<< Пред. стр. 86 (из 116) След. >>
Список литературы по разделу
наличие фермента цитохромоксидазы.
Таблица 15
Морфологическая характеристика Pseudomonas
aeruginosa на диагностической среде N 9
------------------------------------------------------------------
| Характерная морфология | Окраска по Граму |
| колоний | |
|--------------------------+-------------------------------------|
|Зеленоватые, как правило,|Грамотрицательные неспорообразующие|
|флюоресцирующие колонии,|палочки |
|голубые в ультрафиолетовом| |
|свете | |
------------------------------------------------------------------
Таблица 16
Морфологическая характеристика Staphylococcus
aureus на диагностической среде N 10
------------------------------------------------------------------
|Характерная морфология| Окраска по Граму |
| колоний | |
|----------------------+-----------------------------------------|
|Золотисто - желтые ко-|Грамположительные кокки, расположенные|
|лонии, окруженные жел-|гроздьями |
|тыми зонами | |
------------------------------------------------------------------
Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие
палочки, которые дают положительную оксидазную реакцию и образуют
сине - зеленый пигмент, лекарственное средство контаминировано
Pseudomonas aeruginosa.
Наличие на среде N 10 золотисто - желтых колоний
грамположительных кокков, окруженных желтыми зонами,
свидетельствует о ферментации маннита. Чистую культуру
стафилококка исследуют на наличие фермента плазмокоагулазы.
Если в образце обнаружены грамположительные кокки, которые
ферментируют маннит и дают положительную реакцию плазмокоагуляции,
лекарственное средство контаминировано Staphylococcus aureus.
В нестерильных лекарственных средствах не допускается наличие
бактерий семейства Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa и
Staphylococcus aureus.
В 1 г (мл) лекарственного средства для приема внутрь
допускается наличие не более 1000 бактерий и 100 дрожжевых и
плесневых грибов (суммарно).
В 1 г (мл) лекарственного средства для применения в полости
уха, носа, для интравагинального использования и для местного
употребления допускается наличие не более 100 микроорганизмов, в
том числе и грибов.
Тест на наличие нитритов. К суточной исследуемой культуре
бактерий на среде N 7 приливают 0,2-0,3 мл реактива Грисса,
погружая пипетку до дна пробирки. Появление красного окрашивания
свидетельствует о наличии нитритов.
Тест на наличие цитохромоксидазы. Полоску фильтровальной
бумаги смачивают реактивом и наносят платиновой петлей или
стеклянной палочкой суточную чистую культуру исследуемых бактерий
со скошенной среды N 1. Синее окрашивание, появляющееся через 2-5
мин, свидетельствует о положительной оксидазной реакции.
Тест на наличие плазмокоагулазы (реакция плазмокоагуляции).
Кровь, взятую стерильным шприцем из сердца кролика, помещают в 5%
стерильный раствор натрия цитрата, отсасывают плазму, разводят 1:5
0,9% стерильным раствором натрия хлорида изотоническим и разливают
по 0,5 мл в стерильные пробирки. В каждую пробирку помещают 1
петлю суточной культуры стафилококка и инкубируют при температуре
от 30 до 35 град. С в течение 4-6 ч. Если в течение этого времени
не наблюдают свертывание плазмы, реакцию плазмокоагуляции считают
отрицательной. Обязательно наличие двух контролей: 1) контроль
раствора плазмы, 2) контроль культуры стафилококка, обладающего
ферментом коагулазой.
Для удобства постановки реакции плазмокоагуляции можно
использовать сухую кроличью цитратную плазму промышленного
производства, которую разводят согласно наставлению по применению.
Питательные среды
Питательные среды должны обеспечивать рост и развитие
определенных микроорганизмов. Готовить питательные среды следует,
строго придерживаясь приведенной рецептуры. Компоненты питательных
сред должны соответствовать ГОСТ и ТУ.
Состав и приготовление питательных сред. Среда N 1 - для
выращивания бактерий:
пептона ферментативного сухого 10 г
натрия хлорида 5 >>
глюкозы 1 >>
агара микробиологического <*> 13 >>
мясной воды (1:2) 1000 мл
рН после стерилизации 7,3 +/-0,2.
