гормон роста, таким образом, связывается только с рецептором гормона роста. Этот результат может быть использован в медицине, если удастся оптимизировать экспрессию гена этого модифицированного белка [1, 210].

Ферменты

ДНКаза

Наиболее частым летальным наследственным заболеванием среди европеоидов является муковисцидоз. В США выявлено 30000 случаев этого заболевания, в Канаде и странах Европы – 23000. Пациенты с муковисцидозом часто страдают инфекционными заболеваниями, поражающими легкие. Лечение рецидивирующих инфекций антибиотиками в конце концов приводит к появлению резистентных штаммов патогенных бактерий. Бактерии и продукты их лизиса вызывают накопление в легких вязкой слизи, затрудняющей дыхание. Одним из компонентов слизи является высокомолекулярная ДНК, которая высвобождается из бактериальных клеток при лизисе. Ученые имз биотехнологической компании Genetech выделили и экспрессировали ген ДНКазы—фермента, который расщепляет высокомолекулярную ДНК на более короткие фрагменты. Очищенный фермент вводят в составе аэрозоля в легкие больных муковисцидозом, он расщепляет ДНК, вязкость слизи снижается, что облегчает дыхание. Хотя эти меры и не излечивают муковисцидоз, они облегчают состояние больного. Применение данного препарата было недавно одобрено Департаментом по контролю за качеством пищевых продуктов, медикаментов и косметических средств (США) [3, 72].

Альгинат-лиаза

Альгинат—это полисахарид, синтезируемый целым рядом морских водорослей, а так же почвенными и морскими бактериями. Его мономерными единицами являются два сахарида—b-D-маннуронат и a-D-гулуронат, относительное содержание и распределение которых определяют свойства определенного альгината. Так, остатки a-D-гулуроната образуют межцепочечные и внутрицепочечные сшивки путем связывания ионов кальция; остатки b-D-маннуроната связывают ионы других металлов. Альгинат, содержащий такие сшивки, образует эластичный гель, вязкость которого прямо пропорциональна размеру полисахаридных молекул.

Выделение альгината слизистыми штаммами Pseudomonas aeruginosa существенно повышает вязкость слизи у больных муковисцидозом. Чтобы очистить дыхательные пути и облегчить состояние больных, в дополнение к обработке ДНКазой I следует провести деполимеризацию альгината с помощью альгинат-лиазы.

Ген альгинат-лиазы был выделен из Flavobacterium sp., грамотрицательной почвенной бактерии, активно вырабатывающей этот фермент. На основе E. Coli был создан банк генов Flavobacterium sp и проведен скрининг тех из них, которые синтезируют альгинат-лиазу, путем высевания всех клонов на твердую среду, содержащую альгинат, с добавлением ионов кальция. В таких условиях весь альгинат, находящийся в среде, за исключением того, который окружает продуцирующие альгинат-лиазу колонии, образует сшивки и и становится мутным. Гидролизованный альгинат теряет способность к формированию сшивок, поэтому среда вокруг синтезирующих альгинат-лиазу колоний остается прозрачной. Анализ клонированного фрагмента ДНК, присутствующего в одной из положительных колоний, показал наличие открытой рамки считывания, кодирующей полипептид молекулярной массой около 69000 Дальтон. Более детальные биохимические и генетические исследования показали, что этот пептид, по-видимому, является предшественником трех альгинат-лиаз, вырабатываемых Flavobacterium sp. Сначала какой-то протеолитический фермент отрезает от него N-концевой пептид массой около 6000. Оставшийся белок молекулярной массой 63000 способен деполимеризовать альгинат, вырабатываемый как бактериями, так и морскими водорослями. При его последующем разрезании образуется продукт молекулярной массой 23000, деполимеризующий альгинат морских водорослей, и фермент молекулярной массой 40000, разрушающий альгинат бактерий. Для получения больших количеств фермента молекулярной массой 40000 кодирующую его ДНК амплифицировали методом полимеразной цепной реакции, а затем встраивали в выделенный ген B. subtilis плазмидный вектор, несущий ген, кодирующий сигнальный пептид a-амилазы B. subtilis. Транскрипцию контролировали при помощи системы экспрессии гена пенициллиназы. При трансформировании клеток B. subtilis полученной плазмидой и высевании их на содержащую альгинат твердую среду с добавлением ионов кальция образовались колонии с большим ореолом. Когда такие колонии выпащивали в жидкой среде, рекомбинантная альгинат-лиаза выделялась в культуральную среду. Последующие тесты показали, что этот фермент способен эффективно разжижать альгинаты, синтезируемые слизистыми штаммами Pseudomonas aeruginosa, которые были выделены из легких больных муковисцидозом. Для того, чтобы определить, целесообразно ли проводить клиническое тестирование рекомбинантной альгинат-лиазы, нужны дополнительные исследования [1, 215].

