<< Пред. стр. 84 (из 116) След. >>
Список литературы по разделу
гистамина - основания в 0,2 мл на 1 кг массы. Скорость введения
раствора 0,1 мл в секунду. Животных, у которых при введении
гистамина в дозе 0,2 мкг на 1 кг массы артериальное давление
снизится менее чем на 20 мм рт. ст., из опыта исключают.
После проверки чувствительности животного к гистамину уточняют
величину гипотензивной реакции посредством повторного введения
стандартного раствора гистамина в дозе 0,1 мкг (0,2 мл раствора)
на 1 кг массы со скоростью 0,1 мл в секунду. Введение гистамина с
интервалом 5 мин повторяют несколько раз, пока при двух
последовательных введениях не будет получено одинаковое снижение
артериального давления, которое принимается за стандартное в
данных условиях опыта.
Затем с интервалом не менее 5 мин животному вводят испытуемый
раствор лекарственного средства с той же скоростью, с которой
вводили раствор гистамина.
Растворитель и концентрация испытуемого раствора (тест - доза)
указаны в соответствующей фармакопейной статье. Препарат считают
выдержавшим испытание, если снижение артериального давления после
введения тест - дозы не превышает реакции на введение 0,1 мкг/кг
гистамина в стандартном растворе.
При испытании в одном опыте разных лекарственных средств
необходимо проводить дополнительное определение реакции животного
на введение стандартного раствора гистамина в дозе 0,1 мкг/кг.
Отмеченная при этом величина реакции принимается как стандартная
для последующего испытания препарата.
В случае значительного уменьшения величины реакции по
сравнению с наблюдаемой в начале опыта необходимо вновь проверить
чувствительность животного к действию гистамина в дозе 0,2 мкг/кг.
Если снижение артериального давления при этом будет не менее 20 мм
рт. ст., испытание препаратов продолжают в соответствии с
указанными выше требованиями,
Для испытания на содержание веществ гистаминоподобного
действия отбирают по 2 флакона или ампулы от каждой серии,
содержащей не более 10000 флаконов или ампул. При количестве в
серии флаконов или ампул более 10000 отбирают по 3 флакона или
ампулы от каждой серии. Из отобранных флаконов или ампул готовят
общий раствор (смешанная проба) для испытаний.
МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ
ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
ИСПЫТАНИЕ НА СТЕРИЛЬНОСТЬ
Лекарственные средства для инъекций, глазные капли, мази,
пленки, другие лекарственные средства, в отношении которых имеются
соответствующие указания в нормативно - технической документации
(НТД), должны быть стерильными. Стерильность лекарственных средств
достигается соблюдением необходимых санитарно - гигиенических
условий их изготовления и режима стерилизации.
Методы контроля стерильности, изложенные в данной статье,
применяют для испытания всех лекарственных средств независимо от
их природы и лекарственной формы, если нет других указаний в
частных фармакопейных статьях.
Отбор образцов для анализа. Образцы готовых лекарственных
средств отбирают для контроля от каждой серии в количествах,
зависящих от вида стерилизации и числа единиц (ампул, флаконов и
т.д.) в серии.
В случае, если лекарственное средство стерилизуют насыщенным
паром при избыточном давлении 0,11 +/- 0,02 МПа (1,1 +/- 0,2
кгс/кв. см) и температуре (121 +/- 1) град. С, образец состоит из
10 единиц. При других видах стерилизации минимальное количество
---
образцов для анализа определяют по формуле n = 0,4 \/ N , где n -
число единиц в образце, а N - число единиц в исследуемой серии
препарата, при этом n должно быть не менее 3 и не более 40.
Определение антимикробного действия лекарственного средства.
Во избежание неправильной оценки результатов анализа необходимо
определить однократно для каждого наименования лекарственного
средства, обладает ли оно антимикробным действием. Для этого в две
пробирки с 10 мл тиогликолевой среды и в две - с 10 мл среды
Сабуро добавляют соответствующее количество исследуемого
лекарственного средства (табл. 12) и вносят в каждую пробирку по
0,1 мл микробной взвеси соответствующего тест - штамма, содержащей
1000 клеток в 1 мл. Посевы в тиогликолевой среде инкубируют при
температуре от 30 до 35 град. С в течение 48 ч, а на среде Сабуро
- при температуре от 20 до 25 град. С в течение 72 ч.
