<< Пред. стр. 81 (из 116) След. >>
Список литературы по разделу
давлением, что достигается введением в бюретку стеклянного
капилляра внешним диаметром не более 1 мм, укрепленного при помощи
каучуковой пробки в верхнем отверстии бюретки (по принципу сосуда
Мариотта). Длина капилляра должна быть такова, чтобы нижний его
конец доходил до уровня нижнего деления бюретки. Скорость
вытекания жидкости из бюретки регулируют при помощи зажима,
наложенного на каучуковую трубку, или стеклянного крана таким
образом, чтобы в вену животного в 1 мин поступал 1 мл испытуемого
раствора. Введение раствора проводят до наступления остановки
сердца. Длительность опыта должна составлять не менее 30 и не
более 55 мин. Момент остановки сердца определяют по исчезновению
сердечного толчка и контролируют последующим вскрытием грудной
клетки. При наличии патологических изменений в органах опыт в
расчет не принимают.
Оценку активности испытуемых препаратов можно проводить 2
способами: 1) по сравнению со стандартным образцом; 2) в кошачьих
единицах действия (КЕД).
Оценка активности испытуемого препарата
по сравнению со стандартным образцом
В опыт берут не менее 12 кошек - по 6 кошек для испытуемого
препарата и стандартного образца. Данные, полученные при
биологическом испытании стандартного образца, могут быть
использованы для расчетов в последующих опытах в течение 15 сут
без повторного испытания.
Из полученных в опыте данных вычисляют величину смертельной
дозы препарата для каждого животного в миллилитрах на 1 кг массы.
_
Находят величину средней смертельной дозы для стандартного (Yc) и
_
испытуемого (Yи) препаратов, а также стандартную ошибку по
формулам I.1.2 и I.1.9 статьи "Статистическая обработка
результатов химического эксперимента и биологических испытаний"
(ГФ XI, вып. 1, с. 199).
Результаты опытов удовлетворяют требованиям метода, если
отношение стандартной ошибки к среднему значению не превышает
5,7%. В противном случае необходимо увеличить число опытов.
Испытуемый препарат считают удовлетворяющим требованиям, если
отношение средних смертельных доз испытуемого препарата и
стандартного образца составляет 90-110%, а их разность не
превышает величины s х t(P, f).
d
Стандартную ошибку разности s вычисляют по формуле I.4.4 (ГФ
d
XI, вып. 1, с 212). Критическое значение t(P, f) находят по
таблице значений t(P, f) из той же статьи "Статистическая
обработка результатов химического эксперимента и биологических
испытаний" (с. 249) при уровне значимости 5%, что соответствует
уровню достоверности 95%. Значение величины t(P, f) зависит от
так называемого числа степеней свободы (f), которое равно общему
_ _
числу опытов, использованных для вычисления Yс и Yи, уменьшенному
на 2.
Пример расчета:
------------------------------------------------------------------
| | Стандартный образец | Испытуемый препарат |
| |-------------------------------+----------------------------|
| N | мл/кг|отклонения| квадрат | мл/кг|отклонения|квадрат |
|п/п| (Yс) |от средней| отклонений | (Yи) |от средней|отклонений|
| | | _ | _ 2 | | _ | _ 2|
| | |(Yс - Yс) | (Yс - Yс) | |(Yи - Yи) |(Yи - Yи) |
|---+------+----------+-------------+------+----------+----------|
|1 | 15,0 | 2,0 | 4,0 | 16,0 | 2,5 | 6,25 |
|2 | 16,3 | 0,7 | 0,49 | 17,1 | 1,4 | 1,96 |
|3 | 18,2 | 1,2 | 1,44 | 20,0 | 1,5 | 2,25 |
|4 | 17,8 | 0,8 | 0,64 | 19,5 | 1,0 | 1,0 |
|5 | 17,0 | 0 | 0 | 20,0 | 1,5 | 2,25 |
|6 | 17,7 | 0,7 | 0,49 | 18,4 | 0,1 | 0,01 |
------------------------------------------------------------------
_ _ 2
Yс = 17,0 мл/кг; (Yс - Yс) = 7,06;
_ _ _ 2
Yи = 18,5 мл/кг; (Yи - Yи) = 13,72;
---------
_ / 7,06 ------
SYс = +/- /----------- = +/- \/ 0,235 = +/- 0,48 мл/кг;
\/ 6 х (6 - 1)
---------
_ / 13,72 ------
SYи = +/- /----------- = +/- \/ 0,457 = +/- 0,68 мл/кг.
