НEЧИПОРEНКО С П ИЗУЧEНИИ БEЗОПАСНОСТИ ДОБАВКИ К ПИЩE АКТИВИТА АНТИОКСИДАНТА ОТЧEТ СПБ 2004 68 С

<< Пред. стр. 1 (из 3) След. >>

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ
ИНСТИТУТ ТОКСИКОЛОГИИ

ОТЧЕТ
об экспериментально-клиническом изучении безопасности и биологической активности биологически активной
добавки к пище "Активит Антиоксидант" производства
ЗАО "Фармпроект", г. Санкт-Петербург

Научный руководитель
доктор медицинских наук,
профессор
С.П. Нечипоренко

Санкт-Петербург, 2004 г.
СПИСОК ИСПОЛНИТЕЛЕЙ
Ведущий научный сотрудник,
канд. медицинских наук
(ответственный исполнитель)
Колбасов С.Е.

Научный сотрудник
Агапова В.Ф.

Научный сотрудник Георгианова Е.К.

Научный сотрудник Евдокимова Е.А.

Старший научный сотрудник,
канд. медицинских наук Лычаков А.В.

Научный сотрудник Мелихова М.В.

Старший научный сотрудник,
канд. медицинских наук Стройкова Г.С.

Научный сотрудник Хоботова З.И.

Работу обеспечивали:
Лаборанты-исследователи: Алпатова Л.Н., Башкирева И.М., Гусева В.М.,
Дроздова Н.С., Копылова Н.Ю., Орлова М.А.,
Патракова Е.В., Пименова Л.М. Врачи-ветеринары: Потапенко Е.Г., Храброва А.В. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

?-ЛП - ?-липопротеиды F - female - самка GLP - "Good Laboratory Practice" - "Добротная лабораторная практика" АлАТ - аланинаминотрансфераза АО - антиоксиданты АсАТ - аспартатаминотрансфераза БАД - биологически-активная добавка (к пище) в/ж - внутрижелудочно ДК - диеновые конъюгаты ЖКТ - желудочно-кишечный тракт КСО - ксантиноксидаза ЛД50 - среднесмертельная доза ЛД50 - среднесмертельная доза ЛДГ - лактатдегидрогеназа М - male - самец МДА - малоновый диальдегид МК - массовый коэффициент НАД - никотинамидадениндинуклеотид НАДФ - никотинамидадениндинуклеотид фосфат НСТ - нитросиний тетразолий НЭЖК - неэтерифицированные жирные кислоты ОБ - общий билирубин ОЛ - общие липиды ОШ - основания Шиффа ПОЛ - перекисное окисление липидов РСЛЛ - реакция специфического лизиса лейкоцитов СОД - супероксиддисмутаза СПП - суммационно-пороговый показатель ТГ - триглицериды ТК - триеновые конъюгаты УРПИ - условный рефлекс пассивного избегания ФЛ - фосфолипиды Х - холестерин ЧСС - частота сердечных сокращений ЩФ - щелочная фосфатаза ЩФ - щелочная фосфатаза ЭКГ - электрокардиограмма РЕФЕРАТ

Отчет изложен на 68 страницах машинописного текста, содержит 30 таблиц, 8 рисунков и включает 64 литературных источника.
Объект исследования - многокомпонентная пищевая биологическая активная добавка (БАД) "Активит Антиоксидант", содержащая субстратные антиоксиданты, восстанавливающие их тиолы и ингибиторы изменения степени окисления металлов переменной валентности.
Цель работы - исследование безопасности БАД, содержащих антиоксиданты, и их эффективности на моделях ишемических поражений, а также в условиях воздействия на организм неблагоприятных факторов.
В ходе токсикологического эксперимента с применением фармакологических, электрофизиологических и морфологических методик были изучены параметры токсичности трех экспериментальных рецептур БАД с заданными антиоксидантными свойствами и проверена их эффективность на моделях влияния на организм неблагоприятных факторов.
В результате экспериментальных исследований был оптимизирован состав БАД "Активит-эколоджи" и изучена ее безопасность и эффективность в соответствии с существующей нормативной документацией.
Показано, что исследуемая БАД малотоксична, безопасна и обладает антиоксидантным, антигипоксантным и адаптогенным действиями, эффективна при экспериментальном атеросклерозе, имеет кардио- и нейропротективные свойства.