Моноклональные антитела как лекарственные средства.

Риск, связанный с использованием антител не позволяет широко применять метод терапии, основанный на использовании антисыворотки. Дело в том, что в организме больного ччасто вырабатываются собственные антитела на чужеродные белки, присутствующие в цельной или частично очищенной антисыворотке, и ее повторное введение в случае сенсибилизации организма может привести к развитию анафилактического шока и гибели пациента.

С развитием гибридомной технологии вновь появилась надежда на то, что антитела можно будет использовать в качестве терапевтических средств для поддержания постоянного уровня чистых моноспецифичных антител в организме. Однако остаютяс проблемы,связанные с риском развития иммунного ответа и анафилаксии: ведь в организме больного могут вырабатываться собственные антитела на детерминанты моноклональных антител мыши. Поэтому основная задача в настоящее время состоит в том, чтобы разработать методы получения моноклональных анител человека, обладающих как специфическими иммунотерапевтическими свойствами, так и пониженной иммуногенностью [2, 31].

Структура и функция антител

Молекула антитела (иммуноглобулин) состоит из двух легких (L) и двух тяжелых (H) белковых цепей, которые соединены водородными связями и расположены в строго определенных местах и дисульфидными мостиками. N-концевые участки L- и H- цепей образуют антигенсвязывающий сайт. Отдельные домены молекулы антигена выполняют различные функции, что облегчает манипуляции с генами антител. Антигенсвязывающие сайты состоят из трех участков, определяющих комплементарность антител к антигену (CDR), и образующих вариабельные области (V_H и V_L) области на N-концах L- и H- цепей. Для CDR характерна очень высокая изменчивость последовательности аминокислот, поэтому их еще называют гипервариабельными доменами. Помимо вариабельных (V_H и V_L), каждая L- цепь содержит одну константную область, или домен (C_L), а каждая H- цепь—три константных области, или домена (C_H₁, C_H₂,C_H₃).

После связывания антигена с интактным антителом запускаются реакции иммунного ответа: активируется система комплемента, запускается реакция опосредованной цитотоксичности, разрушение фагоцитами комплекса антиген-антитело.

Профилактика отторжения трансплантированных органов.

В 1970-х гг. были пересмотрены взгляды на пассивную иммунизацию: ее стали считать профилактическим средством борьбы с отторжением трансплантированных органов. Предлагалось вводить пациентам специфические антитела, которые будут связываться с лимфоцитами определенного типа, уменьшая иммунный ответ, направленный против пересаженного органа.

Первыми веществами, рекомендованными Департаментом по контролю за качеством пищевых продуктов, медикаментов и косметических средств (США) для использования в качестве иммуносупрессоров при пересадке органов у человека, были моноклональные антитела мыши ОКТ3. За отторжение органов отвечают так называемые Т-клетки—лимфоциты, дифференцирующиеся в тимусе. ОКТ3 связываются с рецептором, находящимся на поверхности любой Т-клетки, который называется CD3. Это предупреждает развитие полного иммунного ответа и отторжение трансплантированного органа. Подобная иммуносупрессия весьма эффективна, хотя и оказывает некоторые побочные действия, например вызывает лихорадку и приводит к появлению сыпи.

Лекарственные вещества, связанные с моноклональными антителами.