Контролем служат пробирки с питательными средами, в которые
вместо данного лекарственного средства вносят аналогичное
количество дистиллированной воды или соответствующего
растворителя.
Для проверки антибактериального действия лекарственных средств
используют тест - микроорганизмы: Staphylococcus aureus АТСС 6538
Р, Bacillus subtilis ATCC 6633, Escherichia coli ATCC 25922, а
противогрибкового действия - Candida albicans ATCC 885-653 (см.
табл. 13).
При отсутствии антимикробного действия лекарственного средства
в контрольных и опытных пробирках (колбах) должен наблюдаться рост
перечисленных тест - микроорганизмов.
При наличии антимикробного действия лекарственных средств
используют соответствующие инактиваторы, указанные в частных
фармакопейных статьях: (напр.: пара - аминобензойная кислота для
сульфаниламидов, пенициллиназа - для пенициллинов и цефалоспоринов
и т.д.). При отсутствии инактиватора препарат разводят, изменяя
соотношение объемов посевного материала и питательной среды.
Первоначально, не изменяя количества посевного материала,
указанного в табл. 12, увеличивают объем питательной среды до 250
мл. Если при этом сохраняется антимикробное действие
лекарственного средства, уменьшают объем посевного материала до 1
мл.
В случае неэффективности разведения лекарственного средства
используют метод мембранной фильтрации.
Посев лекарственных средств. Для контроля стерильности
лекарственных средств применяют тиогликолевую среду и жидкую среду
Сабуро. При этом используют метод прямого посева на питательные
среды или метод мембранной фильтрации.
Метод прямого посева. Испытуемый препарат, если необходимо,
растворяют в соответствующем растворителе и высевают в
количествах, указанных в табл. 12.
При испытании лекарственных средств посевы в тиогликолевой
среде инкубируют при температуре от 30 до 35 град. С, а в среде
Сабуро - от 20 до 25 град. С. Продолжительность инкубации посевов
в обеих питательных средах составляет 14 сут.
Таблица 12
Количество испытуемого препарата для посева
в зависимости от объема содержимого единиц
(ампул, флаконов и др.), составляющих серию
------------------------------------------------------------------
|Объем содержимого| Объем | Объем питательной среды |
|одной единицы, мл|лекарственного| |
| | средства для | |
| | посева, мл | |
|-----------------+--------------+-------------------------------|
|Менее 1 |Весь объем |В 10 раз больше объема образца |
|1 - 4 |1 |для посева |
|5 - 19 |2 | |
|20 - 100 |2 - 4 | |
|Более 100 <*> |10 | |
------------------------------------------------------------------
--------------------------------
<*> Если объем содержимого единицы превышает 100 мл,
предпочтительнее использовать метод мембранной фильтрации.
В случае помутнения питательной среды после внесения в нее
испытуемого препарата следует в интервале от 3 до 7 сут. после
посева сделать пересев на свежие аналогичные среды и инкубировать
их при соответствующей температуре 14 сут от начала испытания.
При испытании мазей и растворов лекарственных средств в маслах
отбирают асептически по 0,1 г (мл) от каждой единицы и вносят в
стерильную колбу вместимостью 250 мл, содержащую стеклянные бусы,
100 мл 1/15 мол фосфатного буферного раствора (рН 6,8-7,0) и
эмульгатор. Перед проведением испытания содержимое колбы
подогревают до температуры (41 +/-1) град. С. Колбу с испытуемым
образцом встряхивают не более 30 мин до получения однородной
эмульсии. Полученную эмульсию в количестве 5 мл переносят в колбу
с 40 мл тиогликолевой среды и 5 мл - в колбу с 40 мл среды Сабуро.
Посевы инкубируют 14 сут при соответствующей температуре для
каждой питательной среды.
Примечания. 1. Выбор эмульгатора и его количество зависят от
природы мази и растворов лекарственных средств в маслах. Наиболее
часто применяют твин-80 в концентрации до 2,5%, не оказывающей
антимикробного действия.
