Фитохимический анализ травы буквицы лекарственной с целью создания эффективной лекарственной формы

Панкратова О.Г.

Снижение аппетита у детей и крайнее его проявление – анорексия, в последнее время является одной из наиболее частых причин для обращения к врачам-педиатрам. Более того, анорексия является не только медицинской, но и глобальной социально-экономической проблемой [6].

Для лечения анорексии в настоящее время в основном используются препараты, стимулирующие аппетит, относящиеся к растительным горечам – настойка полыни, подорожника, аира [5].

Так как в настоящее время круг лекарственных препаратов повышающих аппетит ограничен, актуальной является проблема поиска и создания новых лекарственных средств обладающих возбуждающим аппетит действием на основе горечей.

В этой связи определённый интерес представляет широко распространённое во флоре Белгородской области растение – буквица лекарственная – Betonica officinalis, издавна применяемое в отечественной народной медицине как эффективное средство, стимулирующее аппетит [4].

На сегодняшний день трава буквицы лекарственной не используется в отечественной научной медицине, однако является официнальным сырьём в ряде Европейских стран, таких как Германия, Франция, Болгария, что привлекло наше внимание и позволило рассмотреть возможность разработки лекарственных форм на её основе [7].

По литературным данным зарубежных исследователей трава буквицы лекарственной содержит горькие и дубильные вещества, что обуславливает ее горько-вяжущий вкус; азотистые основания – бетоницин и стахидрин обладающие кровоостанавливающим действием, флавоноиды, эфирные масла, смолы, микроэлементы (калий, марганец, железо, барий, селен, свинец, бор, алюминий, хром, цинк и др.), витамины С и К [7]. Однако данное растение, произрастающее в отечественной флоре, изучено недостаточно [2].

Целью настоящей работы является изучение химического состава действующих биологически активных веществ буквицы лекарственной флоры Белгородской области.

Для изучения химического состава данного объекта использовано воздушно-сухое сырьё травы буквицы лекарственной (Betonica officinalis), собранное в фазу цветения растения на территории Ботанического сада Белгородского государственного университета.

Согласно литературным данным основными веществами, обусловливающими горький вкус буквицы лекарственной, являются иридоидные гликозиды [7].

Для выделения иридоидных гликозидов исследуемое сырьё экстрагировали спиртом этиловым 96%. Полученную сумму сгущали, разбавляли 4-х кратным количеством воды, выпавший осадок отфильтровывали. Фильтрат многократно обрабатывали тетрахлорметаном, порциями по 20 мл для очистки от липофильных веществ. Из полученной суммы, фенольные соединения осаждали свинца ацетатом. Осадок отфильтровывали, избыток свинца ацетата удаляли раствором натрия сульфата. К фильтрату добавляли порошок активированного угля. Спустя 24 часа жидкость декантировали и очищенную сумму иридоидных гликозидов вымывали спиртом этиловым 96%. Полученную фракцию сгущали.

Очищенную сумму иридоидов наносили в количестве 5 мкл с помощью аппликатора АПА на пластинку «Sorbёl», хроматографировали в системе растворителей спирт бутиловый – кислота уксусная – вода (63:10:27). В качестве проявителя использовали реактив Шталя (0,5 мл альдегида анисового, 10 мл кислоты ледяной уксусной, 85 мл спирта этилового и 5 мл кислоты серной концентрированной) [3]. После опрыскивания пластинку нагревали в сушильном шкафу при температуре 105ºС. Детекцию проводили в видимом свете, при этом иридоиды проявлялись в виде 2-х пятен тёмно-синего цвета со значениями Rf 0,3; 0,41.

Таким образом, можно предположить, что горький вкус буквицы лекарственной в определённой мере связан с присутствием в ней иридоидных гликозидов.