Ключевые слова: БАД "Активит Антиоксидант"; безопасность; эффективность, антиоксиданты, адаптогенные свойства, профилактика сердечно-сосудистых заболеваний
СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ 7
1. Литературный обзор: современные представления о цитопротективном действии антиоксидантов 9
2. Цитируемая литература 14
3. Методические подходы к созданию антиоксидантных рецептур 17
ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ 20
1. Предварительное изучение биологической активности рецептур БАД "Активит-эколоджи" 20
1.1. Влияние БАД на устойчивость крыс к воздействию высоких температур 20
1.2. Влияние БАД на процессы памяти 21
1.3. Влияние БАД на детоксикацию липофильных ксенобиотиков 23
1.4. Влияние БАД на устойчивость крыс к воздействию гиперкапнической гипоксии 24
1.5. Влияние БАД на степень ишемических повреждений головного мозга при стенозе двух сонных артерий 25
2. Предварительное изучение безопасности рецептур БАД "Активит-эколоджи" 29
2.1. Влияние БАД на прирост массы тела крыс 29
2.2. Влияние БАД на поведение крыс и их условно-рефлекторную деятельность 30
2.3. Влияние БАД на гематологические показатели у крыс 32
2.4. Влияние БАД на выделительную функцию почек 34
2.5. Влияние БАД на биохимические показатели у крыс 36
6,32+0,32 36
2.6. Влияние БАД на сердечно-сосудистую систему 37
2.7. Влияние БАД на структуру внутренних органов 39
2.8. Местно-раздражающее действие БАД 40
3. Исследование безопасности новой отобранной рецептуры БАД "Активит-эколоджи" 44
3.1. Санитарно-химический анализ 44
3.2. Исследование острой токсичности 45
3.3. Хроническая токсичность и способность к кумуляции 47
3.4. Исследование раздражающего действия 51
3.4.1. Местное действие на кожу 51
3.4.2. Действие на слизистую оболочку глаз 51
3.5. Сенсибилизирующее действие 52
3.6. Изучение возможных отдаленных последствий 52
4. Исследования биологической активности 54
4.1. Измерение антиоксидантной активности in vitro 54
4.2. Антигипоксическое действие 54
4.3. Показатели функционального состояния адаптационных систем организма 56
4.4. Влияние на длительность плавания мышей 57
4.5. Влияние БАД на статико-силовую выносливость мышей 58
4.6. Эффективность БАД при экспериментальном атеросклерозе 59
4.6.1. Модель гиперлипидемии 59
4.6.2. Эффективность БАД при экспериментальном атеросклерозе у крыс со специальной диетой 60
4.6.3. Эффективность БАД "Активит Антиоксидант" при экспериментальном липолизе у крыс 62
4.7. Кардио- и нейропротективное действие БАД при алкогольной интоксикации 63
4.7.1. Материалы и методы исследования 63
4.7.2. Результаты исследования 64
5. Результаты применения БАД "Активит-эколоджи" добровольцами 66
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 67
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 68