2. При испытании мазей, легко эмульгируемых в воде, эмульгатор
не вносят в буферный раствор.
3. При испытании мазей и растворов в маслах предпочтительнее
использовать метод мембранной фильтрации.
Метод мембранной фильтрации. При определении стерильности
лекарственных средств, обладающих выраженным антимикробным
действием, и лекарственных средств, разлитых в емкости более 100
мл, используют метод мембранной фильтрации.
При испытании лекарственных средств с антимикробным действием
от каждой серии независимо от ее объема отбирают 30 емкостей
(ампул, флаконов и др.), которые делят на 3 группы по 10 емкостей.
Емкости двух групп (20 штук) используют для испытания на
стерильность, третьей группы (10 штук) - для контроля полноты
отмывания мембраны от лекарственного средства.
Испытание лекарственного средства на стерильность проводят с
использованием фильтрационной установки, включающей
фильтродержатель, соединенный с колбой - приемником.
Фильтродержатель состоит из воронки с крышкой и основания из
пористой пластины, на которую помещают мембрану. Используют
мембраны с размером пор 0,45 +/-0,02 мкм, диаметром около 47 мм.
Испытания проводят под вакуумом 93,3 кПа (70 см рт. ст.) при
скорости вытекания воды 55-75 мл в 1 мин. Допускается
использование аппарата, представляющего собой стерильную замкнутую
систему и работающего также по принципу фильтрации растворов.
Для фильтрации водных, масляных и спиртовых растворов
рекомендуют использовать фильтры из эфиров целлюлозы или смесей
эфиров целлюлозы. Фильтровальную установку в собранном виде
стерилизуют насыщенным паром при избыточном давлении 0,11 +/- 0,02
МПа [(1,1 +/- 0,2) кгс/кв. см] и температуре (121 +/-1) град. С в
течение 20 мин (температура и время критические). Стерилизацию
можно осуществлять любым другим способом, обеспечивающим
сохранность рабочих характеристик мембраны, а также стерильность
мембраны и всей установки (ионизирующее излучение, окись этилена и
т.п.).
Испытуемое лекарственное средство растворяют или суспендируют
(если в этом есть необходимость) в соответствующей стерильной
жидкости и полученный раствор или суспензию пропускают через
стерильную мембрану. Для растворения лекарственных средств с
антимикробным действием и отмывания мембраны от них можно
использовать любой растворитель, не подавляющий роста
микроорганизмов, например, раствор натрия хлорида изотонического
0,9% для инъекций. Используемый растворитель перед стерилизацией
необходимо профильтровать через мембраны с порами размером 0,45
+/-0,02 мкм для освобождения от механических примесей.
Фильтрование отобранных образцов проводят в асептических
условиях. Испытуемый раствор пропускают с помощью вакуума через
одну или несколько мембран. При испытании лекарственных средств с
антимикробным действием или содержащих консервант после окончания
фильтрации мембрану необходимо промыть 3-5 порциями по 100 мл
соответствующего растворителя, например растворам натрия хлорида
изотонического 0,9% для инъекций или жидкости N 1 (см. с. 193),
при испытании мазей - жидкости N 2 (см. с. 193). После отмывания
мембраны ее извлекают, разрезают стерильными ножницами пополам и
одну половину помещают в колбу со 100 мл тиогликолевой среды,
вторую - в колбу со 100 мл среды Сабуро. Питательные среды с
помещенными в них фильтрами выдерживают при температуре от 30 до
35 град. С (тиогликолевая среда) и от 20 до 25 град. С (среда
Сабуро) в течение 7 суток при ежедневном просмотре.
Для контроля стерильности растворов лекарственных средств,
выпускаемых в виде порошков, лиофилизированных препаратов и пр.,
содержимое каждой емкости предварительно растворяют в стерильном
растворителе. Затем из каждых 10 емкостей одной группы отбирают
полученный раствор в количестве, соответствующем 200 мг
лекарственного средства, и переносят в колбу, содержащую 100 мл
аналогичного растворителя. Приготовленный раствор немедленно
фильтруют. После отмывания фильтра, как указано выше, одну
половину его помещают в колбу с тиогликолевой средой, вторую - в
колбу со средой Сабуро.
