<< Пред. стр. 60 (из 116) След. >>
Список литературы по разделу
растворяют и доводят объем раствора 95% спиртом до метки.
Срок годности раствора 14 сут при хранении при температуре от
4 до 8 град. С.
4. Приготовление суспензий к анализу: во флакон с суспензией
вносят 1-2 капли хлористоводородной кислоты и встряхивают.
МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ВИТАМИНОВ В ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ
1. Определение ретинола ацетата
и ретинола пальмитата (витамина А)
а) Точную навеску порошка растертых драже (не более 1 г) или 2
таблетки, покрытые оболочкой и растертые в порошок, количественно
переносят 15 миллилитрами предварительно свежепрокипяченной и
охлажденной до температуры 40 град. С воды в коническую колбу
вместимостью 100 мл, нагревают на водяной бане при температуре от
60 до 70 град. С при перемешивании в течение 5 мин, прибавляют 8
мл раствора аммиака и нагревают при той же температуре в течение
15 мин. Затем прибавляют 30 мл 95% спирта, 3 мл 50% раствора
едкого кали и нагревают в течение 30 мин на водяной бане с
обратным холодильником при температуре кипения смеси. Содержимое
колбы тотчас охлаждают до комнатной температуры, количественно
переносят 50 мл воды в делительную воронку и извлекают 150 мл
эфира для наркоза в течение 2 мин. В случае образования эмульсии
проводят дополнительное извлечение эфиром 3 раза по 25 мл.
Объединенные эфирные извлечения промывают сначала 30 мл воды,
затем 50 мл 4% раствора едкого кали и снова водой по 50 мл до
исчезновения щелочной реакции промывных вод (проба с
фенолфталеином). Промытые эфирные извлечения количественно
переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл, доводят объем
раствора эфиром до метки и перемешивают; 5 мл полученного раствора
помещают в коническую колбу вместимостью 50 мл. Эфир отгоняют в
токе азота или под вакуумом на водяной бане при температуре не
выше 40 град. С. Остаток растворяют в пропаноле - 2 до получения
концентрации витамина А около 2 мкг (6 ME) в 1 мл.
Измеряют оптическую плотность полученного раствора на
спектрофотометре при длинах волн 300, 310, 325, 334 нм в кювете с
толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют
пропанол - 2.
Отношение значения оптической плотности при длине волны 300 нм
к значению оптической плотности при длине волны 325 нм не должно
превышать 0,73.
Вычисляют оптическую плотность D325 (испр.) с поправкой на
сопутствующие витамину А примеси по следующему уравнению:
D325 (испр.) = 6,185 х D325 - 2,555 х D310 - 4,260 х D334,
где D325, D310 и D334 - оптические плотности испытуемого раствора
при соответствующих длинах волн.
Если D325 (испр.) не отличается от D325 больше чем на +/-5%,
то содержание витамина А в ME в одной таблетке или драже (X)
вычисляют по формуле:
D325 х 250 х V х 3330000 х б D325 х V х 915 х б
Х = ---------------------------- = --------------------
а х 5 х 100 х 1820 а
где D325 - оптическая плотность испытуемого раствора при длине
волны 325 нм; 250; 5 и V - разведения в миллилитрах; 3330000 -
количество витамина А в ME, соответствующее одному грамму 100%
ретинола; а - навеска препарата в граммах или количество таблеток,
покрытых оболочкой; б - средняя масса одного драже в граммах; 1820
1%
удельный показатель поглощения (Е ) 100% ретинола в пропаноле -
1 см
2 при длине волны 325 нм.
Если D325 (испр.) отличается от D325 больше чем на +/- 5%,
содержание витамина А в ME в одном драже или таблетке вычисляют по
вышеприведенной формуле, подставляя вместо D325 величину
D325 (испр.).
б) При наличии в составе испытуемого препарата
альфа - токоферола ацетата (витамина Е) дополнительно проводят
гидрирование. Для этого промытые эфирные извлечения, полученные,
как указано выше, упаривают в токе азота или под вакуумом на
водяной бане при температуре не выше 40 град. С. Остаток тотчас
растворяют в пропаноле - 2 до получения концентрации ретинола
около 20 мкг (60 ME) в 1 мл (раствор А).