ВВЕДЕНИЕ

Антиоксиданты традиционно используются для усиления сопротивляемости организма к различным воздействиям, однако, несмотря на многочисленные работы о механизмах их действия, порядке применения, эффективности при различных состояниях и побочных эффектах от несбалансированного применения остаются недостаточно разработанными. Поэтому ЗАО "Фармпроект" ( г. Санкт-Петербург) разработало БАД "Активит Антиоксидант", содержащую в своем составе известные антиоксиданты.
БАД показана как профилактическое средство при сердечно-сосудистых заболеваниях (атеросклероз, ишемическая болезнь сердца, стенокардия напряжения, гипертония), для улучшения состояния больных при постинфарктной реабилитации. Применяется по 1-2 капсулы в день во время приема пищи в течение 20-30 дней.
Настоящая работа была выполнена в Институте токсикологии МЗ РФ в испытательной токсикологической лаборатории лекарственных препаратов, продуктов питания и объектов окружающей среды "АНАЛЭКТ" (аттестат аккредитации № РОСС RU.0001.514726 от 06.02.2004; сертификат аккредитации № ГСЭН.RU.ЦОА.312 от 06.03.2002 Минздрава РФ).
Объем исследований включал санитарно-химический анализ и оценку следующих токсикологических характеристик:
1. Острая токсичность при внутрижелудочном введении.
2. Способность к кумуляции.
3. Возможное раздражающее действие.
4. Возможное сенсибилизирующее действие.
5. Возможные отдаленные последствия.
Оценка предполагаемой биологической активности была проведена в трех направлениях:
1. Изучение антиоксидантных и антигипоксантных свойств.
2. Изучение адаптогенной активности.
3. Изучение противосклеротического действия и эффективности на моделях заболеваний сердечно-сосудистой системы.
Исследования были выполнены в соответствии со следующими нормативными документами:
1. Определение безопасности и эффективности биологически активных добавок к пище. МУК 2.3.2.721-98. МЗ РФ. М., 1999, 87 с.
2. Методические указания к постановке исследований для обоснования санитарных стандартов вредных веществ в воздухе рабочей зоны. № 2163-80. М., 1980, 19 с.
3. Постановка исследований по гигиеническому нормированию промышленных аллергенов в воздухе рабочей зоны. Методические рекомендации. № 2121-80, М., 1980, 16 с.
4. СаНПиН 2.3.2.1078-01. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценностипродовольственного сырья и пищевых продуктов. М., 2002, 270 с.
5. НРБ-99.

При изучении безопасности и эффективности новой БАД исходили из того, что она является нутрицевтиком со свойствами парафармацевтика.