Для изучения качественного состава флавоноидов в траве буквицы лекарственной также использован метод ТСХ. Для выделения суммы флавоноидов воздушно-сухое сырьё экстрагировали спиртом этиловым 96%, сгущали, разбавляли 4-х кратным количеством воды, фильтровали. Фильтрат очищали тетрахлорметаном. Из полученной суммы флавоноиды извлекали этилацетатом. Этилацетатную фракцию сгущали. Пробу полученного извлечения наносили в количестве 3 мкл с помощью аппликатора АПА на пластинку «Sorbёl» и хроматографировали в системе растворителей спирт бутиловый – кислота уксусная – вода (4:1:1). Хроматографирование осуществляли в присутствии вещества свидетеля рутина. Флавоноиды проявляли парами аммиака и опрыскиванием 3% раствором алюминия хлорида. В ходе эксперимента было установлено, что в траве буквицы лекарственной содержится 4 флавоноида со значениями Rf 0,45; 0,6; 0,74, 0,86. Вещество со значением Rf 0,45 совпало с образцом – свидетелем рутина.

Согласно современной НД количественная оценка растительного сырья содержащего иридоидные гликозиды по данной группе веществ не проводится, так как существующие методики маловоспроизводимы и отличаются низкой чувствительностью. Поэтому стандартизацию сырья содержащего горечи про-326 водят по другим классам веществ, позволяющим адекватно оценить его качество. В этом отношении одним из наиболее репрезентативных классов веществ являются флавоноиды.

Поскольку одним из компонентов суммы флавоноидов в траве буквицы лекарственной является рутин, следовательно, количественное определение суммы флавоноидов проводили в пересчёте на данный компонент.

В основу количественного определения флавоноидов положен метод дифференциального спектрофотометрического анализа в спиртовом извлечении из сырья. В качестве растворителя выбран спирт этиловый 70%, при соотношении сырье – растворитель 1:100, время экстракции 30 минут, количество повторностей экстрагирования – 6. Метод основан на химическом взаимодействии флавоноидов с алюминия хлоридом безводным в среде кислоты хлористоводородной разведенной с образованием окрашенных продуктов – хелатных комплексов. У спиртовых извлечений из исследуемых образцов максимум поглощения при добавлении A1C13 + HC1 находился при 405-412нм. В этой же области находится максимум поглощения комплекса рутина с алюминия хлоридом. Добавление кислоты хлористоводородной позволяет подавить диссоциацию комплексов флавоноидов с алюминия хлоридом.

Рисунок 2. Спектр поглощения флавоноидов.

Параллельно измеряли оптическую плотность раствора Государственного стандартного образца рутина, приготовленного аналогично исследуемому раствору [1]. Установлено, что содержание флавоноидов в траве буквицы лекарственной находится в пределах 0,87 ± 0,207.

Выводы:

1. Проведено фитохимическое изучение травы буквицы лекарственной.

Обнаружено присутствие иридоидных гликозидов и флавоноидов.

2. Предложена стандартизация сырья травы буквицы лекарственной по количественному содержанию флавоноидов. Содержание суммы которых в траве буквицы лекарственной составило 0,87 ± 0,207.

Список литературы

1. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. / МЗ СССР. – 11 – е изд., доп. – М.: «Медицина», 1991. – 397с.

2. Губанов И.А. Дикорастущие полезные растения. – М.: «Издательство Московского университета», 1987. – 100 с.

3. Ковалев В.Н. Практикум по фармакогнозии. Учебное пособие для студентов высших учебных заведений. – Харьков: «Золотые страницы», 2004. – 510с.

4. Ковалева Н. Г. Лечение растениями. – М: «Медицина», 1972. – 560с.

5. Машковский М.Д. Лекарственные средства. – 14 – изд., доп. – М.: «Новая волна», 2002. – 540с.

6. Хайтович Н.В. Клиническое питание в педиатрии // Здоровье Украины. – 2007. – 169. – Режим доступа: http://www.health-ua.com

7. Encyclopedie des Plantes Medicinales. - Laronsse, Milan, 1997. – 720 с.