15 мл раствора А переносят в колбу для гидрирования
вместимостью 50 мл, прибавляют около 0,2 г палладиевого
катализатора, перемешивают и гидрируют в течение 15 мин в приборе,
изображенном на рис. 5. <*>
--------------------------------
<*> Рис. 5. Прибор для гидрирования.
а - газометр с водородом; б - бюретка, снабженная тройным
краном; в - колба для гидрирования; г - магнитная мешалка.
(Рисунок не приводится).
При проведении гидрирования водород из газометра а забирают в
бюретку б, снабженную тройным краном и заполненную водой. Сначала
тройной кран поворачивают так, чтобы провести забор водорода из
газометра, после чего кран газометра закрывают, а тройной кран
бюретки поворачивают так, чтобы водород из бюретки поступал в
колбу для гидрирования, снабженную небольшой вводной трубкой.
Перемешивание раствора при гидрировании проводят с помощью
магнитной мешалки.
Для вытеснения воздуха из колбы через всю систему 3 раза
пропускают водород. После заполнения системы водородом колбу
закрывают пробкой, включают магнитную мешалку и ведут гидрирование
при комнатной температуре. Расход водорода на гидрирование
наблюдают по уменьшению объема водорода в бюретке.
Примечание. Проба на полноту гидрирования: 1 мл фильтрата
помещают в фарфоровую чашку и удаляют растворитель упариванием на
закрытой водяной бане. Остаток растворяют в 1 мл хлороформа,
прибавляют 5 мл раствора сурьмы хлорида; не должно появляться
синего окрашивания. В случае появления окраски гидрирование
продолжают в течение более длительного времени, прибавляя
катализатор.
По окончании гидрирования в колбу прибавляют 0,3 г силикагеля
марки КСМ или ШСМ, перемешивают и фильтруют; 3 мл фильтрата
помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора
пропанолом - 2 до метки и перемешивают (раствор Б).
3 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл,
доводят объем раствора пропанолом - 2 до метки и перемешивают
(раствор В).
Измеряют оптическую плотность раствора В на спектрофотометре
при длинах волн 300, 310, 325, 334 нм в кювете с толщиной слоя 10
мм.
В качестве раствора сравнения используют раствор Б.
Содержание витамина А в ME в одной таблетке или драже
вычисляют, как описано выше, введя в формулу расчета разведение в
пропаноле - 2.
Примечания. 1. При анализе таблеток, покрытых оболочкой,
средняя масса таблетки в формуле не учитывается.
2. При анализе препаратов, не содержащих аскорбиновую кислоту,
перед омылением прибавляют к испытуемой навеске 0,1 г аскорбиновой
кислоты.
3. 1 г 100% ретинола ацетата соответствует 2907000 ME. 1 г
100% ретинола пальмитата соответствует 1817000 ME.
4. Пропанол-2 (изопропиловый спирт) (х. ч.) при измерении
поглощения должен иметь величину оптической плотности, не
превышающую 0,01 в области от 320 до 350 нм и 0,05 - от 280 до 300
нм по сравнению с водой в кювете с толщиной слоя 10 мм.
5. Очистка азота: азот газообразный (ос. ч.) пропускают
последовательно через поглотители со щелочным раствором
пирогаллола А [5 г пирогаллола А (ч. д. а.) на 100 мл 20% раствора
едкого кали], концентрированной серной кислотой, стеклянной ватой
и плавленым кальция хлоридом.
6. Приготовление палладиевого катализатора: в трехгорлую колбу
вместимостью 1,5-2 л с мешалкой помещают 840 мл воды, 100 мл
концентрированного раствора аммиака и 210 г аммония карбоната
(х. ч. или ч. д. а.).
При непрерывном перемешивании реакционную массу нагревают до
температуры 50 град. С и в течение 30 мин прибавляют раствор,
полученный растворением 52,5 г кальция карбоната (ч. д. а.) в
смеси 130 мл концентрированной кислоты хлористоводородной с 130 мл
воды. Температуру реакционной массы поддерживают от 50 до 80 град.
С. Выделившийся белый осадок отфильтровывают и тщательно промывают
водой до исчезновения запаха аммиака. После этого осадок отжимают.
В колбу с суспензией свежеосажденного кальция карбоната в 400 мл
воды прибавляют при интенсивном перемешивании горячий раствор,
полученный растворением 5 г палладия хлорида (ч. д. а. или ч.) в
смеси 12 мл концентрированной хлористоводородной кислоты с 30 мл
воды. Смесь перемешивают 10 мин, затем нагревают от 80 до 85 град.