При испытании мазей и растворов лекарственных средств в маслах
от каждой из 10 емкостей отбирают по 100 мг препарата в колбу со
100 мл растворителя (изопропилмиристат и др.), который
предварительно подогревают до температуры не выше 45 град. С и
стерилизуют фильтрованием через мембраны с размером пор
(0,22 +/- 0,02) мкм. После фильтрации образца мембрану промывают
двумя - тремя порциями по 200 мл жидкости N 2 и затем одной -
двумя порциями жидкости N 1. Половину мембраны помещают в
тиогликолевую среду, другую - в среду Сабуро, в которые
предварительно вносят стерильный твин-80 из расчета 1 г на 1000 мл
среды.
При испытании лекарственных средств, разлитых в емкости
большого объема, через фильтры пропускают содержимое 5-10
емкостей, если объем каждой емкости составляет от 100 до 500 мл.
При наличии в емкости более 500 мл раствора на стерильность
испытывают по 500 мл содержимого каждой из 5- 10 емкостей на 2-3
мембранах.
При испытании лекарственных средств, представляющих собой
вязкую жидкость или медленно фильтрующиеся суспензии, необходимо
предварительно добавить растворитель, указанный в частной статье,
для увеличения скорости фильтрации.
Контроль полноты отмывания фильтра (третья группа емкостей)
проводят следующим образом: при испытании антибактериального
лекарственного средства в колбу с тиогликолевой средой и
погруженной в нее половиной фильтра вносят суточную культуру
Staphylococcus aureus ATCC 6538 Р, при испытании противогрибкового
лекарственного средства - в колбу со средой Сабуро и фильтром
вносят 48-часовую культуру Candida albicans ATCC 885-653 из
расчета 100 микробных клеток на весь объем среды. Инкубацию
проводят при соответствующих температурах. Наличие роста
тест - микроорганизмов в контрольных колбах через 48-72 ч
свидетельствует о достаточной полноте отмывания мембран от
антимикробного лекарственного средства.
Для контроля стерильности условий, в которых проводят
испытания, необходимо фильтровать растворитель без испытуемого
лекарственного средства с последующим воспроизведением всех
вышеописанных операций.
Учет и интерпретация результатов испытания на стерильность.
Посевы просматривают в рассеянном свете ежедневно и по окончании
периода инкубации. Наличие роста микроорганизмов в питательных
средах оценивают визуально по появлению мутности, пленки, осадка и
других макроскопических изменений. Выявленный рост микроорганизмов
необходимо подтвердить микроскопированием мазков, окрашенных по
Граму.
Испытуемый препарат считают удовлетворяющим требованиям
испытания на стерильность при отсутствии роста микроорганизмов.
При обнаружении роста хотя бы в одной пробирке (колбе, флаконе)
его подтверждают микроскопированием и повторяют испытание на таком
же количестве образцов, как и в первый раз. При отсутствии роста
микроорганизмов при повторном посеве испытуемый препарат считают
удовлетворяющим требованию испытания на стерильность. В случае
роста микроорганизмов при повторном посеве, морфологически сходных
с микроорганизмами, выявленными в первичном посеве, испытуемый
препарат считают нестерильным. Если при повторном посеве
наблюдается рост микроорганизмов, отличающихся по морфологии от
первоначально выделенных, испытание повторяют в третий раз на
удвоенном количестве образцов. При отсутствии роста
микроорганизмов после инкубации посевов в третьем испытании
испытуемый препарат считают удовлетворяющим требованиям на
стерильность. При наличии роста хотя бы в одной пробирке
испытуемый препарат считают нестерильным.
Питательные среды
Для контроля стерильности применяют "Сухую питательную среду
для контроля стерильности" (тиогликолевую) отечественного
производства (ТУ 42.14 N 161-79) и среду Сабуро (жидкую). Вместо
коммерческой тиогликолевой среды может быть использована
тиогликолевая среда индивидуального приготовления.
Состав и приготовление питательных сред. Тиогликолевая среда
индивидуального приготовления:
панкреатического гидролизата казеина 15,0 г
дрожжевого экстракта (10%) 5,0 >>
натрия хлорида 2,5 >>
<< Пред. стр. 84 (из 116) След. >>
Список литературы по разделу