<< Пред. стр. 87 (из 116) След. >>
Список литературы по разделу
| | | | | | | |
------------------------------------------------------------------------------
Продолжение таблицы
----------------------------------------------------------------------------------
| |Растворитель для приготовления | Срок годности | Контрольная |
| | растворов стандартного и | основного | концентрация |
| | испытуемого образцов | раствора | раствора |
| Стандартный |--------------------------------| стандартного | стандартного |
| образец |основной раствор|рабочий раствор| образца при |образца <7, 8>|
| | | |температуре от |в мкг/мл акт. |
| | | |4 до 10 град.С,| вещества или |
| | | | сут | ЕД/ мл |
| | | | | |
|----------------+----------------+---------------+---------------+--------------|
|Ампициллина |Буфер N 1 |Буфер N 1 | 3 | 1 мкг/мл |
|тригидрат | | | | |
| | | | | |
|Амфотерицин В |Диметилсульфок- |Буфер N 1<11> | 1 | 0,5 мкг/мл |
| |сид | | | |
| | | | | |
|Бензилпеницил- |Буфер N 1 |Буфер N 1 | 3 | 1 ЕД/мл |
|лина натриевая | | | | |
|соль | | | | |
|Гелиомицин |0,1 н. раствор|0,1 н. раствор| 10 | 4 мкг/мл |
| |едкого натра<13>|едкого натра | | |
|Гентамицина |Буфер N 4 |Буфер N 4 | 14 | 2 мкг/мл |
|сульфат | | | | |
|Грамицидин С |Этиловый |Дистиллирован- | 30 |100 мкг/мл |
| |спирт 95% |ная вода | | |
| | | | | |
|Дактиномицин |Дистиллированная|Буфер N 4 | 15 | 4 мкг/мл |
| |вода <9> | | | |
| | | | | |
|Дигидрострепто- |Буфер N 3 |Буфер N 4 | 30 | 2 мкг/мл |
|мицина сульфат | | | | |
| | | | | |
|Диклоксациллина |Буфер N 1 |Буфер N 1 | 6 | 8 мкг/мл |
|натриевая соль | | | | |
| | | | | |
|Доксициклина |0,01 н. раствор|Буфер N 2 | 7 | 0,5 мкг/мл |
|гидрохлорид |хлористоводо- | | | |
| |родной кислоты | | | |
|Канамицина |Дистиллированная|Буфер N 4 | 30 | 1 мкг/мл |
|моносульфат |вода | | | |
|Канамицина |Дистиллированная|Буфер N 4 | 30 | 10 мкг/мл |
|моносульфат |вода | | | |
|Карбенициллина |Буфер N 1 |Буфер N 2 | 3 | 10 мкг/мл |
|динатриевая | | | | |
|соль | | | | |
|Карминомицина |Дистиллированная|Буфер N 4 | 10 | 15 мкг/мл |
|гидрохлорид |вода | | | |
| | | | | |
|Леворин |Диметилсульфок- |Диметилсульфок-| 3(10) | 0,5 мкг/мл |
| |сид |сид до концен- | | |
| | |трации 100 мкг | | |
|Линкомицина |Дистиллированная|Буфер N 4 | 30 |100 мкг/мл |
|гидрохлорид |вода | | | |
|Метациклина |0,01 н. раствор |Буфер N 2 | 7 | 0,5 мкг/мл |
|гидрохлорид |хлористоводород-| | | |
| |ной кислоты | | | |
|Метициллина |Буфер N 1 |Буфер N 1 | 3 | 20 мкг/мл |
|натриевая | | | | |
|соль | | | | |
|Микогептин |Диметилсульфок- |Диметилсульфок-| 3 <12> | 1 мкг/мл |
| |сид |сид до концен-| | |
