Белки: история исследования, химсостав, свойства, биологические функции

Страница 18

Приложение II

Открытие аминокислот в составе белков

Аминокислота	Год	Источник	Кто впервые выделил
1. Глицин	1820	Желатина	А.Браконно
2. Лейцин	1820	Мышечные волокна	А.Браконно
	1839	Фибрин, шерсть	Г.Мульдер
3. Тирозин	1848	Казеин	Ф.Бопп
4. Серин	1865	Шелк	Э.Крамер
5. Глутамино- вая к-та	1866	Растительные белки	Г.Риттхаузен
6. Аспарагино- вая к-та	1868	Конглутин, легумин	Г.Риттхаузен
7. Фенилаланин	1881	Ростки люпина	Э.Шульце, Й.Барбьери
8. Аланин	1888	Фиброин шелка	Т.Вейль
9. Лизин	1889	Казеин	Э.Дрексель
10. Аргинин	1895	Вещество рога	С.Хедин
11. Гистидин	1896	Стурин, гистоны	А.Коссель; С.Хедин
12. Цистин	1899	Вещество рога	К.Мёрнер
13. Валин	1901	Казеин	Э.Фишер
14. Пролин	1901	Казеин	Э.Фишер
15. Оксипролин	1902	Желатина	Э.Фишер
16. Триптофан	1902	Казеин	Ф.Гопкинс, Д.Кол
17. Изолейцин	1904	Фибрин	Ф.Эрлих
18. Метионин	1922	Казеин	Д. Мёллер
19. Треонин	1925	Белки овса	С.Шрайвер
20.Оксилизин	1925	Белки рыб	С.Шрайвер

Приложение III

Цветные реакции на белки

Цветные реакции применяются для установления белковой природы веществ, идентификации белков и определение их аминокислотного состава в различных биологических жидкостях. В клинической лабораторной практике эти методы используются для определения количества белка в плазме крови, аминокислот в моче и крови, для выявления наследственных и приобретенных патологий обмена у новорожденных.

Биуретовая реакция на пептидную связь.

В основе ее лежит способность пептидных связей (– CO–NH– ) образовывать с сульфатом меди в щелочной среде окрашенные комплексные соединения, интенсивность окраски которых зависит от длины полипептидной цепи. Раствор белка дает сине-фиолетовое окрашивание.

Реактивы: 1) яичный белок, 1% р-р (белок куриного яйца фильтруют через марлю и разводят дист-ой водой 1:10); 2) NaOH, 10% р-р; 3) Cu(OH)2, 1% р-р.

Ход определения. В пробирку вносят 5 капель р-ра яичного белка, 3 капли NaOH, 1 каплю Cu(OH)2, перемешивают. Содержимое пробирки приобретает сине-фиолетовое окрашивание.

Нингидриновая реакция.

Сущность реакции состоит в образовании соединения, окрашенного в сине-фиолетовый цвет, состоящего из нингидрина и продуктов гидролиза аминокислот. Эта реакция характерна для аминогрупп в a-положении, присутствующих в природных аминокислотах и белках.

Реактивы: 1) яичный белок, 1% р-р; 2) нингидрин, 0,5% водный р-р.

Ход определения. В пробирку вносят 5 капель р-ра яичного белка, затем 5 капель нингидрина, нагревают смесь до кипения. Появляется розово-фиолетовое окрашивание, переходящее с течением времени в сине-фиолетовое.

Ксантопротеиновая реакция.

При добавлении к р-ру белка конц-ой азотной к-ты и нагревании появляется желтое окрашивание, переходящее в присутствии щелочи в оранжевое. Сущность реакции состоит в нитровании бензольного кольца циклических аминокислот азотной к-ой с образованием нитросоединений, выпадающих в осадок. Реакция выявляет наличие в белке циклических аминокислот.

Реактивы: 1) яичный белок, 1% р-р; 2) конц. азотная к-та; 3)NaOH,10% р-р.

Ход определения. К 5 каплям р-ра яичного белка добавляют 3 капли азотной к-ты и (осторожно!) нагревают. Появляется осадок желтого цвета. После охлаждения добавляют (желательно на осадок) 10 капель NaOH, появляется оранжевое окрашивание.

Реакция Адамкевича.

Аминокислота триптофан в кислой среде, взаимодействуя с альдегидами кислот, образует продукты конденсации красно-фиолетового цвета.

Реактивы: 1) неразбавленные яичный белок, 2) конц. (ледяная) уксусная к-та; 3) конц. серная к-та.

Ход определения. К одной капле белка прибавляют 10 капель уксусной к-ты. Наклонив пробирку, осторожно по стенке добавляют по каплям 0,5 мл серной к-ты так, чтобы жидкости не смешивались. При стоянии пробирки на границе жидкостей появляется красно-фиолетовое кольцо.