<< Пред. стр. 59 (из 116) След. >>
Список литературы по разделу
моль/л) и доводят объем раствора той же кислотой до метки,
фильтруют. Оптическая плотность полученного раствора при длине
волны 465 нм должна быть не менее 1,3 и не более 1,5.
Приготовление раствора бромфенолового синего:
0,0075 г бромфенолового синего водорастворимого (ТУ
6-09-3719-83) растворяют в мерной колбе вместимостью 100 мл в 15
мл 95% спирта, прибавляют 2,5 мл ледяной уксусной кислоты,
перемешивают и доводят объем раствора водой до метки.
Приготовление натрий - цитратного буферного раствора рН 5,0: в
колбу вместимостью 1 л помещают 400 мл воды, 5 мл кислоты
хлористоводородной концентрированной, 41,7 г натрия цитрата,
перемешивают при нагревании до полного растворения, затем
прибавляют 1 г фенола, перемешивают, количественно переносят в
мерную колбу вместимостью 1 л и доводят объем раствора водой до
метки.
Раствор хранят при температуре от 4 до 10 град. С в течение 15
сут.
Приготовление нингидринового реактива: в сосуд из оранжевого
стекла вместимостью 1 л помещают 375 мл монометилового эфира
этиленгликоля (ТУ 6-09-08-4398-77), прибавляют 125 мл
натрий - ацетатного буферного раствора рН 5,5, при перемешивании
на магнитной мешалке пропускают азот в течение 10 мин, затем
прибавляют 10 г нингидрина и вновь пропускают азот в течение 10
мин, продолжая перемешивание на магнитной мешалке до полного
растворения нингидрина. После этого прибавляют 0,19 г олова
двухлористого 2-водного и перемешивают.
Хранят реактив в сосуде из оранжевого стекла при температуре
от 4 до 10 град. С не более 15 сут.
Приготовление натрий - ацетатного буферного раствора рН 5,5:
82 г натрия ацетата плавленого (ТУ 6-09-246-70) растворяют при
перемешивании в мерной колбе вместимостью 250 мл в 140 мл воды,
прибавляют 25 мл ледяной уксусной кислоты и доводят объем раствора
водой до метки.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЦИНКА В ПРЕПАРАТАХ ИНСУЛИНА
Спектрофотометрический метод. В две мерные колбы вместимостью
50 мл помещают: в одну - 5 мл препарата или раствора инсулина, или
1,5 мл надосадочной жидкости (для суспензии инсулина), в другую -
5 мл разбавленного раствора стандартного образца цинка. В каждую
колбу прибавляют по 10 мл буферного раствора (рН 9,0), 3 мл
раствора цинкона и доводят объем растворов водой до метки.
Растворы перемешивают и через 1 ч измеряют оптическую плотность на
спектрофотометре при длине волны 620 нм в кювете с толщиной слоя
10 мм по сравнению с контрольным раствором, приготовленным с теми
же реактивами.
Содержание цинка (X) в препарате или надосадочной жидкости в
миллиграммах на 100 ЕД инсулина вычисляют по формуле:
D1 х 0,001 х 50 х 2,5
Х = ----------------------
D0 х V
где D1 - оптическая плотность испытуемого раствора препарата или
надосадочной жидкости; D0 - оптическая плотность разбавленного
раствора стандартного образца цинка; 0,001 - содержание цинка в
миллиграммах в 1 мл измеряемого разбавленного раствора
стандартного образца цинка; 2,5 - количество препарата в
миллилитрах, содержащего 100 ЕД инсулина (при содержании инсулина
40 ЕД в 1 мл препарата); V - объем препарата, раствора инсулина
или надосадочной жидкости в миллилитрах, взятых для анализа.
Примечания. 1. Приготовление раствора инсулина: навеску
инсулина, содержащую 400 ЕД, растворяют в растворе
хлористоводородной кислоты (0,01 моль/л) в мерной колбе
вместимостью 10 мл и доводят объем раствора этим же раствором
хлористоводородной кислоты до метки.