Лекарственные вещества, проявляющие высокую активность при тестировании in vitro (обычно в культуре клеток), зачастую оказываются значительно менее эффективными in vitro. Кажущееся снижение их активности объясняется тем, что они не достигают органа или клетки-мишени в нужной концентрации. Увеличение дозы принимаемого препарата не решает проблему, поскольку при этом часто возникают побочные эффекты. Более того, чтобы избежать таких эффектов, многие терапевтические средства заведомо вводят в дозах, не достигающих оптимальных, что дополнительно снижает их эффективность. Для облегчения доставки лекарственного вещества к месту его действия используют несколько приемов:

I. Заключают лекарственное вещество в особые частицы – липосомы, липидная оболочка которых имеет высокое сродство к нужным органам.

II. Встраивают гены специальных токсинов в инфильтрующие опухоль лимфоциты, которые высвобождают эти токсины непосредственно в опухоли.

III. Присоединяют молекулы лекарственных веществ к моноклональным антителам, специфичным по отношению к белкам,находящихся на поверхности строго определенных клеток, например, опухолевых.

Используют лекарственные вещества в неактивной форме, переводя их в активное состояние при помощи ферментов. Чтобы такое превращение происходило только вблизи клетки-мишени, фермент присоединяется к моноклональному антителу, специфичному к поверхностному антигену этой клетки.

Для эффективной работы последней из описанных систем необходимо, чтобы моноклональное антитело, связанное с ферментом, переводящим лекарственное вещество в активную форму, было в достаточной степени очищено и имелось в нужном количестве и связывалось с высокоспецифичным для клетки-мишени белком, кроме того, чтобы необходимо, чтобы моноклональное антитело было стабильно в физиологических условиях, но в то же время быстро выводилось из кровотока и при необходимости могло проникать в опухолевую ткань, обеспечивая действие препарата на все ее клетки. В этом случае мишенями оказываются строго определенные клетки, что позволяет использовать лекарственное вещество в гораздо меньших дозах, чем при прямом введении. Применение в такой системе моноклональных антител мыши может приводить к развитию иммунного ответа, поэтому очень важно использовать фрагменты антител человека или антител, максимально сходных с ними по структуре.

Наиболее частой причиной смерти в странах Северной Америки и Европы является тромбоэмболия мозовых или сердечных артерий. Тромб состоит из молекл фибрина, фактора свертывающей системы крови, образующего сеть в ответ на повреждение сосудистой стенки. В норме молекулы фибрина в образовавшемся тромбе расщепляются с помощью плазмина - сериновой протеиназы, которая образуется из плазминогена под действием активатора. Однако нередко эта биологическая система работает недостаточно эффективно, что приводит к закупорке артерий. В таких ситуациях для повышения уровня плазмина в крови было предложено использовать в качестве терапевтического средства активатор плазмина.

Однако плазмин способен и разрушать и предшественник фибрина фибриноген, и если уровень фибриногена в результате терапии с использованием активатора плазминогена снизится слишком сильно, могут произойти обширные внутренние кровотечения. Это привело к необходимости создания тромболитических препаратов, разрушающих только фибрин в тромбе. Исходили из того, что если к активатору плазминогена пришить антитело, специфичное к фибрину, то будет происходить только локальное повышение концентрации плазмина вблизи тромба. Для проверки этой гипотезы тканеспецифичный активатор плазминогена был присоединен к моноклональному антителу, специфичному в отношении фибрина. Испытания на модельных системах показали, что комплекс присоединялся к сгусткам крови и лизировал их, не вызывая значительного разрушения фибриногена. Были созданы и другие типы коньюгатов антитело-активатор плазминогена, тоже приводящие к локальному образованию плазмина, разрушающего кровяные сгустки [1, 319].

Моноклональные антитела человека

Несмотря на кажущуюся перспективность иммунотерапии, этот метод имеет и ряд ограничений, связанных с применением моноклональных тел животных и процедурой присоединения к ним нужных молекул. Сам процесс химического присоединения весьма неэффективен, происходит присоединение случайным образом, а. кроме того, при этом может снижаться ферментативная активность активатора плазминогена или других веществ используемых для терапии. И наконец, если предполагается многократное введение препарата, необходимо использовать антитела человека, а не животных, чтобы предотвратить возникновение перекрестных иммунных реакций и сенсибилизацию пациента.