1. Литературный обзор: современные представления о цитопротективном действии антиоксидантов
Свободнорадикальные процессы играют существенную роль в обеспечении жизнедеятельности клеток. Регуляторная функция прооксидантов, а также присутствие их в качестве промежуточных продуктов в ряде жизненно важных ферментативных реакций, наряду с участием в процессах естественной деградации структур клеток, определяют актуальность исследований, посвященных оценке их продукции и инактивации. Совершенствование знаний о механизмах окислительно-восстановительных процессов в организме позволяет определить оксидативный стресс как состояние несоответствия продукции свободных радикалов (СР) емкости антиоксидантных систем, вследствие чего формируются предпосылки для избыточного окисления биосубстратов, модификации и необратимого изменения ферментных систем, нарушения структуры и проницаемости биологических мембран, энергетического дефицита и снижения жизнеспособности клеток. Несоответствие продукции прооксидантов степени их инактивации может развиваться как при чрезмерном образовании свободных кислородных радикалов, так и при истощении антирадикальных систем даже при стационарном уровне генерации биологических окислителей.
Представления о биологической роли свободнорадикальных реакций претерпели за последнее десятилетие существенную эволюцию в связи с открытиями в области ферментативного катализа и регуляции клеточного цикла. Действительно, образование свободных радикалов как нестабильных чрезвычайно реактогенных соединений отмечено при протекании различных биологических процессов в условиях нормы и патологии. При патологических состояниях возможна чрезмерная продукция свободных радикалов, обеспечивающих в естественных условиях регуляторные функции и принимающих участие в биодеградации "изношенного" пластического материала, что приводит к развитию дополнительных повреждений структур клетки. Указанные обстоятельства определили пристальное внимание к оценке регуляции процессов свободнорадикального окисления и актуальность разработки антиоксидантных рецептур, компенсирующих недостаток эндогенных детоксикационных факторов.
В аэробных биологических системах в той или иной мере всегда выполняются условия для поддержания процессов свободно-радикального окисления (СРО) [23]. При этом образуется целый ряд биологических окислителей, обладающих высокой химической активностью и способных модифицировать структуру любой биомолекулы. Поддержание такой окислительной модификации на стационарном уровне осуществляется при участии систем антиоксидантной защиты. В этой связи чрезвычайно важно выяснение соотношения между прооксидантными и антиоксидантными системами организма. Изменение этих соотношений может привести к избыточной активации СРО и фатальным изменениям в биологических системах.
В настоящее время значительное распространение получил термин "оксидативный стресс", под которым понимают состояние гиперпродукции свободных радикалов при функциональной несостоятельности антиоксидантных систем. Изучение "оксидативного стресса" началось с оценки перекисного окисления липидов (ПОЛ), однако вскоре было показано, что окислению могут подвергаться не только полиненасыщенные жирные кислоты мембран, но и белки, часть из которых выполняет ферментативную функцию, а также ДНК, что проявляется в увеличении числа мутаций.
Анализ публикаций, касающийся использования различных антиоксидантов патологических процессах, протекающих с гиперпродукцией СР убедительно свидетельствует о высокой эффективности многокомпонентных антиоксидантных рецептур, состоящих из витаминов (ретинола, токоферола и аскорбиновой кислоты) [3, 8, 25, 28, 29]. Показано, в частности, что усиление терапевтического действия жиро- и водорастворимых антиоксидантов происходит при их сочетанном применении [18, 29]. Кроме того, для обеспечения рециклирования окисленных форм жирорастворимых гасителей свободных радикалов необходимо присутствие водорастворимых антиоксидантов [41]. Было показано, что жирорастворимые антиоксиданты могут потенцировать активность друг друга [24, 48], которая существенно повышается в присутствии холестерина [41]. Активность жирорастворимых антиоксидантов значимо возрастает при сочетанном применении с селенитом натрия [15, 35, 36].
Следует отметить, что биологические мембраны являются наиболее уязвимыми структурами, подверженными свободнорадикальным повреждениям. Благодаря наличию большого количества полиненасыщенных жирных кислот, в которых СН2 группы, стоящие между двойными связями, наиболее часто становятся донорами электронов при прооксидантной атаке, мембраны могут становиться местом протекания каскадных свободнорадикальных процессов, затрагивающих всю клетку. Сами мембраны, даже при высоком содержании окисленных фрагментов не перестают выполнять свои функции [8] до тех пор пока не изменяется их жидкокристалическое состояние, однако повреждение мембранных рецепторов и ионных каналов может приводить к фатальным повреждениям клеток.
Для подавления свободнорадикальных реакций в липидном бислое целесообразно использовать жирорастворимые антиоксиданты (ретинол и токоферол).
Витамин Е за счет гидроксильной группы при бензольном кольце представляет собой донор электронов, которые при рекомбинации с радикалом образует стабильное соединение. При взаимодействии с прооксидантом (окислителем) восстановитель токоферол формирует редокс-пару с окислительно-восстановительным потенциалом в несколько Вольт (для гидроксильного радикала 2,7 В), что обеспечивает однонаправленное протекание окислительно-восстановительной реакции [30]. Лишенный же электрона витамин Е превращается в малоактивный токоферильный радикал [37]. В присутствии восстановленной формы водорастворимого антиоксиданта аскорбиновой кислоты токоферол способен восстанавливать свою активность посредством прямого рециклирования [42, 44, 46].
Другой жирорастворимый антиоксидант ретинол, который в большинстве случаев находится в тканях в виде эфиров пальмитиновой кислоты накапливается в печени в виде суданофильной грануляции в клетках Ито [40]. Было показано, что его антиоксидантные свойства существенно возрастают при сочетанном применении с селенитом натрия [2]. Доказано также, что при комбинации витаминов А и Е можно достичь потенцирования антиоксидантного эффекта в случае избытка токоферола, тогда как избыток ретинола будет снижать антиоксидантные свойства композиции [48]. По-видимому, витамины А и Е могут формировать в мембране динамичные сенсорно-проводящие комплексы, обеспечивающие гашение свободно-радикальных процессов в диэлектрической среде, когда одна молекула антиоксиданта приходится в среднем на 300-500 молекул фосфолипидов [22].
Ингибирование ферментных систем генерации активных форм кислорода хорошо известными фармакопейными препаратами может быть весьма эффективным лечебным мероприятием [14, 49], однако, следует отметить, что ферментативные и неферментативные составляющие антиоксидантной защиты эффективно работают только в соответствующих комплексах [7].
Особую роль в функционировании как вне-, так и внутриклеточных антиоксидантных систем организма играют соединения, в состав которых входят SH- содержащие аминокислоты: цистеин, цистин, метионин. Наиболее значимое место среди водорастворимых тиолов принадлежит глутатиону, трипептиду цистеина, глутаминовой кислоты и глицина, формирущего окислительно-восстановительную тиолдисульфидную систему [11, 26, 45]. Установлено, что SH-содержащие соединения подвергаются окислению в первую очередь, предохраняя тем самым другие функциональные группы и молекулы [38]. Сдвиги равновесия между SH- и SS-формами тиолов приводят к радикальной перестройке режимов жизнедеятельности клетки: изменению фукционального состояния клеточных рецепторов и факторов транскрипции, активности ферментов (в т.ч. антиоксидантных), проницаемости клеточных мембран, интенсивности метаболических процессов [1, 12]. Отклонение равновесия в сторону окисления может оказаться критическим для клеточных физиологических процессов и имеет существенное значение в генезе различных форм патологии [26, 39]. Поэтому соотношение восстановленных и окисленных SH-групп в биосредах, их способность к окислительной модификации (антирадикальная емкость) считаются важными критериями неспецифической резистентности организма [26, 27, 31].
SH-содержащим соединениям, в первую очередь глутатиону, принадлежит ведущая роль в защите клеток от радикала ОН., в восстановлении окисленных форм других жиро-и водорастворимых антиоксидантов, в поддержании специфической активности антиоксидантных энзимов, а также в обеспечении функционирования биохимических механизмов детоксикации ксенобиотиков. Именно поэтому глутатион принято считать узловым звеном биохимического гомеостатирования внутренней среды организма [16, 32].
В настоящее время невозможно пополнение внутриклеточного пула глутатиона посредством его введения извне, даже в виде его эфиров - тиопоэтинов [5], вследствие отсутствия у него пенетрантной способности по отношению к клеточным мембранам. Поэтому основной путь повышения антирадикальной емкости биологических систем состоит в насыщении биосред малотоксичными легкоокисляющимися соединениями, своеобразными химическими ловушками активных форм и радикалов кислорода. В качестве таких гасителей радикалов могут выступать глюкоза, диметилсульфоксид, мочевая кислота, одно- и многоатомные спирты. Именно исходя из этого, можно объяснить слабый радиопротекторный эффект алкоголя в дозах, вызывающих среднюю степень опьянения [17, 34]. Этим соединениям еще предстоит найти свое место среди препаратов, предназначенных для фармокологической коррекции проявлений оксидативного стресса.
Селен выступает в роли аналога серы, элемента 6 группы, проявляющий в достаточно малых концентрациях сильный токсический эффект [19], тогда как в микроколичествах способный усиливать действие антиоксидантов [2]. Суммарные данные о токсичности и потребности селена получены приемущественно учеными из Новосибирского научного центра и сведены в таблице 1.1 [19].