К мясной воде прибавляют пептон и натрия хлорид, растворяют
при нагревании, вносят глюкозу, устанавливают рН, кипятят в
течение 1 мин, прибавляют замоченный заранее агар, нагревают до
полного его расплавления, фильтруют через ватно - марлевый фильтр.
Стерилизуют в паровом стерилизаторе насыщенным паром под давлением
при температуре 121 град. С в течение 15 мин.
Среда N 2 - для выращивания грибов (Сабуро):
пептона ферментативного сухого 10 г
глюкозы 40 >>
агара микробиологического <*> 13 >>
воды дистиллированной 1000 мл
рН после стерилизации 5,6 +/-0,2.
Все ингредиенты растворяют в воде, прибавляют замоченный
заранее агар, нагревают до полного его расплавления, фильтруют
через ватно - марлевый фильтр. Стерилизуют в паровом стерилизаторе
насыщенным паром под давлением при температуре 121 град. С в
течение 15 мин. Для подавления роста бактерий после стерилизации
насыщенным паром под давлением прибавляют 100 мг бензилпенициллина
и 100 мг тетрациклина (либо перед стерилизацией насыщенным паром
под давлением - 50 мг левомицетина) на 1000 мл среды.
--------------------------------
<*> Жидкие среды N 1 и N 2 не содержат агара.
Среда N 3 - среда обогащения для бактерий семейства
Enterobacteriaceae:
пептона ферментативного сухого 10,0 г
натрия фосфата двузамещенного 7,5 >>
калия фосфата однозамещенного 2,5 >>
глюкозы 10,0 >>
фенолового красного 0,08 >>
малахитового зеленого 0,015 >>
мясной воды (1:2) 1000 мл
рН после стерилизации 7,3 +/-0,2.
Пептон и соли растворяют в мясной воде при нагревании, вносят
глюкозу, прибавляют 8 мл 1% раствора фенолового красного и 3 мл
0,5% раствора малахитового зеленого, устанавливают рН, кипятят 1
мин, фильтруют через бумажный фильтр. Стерилизуют насыщенным паром
под давлением при температуре 121 град. С в течение 15 мин в
паровом стерилизаторе.
Среда N 4 (агар Эндо сухой) -для выделения прописи семейства
Enterobacteriaceae - готовят согласно бактерий на этикетке.
Среда N 5 (висмутсульфит агар сухой) - для выделения бактерий
семейства Enterobacteriaceae - готовят согласно прописи на
этикетке.
Среда N 6 - для определения ферментации глюкозы:
пептона ферментативного сухого 10,0 г
натрия хлорида 5,0 >>
глюкозы 40,0 >>
фенолового красного 0,08 >>
мясной воды (1:2) 1000 мл
рН после стерилизации 7,2 +/-0,2.
Пептон и натрия хлорид растворяют в мясной воде при
нагревании, вносят глюкозу, прибавляют 8 мл 1% раствора
фенолового красного, устанавливают рН, кипятят 1 мин, фильтруют
через бумажный фильтр и разливают в пробирки с поплавками по 4-5
мл. Стерилизуют в паровом стерилизаторе насыщенным паром под
давлением при температуре 121 град. С в течение 15 мин. По
окончании стерилизации следует как можно быстрее охладить среду.
Среда N 7 - для определения восстановления нитратов в нитриты:
пептона ферментативного сухого 5,0 г
натрия хлорида 5,0 >>
калия нитрата 1,5 >>
воды дистиллированной 1000 мл
рН после стерилизации 7,2 +/-0,2.
Все компоненты растворяют в воде при нагревании, устанавливают
рН, кипятят 1 мин, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в
пробирки по 4-5 мл. Стерилизуют в паровом стерилизаторе насыщенным
паром под давлением при температуре 121 град. С в течение 15 мин.