С и при этой температуре перемешивают в течение 15 мин. Горячую
смесь насыщают водородом (марки А) в течение 6 ч. Приготовленный
катализатор промывают водой до отсутствия ионов хлора. Получают
около 43 г палладированного кальция карбоната, который сушат при
температуре от 100 до 105 град. С до постоянной массы. Хранят в
банке оранжевого стекла при комнатной температуре. Годен в течение
3 мес.
2. Определение содержания витамина А
в жирах рыб и морских млекопитающих
Около 1,5 г жира (точная навеска) помещают в колбу
вместимостью 100 мл, прибавляют 0,1 г аскорбиновой кислоты, 30 мл
свежеприготовленного 10% спиртового раствора едкого кали и
нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 30
мин при температуре кипения смеси. Содержимое колбы тотчас
охлаждают, прибавляют 50 мл воды, переносят в делительную воронку
вместимостью 250 мл и трижды извлекают эфиром для наркоза: первый
раз 50 мл, второй и третий раз по 30 мл. Объединенные эфирные
извлечения промывают сначала 30 мл воды, затем 50 мл 4% раствора
едкого кали и снова водой от 30 до 40 мл до исчезновения щелочной
реакции промывных вод (проба с фенолфталеином). Промытые эфирные
извлечения медленно фильтруют через бумажный фильтр с 8 г
безводного натрия сульфата в колбу для отгона. Фильтр с натрия
сульфатом 3 раза промывают эфиром по 10 мл, который фильтруют в ту
же колбу. Эфир отгоняют в токе азота на водяной бане при
температуре не выше 40 град. С. Остаток растворяют в небольшом
объеме хлороформа для наркоза и разбавляют тем же хлороформом так,
чтобы в 1 мл раствора содержалось около 30 ME витамина А; 0,4 мл
полученного раствора переносят в кювету фотоэлектроколориметра с
толщиной слоя 10 мм и быстро прибавляют 4 мл хлороформного
раствора сурьмы хлорида, содержащего 2% уксусного ангидрида.
Измеряют оптическую плотность раствора на фотоэлектроколориметре
при длине волны около 620 нм. Показание прибора отмечают не
позднее чем через 5 с после прибавления в кювету хлороформного
раствора сурьмы хлорида.
По калибровочному графику находят содержание витамина А в
международных единицах в 1 мл испытуемого раствора.
Содержание витамина А в 1 г жира в международных единицах (МЕ)
(X) вычисляют по формуле:
CV
Х = ----,
а
где С - содержание витамина А в 1 мл раствора, найденное по
калибровочному графику, в международных единицах (МЕ); V -
разведение в миллилитрах; а - навеска в граммах.
Примечания. 1. Построение калибровочного графика: около 0,1 г
(точная навеска) раствора ретинола ацетата в масле активностью
100000 ME в 1 мл для инъекций с учетом фактического содержания
витамина А разводят в хлороформе для наркоза таким образом, чтобы
получить раствор, содержащий 100 ME витамина А в 1 мл. Затем из
него готовят последовательные разведения с содержанием витамина А
от 5 до 50 ME в 1 мл с интервалом 5 ME. Из каждого разведения
отбирают по 0,4 мл раствора и проводят колориметрическую реакцию
так же, как при анализе испытуемого раствора. Для построения
калибровочного графика откладывают по оси ординат найденные
значения оптической плотности, а по оси абсцисс - соответствующие
им количества витамина А в 1 мл раствора в международных единицах.
При смене реактивов (особенно раствора сурьмы хлорида)
калибровочный график проверяют, используя для этого
свежеприготовленные хлороформные растворы препарата витамина А,
применяемого в качестве эталонного раствора.
2. Приготовление хлороформного раствора сурьмы хлорида,
содержащего 2% уксусного ангидрида: 230 г сурьмы треххлорной
помещают в колбу и растворяют в 1 л хлороформа для наркоза при
нагревании на водяной бане при температуре около 40 град. С. Колбу
закрывают притертой пробкой и оставляют на ночь. Прозрачную часть
раствора сливают в мерный цилиндр вместимостью 1 л, прибавляют 2%
(по объему) уксусного ангидрида, переносят в банку оранжевого
стекла, перемешивают и закрывают притертой пробкой. Раствор годен
для анализа через сутки после приготовления в течение 42 сут.