2. Приготовление надосадочной жидкости суспензии: содержание
флакона (5 мл) тщательно перемешивают, вносят в центрифужную
пробирку и центрифугируют в течение 10 мин со скоростью 4000-6000
об/мин.
3. Приготовление раствора стандартного образца цинка: 0,4400 г
цинка сульфата растворяют в мерной колбе вместимостью 1 л в
небольшом количестве свежепрокипяченной и охлажденной воды и
доводят объем раствора этой же водой до метки. Раствор
стандартного образца цинка содержит 0,1 мг цинка в 1 мл.
Срок годности раствора 14 сут, хранение при температуре 4 - 8
град. С.
4. Приготовление разбавленного раствора стандартного образца
цинка: 10 мл раствора стандартного образца цинка помещают в колбу
вместимостью 100 мл и доводят объем раствора свежепрокипяченной и
охлажденной водой до метки. Разбавленный раствор стандартного
образца цинка содержит 0,01 мг цинка в 1 мл.
Раствор должен быть свежеприготовленным.
5. Приготовление раствора борной кислоты (0,2 моль/л) с калия
хлоридом. 12,3670 г перекристаллизованной борной кислоты и 14,9110
г калия хлорида растворяют в свежепрокипяченной и охлажденной воде
в мерной колбе вместимостью 1 л и доводят объем раствора этой же
водой до метки.
Срок годности раствора 30 сут, хранение при температуре 4 - 8
град. С.
6. Приготовление буферного раствора рН 9,0
(потенциометрически): 50 мл раствора борной кислоты (0,2 моль/л) с
калия хлоридом помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл,
прибавляют 21,3 мл раствора натра едкого (0,2 моль/л) и доводят
объем раствора свежепрокипяченной и охлажденной водой до метки.
Раствор должен быть свежеприготовленным.
7. Приготовление раствора цинкона: 0,13 г цинкона
(ТУ-6-0907-315-85 или фирмы "Хемапол", ЧССР) растирают в ступке с
2 мл раствора натра едкого (1 моль/л), количественно переносят в
мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора
свежепрокипяченной и охлажденной водой до метки и фильтруют.
Раствор должен быть свежеприготовленным.
Определение цинка в препаратах инсулина с протамином. 5 мл
тщательно перемешанного препарата помещают в мерную колбу
вместимостью 50 мл, доводят объем раствора водой до метки и
перемешивают; 5 мл полученного раствора и 5 мл разбавленного
раствора стандартного образца цинка помещают в две другие мерные
колбы вместимостью по 50 мл. В каждую колбу прибавляют по 1 мл
раствора хлористоводородной кислоты (0,1 моль/л), 10 мл буферного
раствора (рН 9,0), 1 мл раствора натра едкого (0,1 моль/л) и 2 мл
0,01% раствора трипсина. Растворы перемешивают и выдерживают 10
мин при комнатной температуре, затем в каждую колбу приливают по 3
мл раствора цинкона и доводят объем раствора водой до метки.
Полученные растворы перемешивают и через 1 ч измеряют оптическую
плотность, как указано выше.
Содержание цинка (X) в препарате в миллиграммах на 100 ЕД
инсулина вычисляют по формуле:
D1 х 0,001 х 50 х 2,5 х 50
Х = ----------------------------
D0 х 5 х 5
где D1 - оптическая плотность испытуемого раствора препарата; Dо -
оптическая плотность разбавленного раствора стандартного образца
цинка; 0,001 - содержание цинка в миллиграммах в 1 мл измеряемого
разбавленного раствора стандартного образца цинка; 2,5 -
количество препарата в миллилитрах, содержащего 100 ЕД инсулина
(при содержании инсулина 40 ЕД в 1 мл препарата).
Примечания. 1. Приготовление 0,01% раствора трипсина: 0,01 г
трипсина растворяют в растворе хлористоводородной кислоты (0,001
моль/л) в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят объем
раствора этим же раствором хлористоводородной кислоты до метки.
Раствор должен быть свежеприготовленным.
2. Приготовление раствора хлористоводородной кислоты (0,001
моль/л): 100 мл раствора хлористоводородной кислоты (0,01 моль/л)
точно отмеривают из бюретки в мерную колбу вместимостью 1 л. Объем
раствора в колбе доводят водой до метки.