\/ 6 х (6 - 1)
Далее находят отношение стандартной ошибки к среднему значению
для стандартного и испытуемого препаратов соответственно.
_
SYс х 100 0,48 х 100
--------- = +/- ----------- = +/- 2,8%;
_
Yс 17,0
_
SYи х 100 0,68 х 100
--------- = +/- ----------- = +/- 3,68%.
_
Yи 18,5
Из расчетных данных видно, что эти величины меньше 5,7%.
Следовательно, число проведенных опытов является достаточным и
можно вести расчет дальше.
Активность испытуемого препарата по отношению к стандартному
образцу:
17,0 х 100
---------- = 91%.
18,5
Различие средних: 18,5 - 17,0 = 1,5 мл/кг.
Стандартную ошибку разности находят по формуле I.4.4 (ГФ XI,
вып. 1, с. 212).
-------------
_ _ / 7,06 + 13,72
s = SYс - Yи = +/- / ------------- = +/- 0,8 мл/кг.
d \/ 12 - 2
Величина t при 12 - 2 = 10 равна 2,23 [см. таблицу значений
t(Р, f); ГФ XI, вып. 1, с. 249].
Отсюда s х t = +/- 2,23 х 0,8 = +/- 1,78 мл/кг.
d
Поскольку разность средних (1,5 мл/кг) меньше величины
s х t(1,78 мл/кг), а активность испытуемого препарата отличается
d
от активности стандартного образца на 9%, испытуемый препарат
следует считать удовлетворяющим по своей активности предъявляемым
требованиям.
Определение активности испытуемого препарата в КЕД
Для выражения активности испытуемого препарата в кошачьих
единицах действия (КЕД) расчет проводят для каждого животного по
формуле:
К х m
А = -------
а
где К - разведение испытуемого препарата; m - масса животного в
килограммах; а - доза разведенного препарата в миллилитрах.
Из данных, полученных в опытах, выводят среднее число КЕД и
вычисляют (в КЕД и процентах) отклонения результатов отдельных
опытов от среднего числа КЕД.
Результаты опытов удовлетворяют требованиям метода, если
найденное среднее отклонение от среднего числа КЕД будет меньше
максимально допустимого отклонения для данного числа опытов,
указанного в табл. 10.
Таблица 10
Максимально допустимое отклонение
отдельных опытов от их средней
------------------------------------------------------------------
|Число | Отклонение, % | Число | Отклонение, % |
|опытов| | опытов | |
|------+----------------------+------------+---------------------|
| 3 | 9,4 | 7 | 16,3 |
| 4 | 11,5 | 8 | 17,6 |
| 5 | 13,3 | 9 | 18,9 |
| 6 | 14,9 | 10 | 20,0 |
------------------------------------------------------------------
Из табл. 10 следует, что испытания можно проводить на 3 кошках
(минимальное число опытов), но только в том случае, если
полученное в опытах отклонение будет меньше 9,4%. В противном
случае число опытов надо увеличить.
Пример расчета. Определение числа КЕД для раствора строфантина
К 0,05% для инъекций.
--------------------------------------------------------------------
| N | Масса | Разведение | Доза,|Число КЕД| Отклонение |
|п/п|животного,|раствора для| мл | | от средней |
| | кг | инъекций | | |---------------------|
| | | | | | КЕД | % |
|---+----------+------------+------+---------+----------+----------|
|1 | 2,63 | 1:50 | 37 | 3,55 | + 0,22 | + 6,6 |
|2 | 2,56 | 1:50 | 39 | 3,28 | - 0,05 | - 1,5 |
|3 | 2,22 | 1:50 | 35 | 3,17 | - 0,16 | - 4,8 |
--------------------------------------------------------------------
Среднее число КЕД = 3,33.
В. МЕТОД БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ
СЕРДЕЧНЫХ СРЕДСТВ НА ГОЛУБЯХ
Отбор голубей и их содержание
Для опытов отбирают беспородных здоровых голубей массой
280-400 г, находившихся в условиях лабораторного содержания в
течение 5-7 сут. За 18-24 ч до начала опыта птиц лишают пищи, но
не воды.
Техника испытания и принцип расчета
Опыт проводят под легким тиопентал - натриевым наркозом (35
мг/кг внутримышечно в лапку). Наркотизированных голубей
привязывают к станку для мелких животных в положении на спине
таким образом, чтобы голова голубя находилась ниже туловища (во
избежание попадания в дыхательные пути слизи и рвотных масс). С
внутренней стороны крыла удаляют перья, находят и отсепаровывают
вену крыла. В вену вводят металлическую канюлю (затупленная
инъекционная игла N 19-22), соединенную тонкой каучуковой трубкой
с градуированной бюреткой вместимостью 5 мл, имеющей деления 0,05
мл. Бюретку предварительно наполняют раствором испытуемого
препарата, приготовленным на 0,9% растворе натрия хлорида.