3. Определение содержания тиамина хлорида
и тиамина бромида (витамина B1)
Точную навеску порошка растертых драже, таблеток или
количество таблеток, покрытых оболочкой, растертых в порошок,
указанное в соответствующих частных статьях, количественно
переносят 30 миллилитрами раствора хлористоводородной кислоты
(0,01 моль/л) в мерную колбу вместимостью 100 мл, взбалтывают,
доводят объем раствора тем же растворителем до метки и фильтруют;
первые 10 мл отбрасывают. Из полученного раствора готовят с
использованием раствора хлористоводородной кислоты (0,01 моль/л)
раствор второго разведения так, чтобы содержание в нем витамина B1
(в пересчете на тиамина хлорид) было около 0,001 мг в 1 мл.
1 мл полученного раствора помещают в делительную воронку с
притертой пробкой вместимостью 50 мл, во вторую делительную
воронку помещают 1 мл раствора стандартного образца тиамина
хлорида. В обе делительные воронки прибавляют по 4 мл
подкисленного раствора калия хлорида и по 3 мл окислительной
смеси; воронки одновременно встряхивают и оставляют стоять в
течение 1 мин, затем прибавляют по 15 мл изобутилового или
изоамилового спирта, или бутанола-1, одновременно энергично
встряхивают в течение 2 мин и дают разделиться слоям. Водный слой
удаляют, спиртовой фильтруют через бумажный фильтр с 1 г
безводного натрия сульфата. Полученные фильтраты переносят в
кювету флуориметра и измеряют флюоресценцию растворов при длине
волны около 436 нм. Установку прибора проводят по раствору
рабочего стандартного образца тиамина хлорида.
Содержание витамина B1 в пересчете на тиамина хлорид
(C12H17ClN4OS х HCl) в одном драже или одной таблетке в граммах
(X) вычисляют по формуле:
А1 х 0,001 х 100 х V3 х б А1 х V3 х б
Х = --------------------------- = ---------------------
A2 х а х V2 х 1000 А2 х а х V2 х 10000
где А1 - показание флуориметра испытуемого раствора; А2 -
показание флуориметра раствора рабочего стандартного образца
тиамина хлорида; 0,001 - содержание тиамина хлорида в 1 мл
раствора рабочего стандартного образца в миллиграммах; 100, V2, V3
- разведения в миллилитрах; а - навеска препарата в граммах или
количество таблеток, покрытых оболочкой; б - средняя масса одного
драже или одной таблетки, г; 1000 - пересчет в граммы.
Примечания. 1. Приготовление раствора рабочего стандартного
образца тиамина хлорида: 0,1000 г тиамина хлорида, предварительно
высушенного при температуре от 100 до 105 град. С в течение 2 ч,
растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1 л, прибавляют 10
капель концентрированной хлористоводородной кислоты и доводят
объем раствора водой до метки (основной раствор). Раствор годен в
течение 1 мес при хранении в банке оранжевого стекла с притертой
пробкой при температуре от 5 до 10 град. С.
1 мл основного раствора помещают в мерную колбу вместимостью
100 мл и доводят объем раствора водой до метки.
1 мл раствора рабочего стандартного образца содержит 0,001 мг
тиамина хлорида.
Раствор годен в день приготовления.
2. Окислительная смесь: 0,01 г калия феррицианида растворяют в
1 мл воды и доводят объем раствора 15% раствором едкого натра до
25 мл. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.
3. Изобутиловый спирт (ч. д. а.) или изоамиловый спирт (ч. д.
а.), или бутанол-1 (ч. д. а.) проверяют на отсутствие
флюоресценции. В случае наличия флюоресценции спирт перед
употреблением подвергают очистке следующим образом: к 1 л спирта
прибавляют от 15 до 20 г активированного угля, энергично
встряхивают в течение 30 мин, оставляют на сутки и отгоняют.
4. Приготовление подкисленного раствора калия хлорида: 125 г
калия хлорида растворяют в 400 мл воды в мерной колбе вместимостью
500 мл, прибавляют 4,5 мл концентрированной хлористоводородной
<< Пред. стр. 60 (из 116) След. >>
Список литературы по разделу