Срок годности раствора 6 мес.
Метод атомной абсорбции. Определение цинка в препаратах
инсулина проводят на атомно - абсорбционных спектрофотометрах при
длине волны 214 нм в соответствии с ГФ XI (вып. 1, с. 42).
Цинк в инсулине. Готовят раствор инсулина в хлористоводородной
кислоте (0,01 моль/л) с содержанием 1 мг инсулина в 1 мл и
проводят определение.
Цинк в растворе. 5 мл препарата помещают в мерную колбу
вместимостью 25 мл, доводят объем раствора водой до метки и
проводят определение.
Общий цинк в суспензиях: 2,5 мл хорошо перемешанной суспензии
помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 0,5 мл
хлористоводородной кислоты (0,1 моль/л), доводят объем раствора
водой до метки и проводят определение.
Цинк в надосадочной жидкости. Содержимое флакона (5 мл)
тщательно перемешивают, вносят в центрифужную пробирку и
центрифугируют в течение 10 мин со скоростью 4000-6000 об/мин. В
мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,5 мл надосадочной
жидкости, доводят объем раствора водой до метки и проводят
определение.
Расчет содержания цинка в препаратах инсулина проводят по
градуировочной кривой.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНСЕРВАНТОВ В ГОРМОНАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТАХ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЕНОЛА
Метод броматометрического титрования. 5 мл препарата помещают
в коническую колбу вместимостью 150 мл с притертой пробкой,
прибавляют раствор 0,25 г калия бромида в 25 мл воды. 15 мл
(точный объем) раствора калия бромата (0,1 моль/л), 2,5 мл
разведенной серной кислоты перемешивают, закрывают колбу пробкой и
оставляют в темном месте на 15 мин. После этого к смеси прибавляют
1 г калия йодида, перемешивают, снова оставляют на 5 мин и титруют
раствором натрия тиосульфата (0,1 моль/л) (индикатор - крахмал).
Параллельно проводят контрольный опыт.
1 мл раствора натрия тиосульфата (0,1 моль/л) соответствует
0,001568 г фенола.
Содержание фенола в препарате в процентах (X) вычисляют по
формуле:
(а - б) х 0,001569 х 100
Х = --------------------------
в
где а - количество раствора натрия тиосульфата (0,1 моль/л),
пошедшее на титрование в контрольном опыте, в миллилитрах, б -
количество раствора натрия тиосульфата (0,1 моль/л), пошедшее на
титрование испытуемого препарата, в миллилитрах, в - количество
препарата, взятого для анализа, в миллилитрах.
Метод газовой хроматографии. Используют газовый хроматограф с
пламенно - ионизационным детектором, хроматографическая колонка
100х0,3 см, заполненная сорбентом с 5% полиэтиленгликоля 6000 или
20 М на промытом кислотой и силанизированном носителе "Хроматон N"
с размером частиц 0,125-0,250 мм (возможно применение других
носителей типа "Хромосорб", "Инертон" тех же квалификаций).
Температура колонки, узла ввода пробы, детектора 140, 200, 250
град. С соответственно. Скорость газа - носителя (азот) 20-50
мл/мин. Величина вводимой пробы (2-5 мкл) определяется
чувствительностью детектора.
Содержание фенола в препарате определяют методом абсолютной
калибровки или методом внутреннего стандарта, в качестве которого
используют бензиловый спирт (ГОСТ 8751-72, ч. д. а.).
При использовании метода внутреннего стандарта к препарату в
количестве около 2 г (точная навеска) прибавляют около 0,005 г
бензилового спирта (точная навеска), смесь перемешивают и
хроматографируют.
Содержание фенола в препарате в процентах (X) вычисляют по
формуле:
KS1P2 х 100
Х = ------------
S2P1
где S1 - площадь пика фенола; S2 - площадь пика бензилового
спирта; Р1 - навеска препарата в граммах; Р2 - навеска бензилового
спирта в граммах; К - калибровочный коэффициент.