Таблица 17
Тест - микроорганизмы и условия для биологического
определения активности антибиотиков
------------------------------------------------------------------------------
| | | Среда для |Количество| |
| | | определения | среды на | |
| | | активности | каждую | |
|Антибиотик <1>|Тест - микро- | <3, 4> | чашку, | Посевная |
| |организмы <2> | | мл <5> | доза <6> |
| | |----------------+----------| |
| | |ниж-| верхний |ниж-|верх-| |
| | |ний | лой |ний | ний | |
| | |слой| |слой|слой | |
|--------------+---------------+----+-----------+----+-----+-----------------|
|Ампициллин |Staphylococcus |N 11|N 7 + 0,1% | 10 | 5 |40 млн микробных|
| |aureus 209 Р | |глюкозы | | |клеток на 1 мл|
| | | | | | |среды |
|Амфотерицин В |Candida utilis | |N 16 + 0,1%| | 15 |3 мл рабочей|
| |ЛИА-01 | |глюкозы | | |взвеси на 100 мл|
| | | | | | |среды |
|Бензилпеницил-|Staphylococcus |N 11|N 7 + 0,1% | 10 | 5 |40 млн микробных|
|лин |aureus 209 Р | |глюкозы | | |клеток на 1 мл|
| | | | | | |среды |
|Гелиомицин |Вас. subtilis |N 17| N 17 | | 15 |100 млн спор на 1|
| |ATCC 6633 | | | | |мл среды |
|Гентамицин |Вас. pumilus | | N 9 | 20 | 5 |50 млн спор на 1|
| |NCTC 8241 | | | | |мл среды |
|Грамицидин С |Вас.cereus | | N 13 | | 10 |8 млн спор на 1|
| |var. mycoides | | | | |мл среды |
| |537 | | | | | |
|Дактиномицин |Вас. cereus, | | N 14 | | 10 |20 млн спор на 1|
| |var. mycoides | | | | |мл среды |
| |HB | | | | | |
|Дигидростреп- |Вас. cereus, | | N 9 | | 10 |20 млн спор на 1|
|томицин |var. mycoides | | | | |мл среды |
| |537 | | | | | |
|Диклоксациллин|Staphylococcus |N 11|N 7 + 0,1% | 10 | 5 |40 млн микробных|
| |aureus | |глюкозы | | |клеток на 1 мл|
| |209 P | | | | |среды |
|Доксициклин |Вас. subtilis, | |N 6 + 1% | | 10 |30 млн спор на 1|
| |var Л2 | |глюкозы | | |мл среды |
| | | | | | | |
|Канамицин В10 |Вас. subtilis |N 12| N 8 | 10 | 5 |100 млн спор на 1|
| |ATCC 6633 | | | | |мл среды |
|Канамицин |Вас. pumilus |N 8 | N 8 | 15 | 5 |40 млн спор на 1|
| |NCTC 8241 | | | | |мл среды |
|Карбенициллин |Pseudomonas | | N 7 | | 15 |10 мл бульонной|
| |aeruginosa | | | | |культуры на 100|
| |NCTC 2134 | | | | |мл среды |
|Карминомицин |Вас. cereus, | | N 5 | | 15 |100 млн спор на 1|
| |var. mycoides | | | | |мл среды |
| |537 | | | | | |
|Леворин |Candida utilis | |N 16 + 1% | | 15 |2-2,5 мл рабочей|
| |ЛИА-01 | |глюкозы | | |взвеси на 100 мл|
| | | | | | |среды |
|Линкомицин |Вас. subtilis | | N 8 | | 10 |100 млн спор на 1|
| |ATCC 6633 | | | | |мл среды |
|Метациклин |Вас. subtilis, | |N 6 + 1% | | 10 |30 млн спор на 1|
| |var. Л2 | |глюкозы | | |мл среды |
| | | | | | | |
|Метициллин |Staphylococcus | |N 7 + 0,1% | 10 | 5 |40 млн микробных|
| |N 11 aureus | |глюкозы | | |клеток на 1 мл|
| |209 P | | | | |среды |
|Микогептин |Candida utilis | |N 16 + 1% | | 15 |2,5-3 мл рабочей|
| |ЛИА-01 | |глюкозы | | |взвеси на 100 мл |