| | |трации 50 мкг/| | |
| | |мл, а затем бу-| | |
| | |фер N 4 <11> | | |
|Мономицин |Дистиллированная|3% раствор | 30 | 2 мкг/мл |
| |вода |хлорида калия | | |
| | | | | |
|Неомицина |Буфер N 4 |Буфер N 4 | 30 | 4 мкг/мл |
|сульфат | | | | |
|Нистатин |Диметилформамид |Буфер N 3 | 3 | 20 ЕД/мл |
| | | | | |
| | | | | |
|Оксациллина |Буфер N 1 |Буфер N 1 | 3 | 4 мкг/мл |
|натриевая соль | | | | |
| | | | | |
|Окситетрацикли- |0,01 н. раствор|Буфер N 2 | 7 | 1 мкг/мл |
|на гидрохлорид |хлористоводород-| | | |
| |ной кислоты | | | |
|Олеандомицина |Буфер N 3 |Буфер N 4 | 7 | 4 мкг/мл |
|фосфат | | | | |
| | | | | |
|Оливомицин- |Стандартный |Буфер N 1 | 14 | 2 мкг/мл |
|кислота |образец в этило-| | | |
| |вом спирте из| | | |
| |расчета 5 мг в 1| | | |
| |мл, затем буфер| | | |
| |N 1, испытуемый| | | |
| |образец в дисти-| | | |
| |ллированной воде| | | |
|Полимиксин В |Буфер N 3 |Буфер N 5 | 14 |100 ЕД/мл |
|сульфат | | | | |
| | | | | |
|Полимиксин М |Буфер N 3 |Буфер N 5 | 14 |100 ЕД/мл |
|сульфат | | | | |
| | | | | |
|Рифампицин |1 мл диметилфор-|Буфер N 3 | 4 | 5 мкг/мл |
| |мамида на 10 мг| | | |
| |навески, затем| | | |
| |дистиллированная| | | |
| |вода | | | |
|Рубомицина |Дистиллированная|Буфер N 4 | 10 | 20 мкг/мл |
|гидрохлорид |вода | | | |
| | | | | |
|Сизомицина |Буфер N 4 |Буфер N 4 | 14 | 2 мкг/мл |
|сульфат | | | | |
|Стрептомицина |Буфер N 3 |Буфер N 4 | 30 | 2 мкг/мл |
|сульфат | | | | |
| | | | | |
|Тетрациклина |0,01 н. раствор|Буфер N 2 | 7 | 2 мкг/мл |
|гидрохлорид |хлористоводород-| | | |
| |ной кислоты | | | |
|Феноксиметилпе- |Буфер N 1 |Буфер N 1 | 7 | 1 ЕД/мл |
|нициллин | | | | |
| | | | | |
|Флоримицина |Дистиллированная|Буфер N 4 | 7 | 10 мкг/мл |
|сульфат |вода | | | |
|Фузидиевая |Стандартный |Буфер N 3 | 7 | 5 мкг/мл |
|кислота |образец - в эти-| | | |
| |ловом спирте из| | | |
| |расчета 10 мг/мл| | | |
| |затем буфер N 4;| | | |
| |испытуемый обра-| | | |
| |зец - в буфере| | | |
| |N 4 | | | |
|Цефалексин |Буфер N 1 |Буфер N 1 | 3 | 5 мкг/мл |
| | | | | |
|Цефалотина нат- |Буфер N 1 |Буфер N 1 | 3 | 0,5 мкг/мл |
|риевая соль | | | | |
|Хлортетрацикли- |0,01 н. раствор|Буфер N 2 | 7 | 1 мкг/мл |
|на гидрохлорид |хлористоводород-| | | |
| |ной кислоты | | | |
|Эритромицин |1 мл этилового|Буфер N 4 | 7 | 2 мкг/мл |
| |спирта на 10 мг | | | |
| |навески, затем| | | |
| |буфер N 4 до| | | |
| |1000 ЕД/мл | | | |
----------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------
<1> Условия определения антимикробной активности антибиотиков
указанных наименований распространяются и на их лекарственные
формы.