Калибровочный коэффициент определяют на 3-4 калибровочных
смесях фенола и бензилового спирта.
Для метода абсолютной калибровки график строят по 4-5
калибровочным смесям с концентрацией фенола от 0,10 до 0,50%.
Примечание. 1. Определение калибровочного коэффициента (К):
фенол и бензиловый спирт, взятые в количествах около 0,125 г
(точные навески), помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл,
растворяют навески в 25-30 мл воды, доводят объем раствора водой
до метки и хроматографируют. Рассчитывают среднее значение
калибровочного коэффициента не менее чем из 3 определений по
формуле:
S2 x Рх
К = ---------,
S1 x P2
где Рх - навеска фенола в граммах.
2. Приготовление калибровочных смесей: 0,050; 0,100; 0,150;
0,200; 0,250 г фенола (точные навески) вносят соответственно в 5
мерных колб вместимостью 50 мл. Навески растворяют в 20 мл воды и
доводят объем раствора водой до метки. Срок годности растворов -
14 сут при хранении при температуре от 4 до 8 град. С.
3. Приготовление суспензий к анализу: во флакон с суспензией
вносят 1-2 капли хлористоводородной кислоты и встряхивают.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИПАГИНА
Метод газовой хроматографии. Используют газовый хроматограф с
пламенно - ионизационным детектором, хроматографическую колонку
50 х 0,3 см, заполненную сорбентом 5% неопентилгликольсукцината на
промытом кислотой и силанизированном носителе "Хроматон N" с
размером частиц 0,125-0,250 мм (возможно применение других
носителей типа "Хромосорб", "Инертон" тех же квалификаций).
Температура колонки, узла ввода пробы и детектора 170, 220, 240
град. С соответственно. Скорость газа - носителя (азот) 20-50
мл/мин. Пробу вводят непосредственно в хроматографическую колонку;
ее величина определяется чувствительностью детектора (2-5 мкл).
Содержание нипагина в препарате определяют методом абсолютной
калибровки или методом внутреннего стандарта, в качестве которого
используют нипазол (ТУ 6-09-4727-79).
При использовании метода внутреннего стандарта к препарату или
к подготовленной к анализу суспензии в количестве около 5 мл
(точная навеска) прибавляют 1 мл раствора внутреннего стандарта,
раствор тщательно перемешивают, отбирают пробу и хроматографируют.
Содержание нипагина в препарате в процентах (X) вычисляют по
формуле:
KS1 x P2
Х = --------- x 100,
S2 x P1
где S1 - площадь пика нипагина; S2 - площадь пика нипазола; Р1 -
навеска препарата в граммах; Р2 - навеска нипазола в граммах; К -
калибровочный коэффициент.
Калибровочный коэффициент определяют на 3-4 искусственных
смесях нипагина и нипазола с равными концентрациями компонентов.
Для метода абсолютной калибровки график строят по 4-5
искусственным смесям с концентрацией нипагина от 0,05 до 0,15%.
Примечания. 1. Определение калибровочного коэффициента:
нипагин и нипазол, взятые в количествах по 0,050 г (точные
навески), помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 5
мл спирта, растворяют и доводят объем раствора водой до метки и
хроматографируют. Рассчитывают среднее значение калибровочного
коэффициента не менее чем из 3 определений по формуле:
S2 x Рх
К = ---------,
S1 x P2
где Рх - навеска нипагина в граммах.
Раствор должен быть свежеприготовленным.
2. Приготовление калибровочных смесей: 0,025; 0,040; 0,050;
0,060; 0,075 г нипагина (точные навески) вносят соответственно в 5
мерных колб вместимостью 50 мл. В каждую колбу прибавляют по 2,5
мл 95% спирта, растворяют навеску и доводят объем раствора водой
до метки.
Раствор должен быть свежеприготовленным.
3. Приготовление раствора внутреннего стандарта: около 0,125 г
нипазола (точная навеска) вносят в мерную колбу с притертой
пробкой вместимостью 25 мл, прибавляют 10 мл 95% спирта,
<< Пред. стр. 59 (из 116) След. >>
Список литературы по разделу