| | | | | | | |
| | | | | | | |
| | | | | | | |
|Мономицин |Вас. cereus, | | N 9 | | 10 |20 млн спор на 1|
| |var. mycoides | | | | |мл среды |
| |537 | | | | | |
|Неомицин |То же |N 9 | | 20 | 5 |20 млн спор на 1|
| | | | | | |мл среды |
|Нистатин |Candida utilis | |N 16 + 1% | | 15 |3-3,5 мл рабочей|
| |ЛИА-01 | |глюкозы | | |взвеси на 100 мл|
| | | | | | |среды |
|Оксациллин |Staphylococcus |N 11|N 7 + 0,1% | 10 | 5 |40 млн микробных|
| |aureus 209 Р | |глюкозы | | |клеток на 1 мл|
| | | | | | |среды |
|Окситетра- |Вас. subtilis | |N 6 + 1% | | 10 |30 млн спор на 1|
|циклин |var. Л2 | |глюкозы | | |мл среды |
| | | | | | | |
|Олеандомицин |Вас. cereus, | | N 9 | | 10 |20 млн спор на 1|
| |var. mycoides | | | | |мл среды |
| |HB | | | | | |
|Оливомицин |Вас. subtilis |N 11| N 18 | 10 | 5 |10 млн спор на 1|
| |АТСС 6633 | | | | |мл среды |
| | | | | | | |
| | | | | | | |
| | | | | | | |
| | | | | | | |
| | | | | | | |
| | | | | | | |
|Полимиксин В |Bordetella | | N 15 | | 10 |40-60 млн микроб-|
| |bronchiseptica | | | | |ных клеток на 1|
| |АТСС 4617 | | | | |мл среды |
|Полимиксин М |Bordetella | | N 15 | | 10 |40-60 млн микроб-|
| |bronchiseptica | | | | |ных клеток на 1|
| |АТСС 4617 | | | | |мл среды |
|Рифампицин |Вас. subtilis | |N 10 + 0,1%| | 10 |40 млн спор на 1|
| |АТСС 6633 | |глюкозы | | |мл среды |
| | | | | | | |
| | | | | | | |
| | | | | | | |
|Рубомицин |Вас. cereus, | | N 5 | | 15 |10 млн спор на 1|
| |var. mycoides | | | | |мл среды |
| |537 | | | | | |
|Сизомицин |Вас. pumilus |N 12| N 8 | 20 | 5 |50 млн спор на 1|
| |NCTC 8241 | | | | |мл среды |
|Стрептомицин |Вас. cereus, | | N 9 | | 10 |20 млн спор на 1|
| |var. mycoides | | | | |мл среды |
| |537 | | | | | |
|Тетрациклин |Вас. subtilis | |N 6 + 1% | | 10 |30 млн спор на 1|
| |var Л2 | |глюкозы | | |мл среды |
| | | | | | | |
|Феноксиметил- |Staphylococcus |N 11|N 7 + 0,1% | 10 | 5 |40 млн микробных|
|пенициллин |aureus 209 P | |глюкозы | | |клеток на 1 мл|
| | | | | | |среды |
|Флоримицин |Вас. subtilis | | N 8 | | 10 |20 млн спор на 1|
| |ATCC 6633 | | | | |мл среды |
|Фузидин |Вас. cereus, | |N 10 + 1% | | 10 |50 млн спор на 1|
| |var. mycoides | |глюкозы | | |мл среды |
| |HB | | | | | |
| | | | | | | |
| | | | | | | |
| | | | | | | |
| | | | | | | |
| | | | | | | |
|Цефалексин |Вас. subtilis |N 11|N 7 + 0,1% | 10 | 5 |100 млн спор на 1|
| |ATCC 6633 | |глюкозы | | |мл среды |
|Цефалотин |Вас. subtilis |N 11|N 7 + 0,1% | 10 | 5 |40 млн спор на 1|
| |ATCC 6633 | |глюкозы | | |мл среды |
|Хлортетраци- |Вас. subtilis, | |N 6 + 1% | | 10 |30 млн спор на 1|
|клин |var Л2 | |глюкозы | | |мл среды |
| | | | | | | |
|Эритромицин |Вас. cereus, | | N 9 | | 10 |20 млн спор на 1|
| |var. mycoides | | | | |мл среды |
| |HB | | | | | |
| | | | | | | |
<< Пред. стр. 86 (из 116) След. >>
Список литературы по разделу