<2> ATCC - Американская типовая коллекция культур, NCTC -
Национальная коллекция типовых культур.
<3> Состав, приготовление сред и буферных смесей см. табл. 19
и 20.
<4> Глюкозу добавляют в расплавленный агар в виде 40%
стерильного раствора.
<5> Объемы сред указаны для чашек размером 20 х 100 мм. При
использовании лунок количество среды для нижнего или одного слоя
удваивается.
<6> Допускается уменьшение или увеличение посевной дозы
тест - микроба в зависимости от плотности получаемого газона и
четкости очертания зон.
<7> В таблице указана контрольная концентрация раствора
стандартного образца для метода с использованием стандартной
кривой.
<8> Допускается при необходимости уменьшение или увеличение
контрольной концентрации раствора стандартного образца.
<9> Для полного растворения препарата раствор помещают в
холодильник при температуре от 4 до 10 град. С.
<10> Активность канамицина В определяется после гидролиза по
стандартному образцу канамицина А.
<11> Срок годности рабочих растворов в буфере при комнатной
температуре не более 30 мин.
<12> Срок годности основного раствора стандартного образца
микогептина при комнатной температуре не более 4-5 ч.
<13> Основной раствор готовят в концентрации 1 мг в 5 мл
раствора натра едкого (0,1 моль/л).
Среда N 8 - для выращивания Pseudomonas aeruginosa и
Staphylococcus aureus:
пептона ферментативного сухого 10,0 г
натрия хлорида 5,0 >>
калия фосфата двузамещенного 2,5 >>
глюкозы 2,5 >>
воды дистиллированной 1000 мл
рН после стерилизации 7,3 +/-0,2.
Пептон и соли растворяют в воде при нагревании, вносят
глюкозу, устанавливают рН, кипятят 1 мин, фильтруют через бумажный
фильтр. Стерилизуют в паровом стерилизаторе насыщенным паром под
давлением при температуре 121 град. С в течение 15 мин.
Среда N 9 - для выявления пигмента пиоцианина:
пептона ферментативного сухого 20,0 г
магния хлорида безводного 1,4 >>
калия сульфата безводного 10,0 >>
глицерина 10,0 мл
агара микробиологического 15,0 г
воды дистиллированной 1000 мл
рН после стерилизации 7,2 +/-0,2.
Все компоненты, кроме глицерина, растворяют в воде и оставляют
на 15 мин. Затем вносят глицерин, тщательно перемешивают,
растворяют при нагревании, устанавливают рН, кипятят 1 мин,
прибавляют замоченный заранее агар, нагревают до полного его
расплавления, фильтруют через ватно - марлевый фильтр. Стерилизуют
в паровом стерилизаторе насыщенным паром под давлением при
температуре 121 град. С в течение 15 мин.
Среда N 10 - для идентификации Staphylococcus aureus:
пептона ферментативного сухого 10,0 г
натрия хлорида 75,0 >>
маннита 10,0 >>
фенолового красного 0,025 >>
агара микробиологического 15,0 >>
воды дистиллированной 1000 мл
рН после стерилизации 7,4 +/-0,2.
Все компоненты растворяют в воде, вносят 2,5 мл 1% раствора
фенолового красного, устанавливают рН, кипятят 1 мин, прибавляют
замоченный заранее агар, нагревают до полного его расплавления,
фильтруют через ватно - марлевый фильтр. Стерилизуют в паровом
стерилизаторе насыщенным паром под давлением при температуре 121
град. С в течение 15 мин.
Требования к ростовым свойствам питательных сред. Используемые
питательные среды должны обеспечивать рост соответствующих
тест - штаммов бактерий и грибов, указанных в табл. 17, при посеве
их в количестве менее 100 жизнеспособных клеток: для сред N 1, 3,
6 - 10 не позднее 48 ч инкубации при температуре от 30 до 35 град.