Таблица 1.1
Действие селена на организм при различном содержании в воде и в пище
Суммарная суточная доза, мкг/кг Действие 8 Дефицит 25-33 Оптимальное 750 Токсическое
Эпидемиологические исследования доказали тесную отрицательную связь между заболеваемостью населения злокачественными новообразованиями и содержанием селена в потребляемой пище. Снижение содержания селена в крови ниже 45 мкг/л (при норме 150-250 мкг/л [10]) увеличивает риск возникновения рака в 3,1 раза [47]. Установление роли селена как незаменимого для организма микроэлемента послужило основанием для его включения в список обязательных нутриентов в европейских странах и США для беременных и кормящих матерей в количестве 55-75 мкг/сутки [6], что почти вдвое превышает данные российских ученых.
Селен входит в состав активного центра ключевого фермента антирадикальной защиты глутатионпероксидазы, повышение активности которой реципрокно активирует другие ферменты обмена глутатиона [9, 13, 21, 43]. Кроме того, сам селен в составе селенита натрия имеет степень окисления +4 и обладает свойствами достаточно сильного окислителя с потенциалом +0,74 В [33]. Из этого следует, что селенитный ион способен выполнять в организме роль прооксиданта, превращаясь в элементарный селен. Действительно селенит натрия способен окислять аскорбиновую кислоту до дигиброаскорбиновой [4], ненасыщенные углеводороды в спирты [20], а также 6-метилурацил ДНК до его дериватов [50]. Этим определяются токсические эффекты селена и трудность его использования в составе антиоксидантных рецептур, содержащих аскорбиновую кислоту. Вместе с тем, именно благодаря прооксидантным эффектам селен в микроколичествах способен стабилизировать степень окисления металлов переменной валентности, предотвращая реакции Фентона с образованием самого сильного биологического окислителя - гидроксильного радикала. Будучи аналогом серы селен способен образовывать селеноспирты и селенокислоты, а восстановительные свойства группы SeH, заметно выше, чем у тиольной группировки SH.
Таким образом, современные представления о развитии процессов свободнорадикального окисления биомакромолекул определяют комплексный подход в применении антиоксидантов и актуализируют создание высокоэффективных сбалансированных хорошо переносимых рецептур на основе:
* ловушек свободных радикалов, реализующих свои эффекты в водо- (аскорбат) и жирорастворимой (этанол, токоферол) фазах;
* восстанавливающих их низкомолекулярных тиолов (метионин, унитиол, липоевая кислота, эфиры цистеина), выполняющих роль протеза глутатиона, попытки введения которого извне были малоэффективными;
* соединений селена, усиливающих действие антиоксидантов. Соединения селена должны применяться в адекватных количествах, исключающих токсические эффекты микроэлемента.