Создание специфических антител, не вызывающих перекрестных реакций, представляет собой довольно трудную задачу, поскольку получение антител человека путем традиционной гибридомной технологии сталкивается с рядом проблем:

I. Хромосомы человека в клетках, полученных слиянием лимфоцитов человека с клетками миеломы мыши, нестабильны, и поэтому трудно получить клетки, способные вырабатывать моноклональные антитела человека.

II. Пока не удалось получить эффективные клеточные линии миеломы человека, которые могли бы заменить мышиные.

III. Иммунизация человека различными антигенами не проводится по соображениям эического характера.

Таким образом, для получения антител человека необходимо разрабатывать другие подходы.

В одной из схем В-лимфоциты человека, активно продуцирующие специфические антитела, обработали флуоресцентно меченным антигеном, затем с помощью клеточного сортера провели обогащение образца В-лимфоцитами, вырабатывающими эти антитела. Поскольку В-клетки плохо растут в культуре, для улучшения роста их трансформировали вирусом Эпштейна-Барр. Некоторые клоны трансформированных В-клеток вырабатывают моноклональные антитела человека, взаимодействующие с селектирующим антигеном. К сожалению, выход моноклональных антител был небольшим и они обладали низкой анигенсвязывающей активностью. К тому же вероятность того, что в неиммунизированном организме найдутся секретирующие антитела клетки, которые будут распознавать селектирющий антиген, очень мала.

Еще один подход заключается во введении иммунных клеток человека мутантным мышам, которые практически лишены собственной иммунной системы. После трансплантации стволовых клеток человека таким мышам, страдающим тяжелым сочетанным иммунодефицитом, они приобретают клетки иммунной системы человека и в ответ на введение антигена могут вырабатывать антитела человека.

Предпринимаются попытки ввести зародышам мышей гены иммуноглобулинов человека с целью создания трансгенных мышей, которые в ответ на иммунизацию конкретным антигеном смогут вырабатывать иммуноглобулины человека. Чтобы получить от трансгенных животных клетки, секретирующие специфические моноклональные антитела, можно использовать стандартную гибридомную технологию, затем провести скрининг таких положительных клеточных линий и определить, какие из них вырабатывают антитела, кодируемые генами иммуноглобулинов человека. Недавно появилось сообщение о том, что уже получена трансгенная мышь, экспрессирующая нативные формы тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов человека.

Трансплантация стволовых клеток иммунной системы человека мышам с сочетанным иммунодефицитом и получение линий трансгенных мышей – весьма трудоемкие способы производства моноклональных антител человека. Поэтому в настоящее время ученые пытаются создать генноинженерные методы получения антител человека, которые можно использовать в качестве терапевтических средств, и эффективных бифункциональных белков, пособных связываться с мишенью и разрушать ее [4, 113].

Заключение

С помощью клонирования специфических генов и последующей их экспрессии в бактериях получен целый ряд белков, которые можно будет использовать в качестве лекарственных препаратов.

С развитием технологии рекомбинантных ДНК и разработкой способов получения моноклональных антител, а также с установлением стуктуры и функций иммуноглобулинов появился интерес к использованию специфических антителдля лечения различных заболеваний.

Работа с генами антител облегчается тем, что отдельные домены антител выполняют разные функции.

Генноинженерные методы позволяют получить уникальные лекарственные средства, которые могут быть наработаны в больших количествах с помощью биотехнологических методов.

Литература

1. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. М.: Мир, 2002, 590стр.

2. Егоров Н.С., Олескин А.В., Самуилов В.Д. Проблемы и перспективы биотехнологии Высшая школа; 1987; 159стр.

3. Быков В.А., Манаков М.Н., Панфилов В.И. Производство белковых веществ1987; 142стр.

4. Дебабов В.Г., Лившиц В.А Современные методы создания промышленных штаммов микроорганизмов. Высшая школа; 1988; 208стр.

5. Быков В.А., Крылов И.А., Манаков М.Н. Микробиологическое производство биологически активных веществ и препаратов. Высшая школа; 1987; 143стр.