С и для среды N 2 - не позднее 72 ч инкубации при температуре от
20 до 25 град. С.
Растворы, реактивы
Фосфатный буферный раствор с натрия хлоридом и пептоном (1/15
мол):
рН 7,0
калия фосфата однозамещенного 3,56 г
натрия фосфата двузамещенного 7,23 >>
натрия хлорида 4,3 >>
пептона ферментативного сухого 1,0 >>
воды дистиллированной до 1000 мл
Стерилизуют в паровом стерилизаторе насыщенным паром под
давлением при температуре 121 град. С в течение 15 мин. Раствор
хранят при температуре от 4 до 10 град. С.
Феноловый красный - 1% раствор:
фенолового красного 1,0 г
раствора едкого натра 0,1 (моль/л) 28,2 мл
воды дистиллированной до 100 мл
Навеску индикатора растирают в ступке, прибавляя небольшими
порциями едкий натр. Полученный раствор переносят в мерную колбу
вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки.
Хранят во флаконе нейтрального светозащитного стекла при
температуре от 4 до 10 град. С.
Малахитовый зеленый - 0,5% раствор:
малахитового зеленого 0,5 г
воды дистиллированной до 100 мл
Навеску красителя переносят в стеклянный флакон, прибавляют
стерильную горячую воду, помещают на сутки в термостат,
периодически встряхивая.
Реактив Грисса. Раствор N 1: 0,5 г сульфаниловой кислоты
растворяют в 30 мл ледяной уксусной кислоты, прибавляют 100 мл
воды, фильтруют. Раствор годен в течение месяца.
Раствор N 2: 0,1 г 1-нафтиламина растворяют в 100 мл кипящей
воды, охлаждают, прибавляют 30 мл ледяной уксусной кислоты,
фильтруют. Раствор годен в течение 7 сут.
Перед употреблением смешивают равные объемы растворов N 1 и
N 2.
Реактив на цитохромоксидазу. Раствор N 1: 1% спиртовой раствор
нафтола-1.
Раствор N 2: 1% раствор N, N - диметил - р - фенилендиамина
дигидрохлорида.
Перед употреблением смешивают растворы N 1 и N 2 в соотношении
2:3.
Растворы годны в течение 14 сут при хранении при температуре
от 4 до 10 град. С во флаконах нейтрального светозащитного стекла.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ
АНТИБИОТИКОВ МЕТОДОМ ДИФФУЗИИ В АГАР
Определение антимикробной активности антибиотиков основано на
их способности угнетать рост микроорганизмов. Определение проводят
методом диффузии в агар на плотной питательной среде путем
сравнения размеров зон угнетения роста тест - микробов,
образующихся при испытании растворов определенных концентраций
Государственного стандартного образца <*> и испытуемого препарата.
--------------------------------
<*> Далее "стандартный образец" следует читать
"Государственный стандартный образец".
Антимикробная активность антибиотиков выражается в единицах
действия - ЕД или "мгк". Для большинства антибиотиков 1 ЕД или
"мкг" соответствуют 1 мкг активного вещества (кислоты или
основания); для антибиотиков, имеющих иное количественное
выражение единицы, соответствующие указания даются в частных
статьях.
При определении антимикробной активности антибиотиков
используют стандартные образцы, активность которых, как правило,
устанавливают в соответствии с Международными биологическими
стандартами. При отсутствии последних для указанных целей могут
быть использованы международные химические стандарты,
антимикробную активность которых рассчитывают на основании
показателей качества, установленных физико - химическими методами.
Антимикробную активность стандартных образцов антибиотиков, не
имеющих аналогов в международной коллекции стандартов,
рассчитывают также на основании показателей качества,
установленных физико - химическими методами.
Стандартные образцы антибиотиков утверждаются и рассылаются
<< Пред. стр. 87 (из 116) След. >>
Список литературы по разделу