Испытуемый раствор вводят отдельными дозами по 0,3 мл через каждые
5 мин до наступления остановки сердца голубя. Остановку сердца
определяют по характерному изменению положения головы и шеи голубя
и контролируют последующим вскрытием грудной клетки. Длительность
опыта должна составлять не менее 65 и не более 95 мин.
Голуби, смерть которых наступает в другие сроки, в расчет не
принимаются. В течение опыта голубю вводят не менее 13 и не более
19 доз (0,3 мл) испытуемого раствора.
Испытание обычно проводят на 6 голубях.
Результаты опытов могут быть использованы для расчета
биологической активности лишь в том случае, если в одной и той же
серии опытов расхождение между максимальными и минимальными
числами введенных доз не превышает 4, а общее число доз не выходит
за установленные пределы (13-19). В противном случае увеличивают
количество подопытных голубей или повторяют опыт с новой
концентрацией испытуемого раствора. Оценку активности испытуемых
препаратов можно проводить 2 способами: 1) по сравнению со
стандартным образцом; 2) в голубиных единицах действия.
Оценка активности испытуемого препарата
по сравнению со стандартным образцом
В опыт берут не менее 12 голубей - по 6 голубей для
стандартного образца и испытуемого препарата.
Данные, полученные при биологическом испытании стандартного
образца, могут быть использованы для расчета и последующих опытов
в течение 30 сут без повторного испытания.
Из полученных в опыте со стандартным или испытуемым препаратом
данных вычисляют величину смертельной дозы препарата для каждого
голубя в миллилитрах на 1 кг массы.
Результаты опытов подвергают статистической обработке
аналогично результатам опытов на кошках.
Пример расчета при обработке данных - по общей статье
"Статистическая обработка результатов химического эксперимента и
биологических испытаний" (ГФ XI, вып. 1, с. 199).
------------------------------------------------------------------
| | Стандартный образец | Испытуемый препарат |
| |------------------------------+-----------------------------|
| N | число | число | квадрат | число | число | квадрат |
|п/п| доз | мл/кг | отклонений | доз | мл/кг |отклонений |
| | | (Yc) | _ 2 | | (Yи) | _ 2 |
| | | | (Yc - Yс) | | | (Yи - Yи) |
|---+--------+--------+------------+-------+---------+-----------|
|1 | 16 | 14,9 | 0,81 | 15 | 13,4 | 1,44 |
|2 | 17 | 17,4 | 2,56 | 15 | 15,0 | 0,16 |
|3 | 16 | 15,4 | 0,00 | 18 | 16,1 | 2,25 |
|4 | 18 | 14,4 | 1,96 | 17 | 15,3 | 0,49 |
|5 | 15 | 14,7 | 1,21 | 16 | 14,3 | 0,09 |
|6 | 14 | 18,0 | 4,84 | 18 | 13,5 | 1,21 |
------------------------------------------------------------------
Активность испытуемого препарата по отношению к стандартному
образцу:
_ _ 2 _ 2
Y = 15,8; (Yс - Yс) = 11,38; Yи = 14,6; (Yи - Yи) = 5,64;
-----------
_ / 11,38 ------
SYс = +/- /----------- = +/- / 0,379 = +/- 0,61 мл/кг;
\/ 6 x (6 - 1) \/
----------
_ / 5,64 ------
SYи = +/- /----------- = +/- / 0,188 = +/- 0,43 мл/кг;
\/ 6 x (6 - 1) \/
SYс х 100 0,61 х 100
--------- = +/- ------------ = +/- 3,8%;
_
Yс 15,8
_
SYи х 100 0,43 х 100
--------- = +/- ------------ = - 2,9%.
Yи 14,6
15,8 х 100
------------ = 108%.
14,6
Различие средних: 15,8 - 14,6 = 1,2 мл/кг.
---------------------
/ 11,38 + 5,64 12
s = +/- /-------------- х ----- = +/- 0,75 мл/кг.
d \/ 12 - 2 36
Величина t при 12 - 2 = 10 равна 2,23 [см. таблицу значений
t(P, f); ГФ XI, вып. 1, с. 249].
<< Пред. стр. 81 (из 116) След. >>
Список литературы по разделу