2. Цитируемая литература
1. Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.Н. Человек и противоокислительные вещества. - Л.: Наука. Ленингр.отд-ние. - 1985. - 232 с.
2. Авакян А.О., Мкртчян М.А., Тапалцян С.Х. и др. // Теоретические и прикладные аспекты изучения питания человека / Ин-т питания АМН СССР. - М., 1980. - С. 114.
3. Барабой В.А., Брехман И.И., Голотин В.Г., Кудрящов Ю.Б. Перекисное окисление и стресс. - СПб.: Наука, 1992. - 148 с.
4. Берка А., Вултерин Я., Зыка Я. Новые редокс-методы в аналитической химии. - М.: Химия 1968. - 318 с.
5. Борисов А.Е., Кожемякин Л.А., Антушевич А.Е. и др. // Вестн. хирургии. - 2001. - Т. 160, № 4. - С. 32-38.
6. Воронцов И.М. // Педиатрия. - 1999. - № 5. - С. 87-92.
7. Воскресенский О.Н., Бобырев В.Н. // Вопр. мед.химии. - 1992. - № 4. - с.21.
8. Геннис Р. Биомембраны: Молекулярная структура и функции: Пер. с англ. - М.: Мир, 1997. - 624 с.
9. Гусейнов Г.М., Насибов Э.М., Джафаров А.И. // Биохимия. - 1990. - Т. 55, № 3. - С. 499-507.
10. Иванов В.Н., Никитина Л.П., Вощенко А.В. // Экологозависимые состояния: Тез. докл. Всерос. научно-практической конф. - Чита, 1998. - С. 45-46.
11. Колесниченко Л.С., Кулинский В.И. // Успехи соврем.биологии. - 1989. - Т. 107, № 2. - С.179-194.
12. Котеров А.Н., Филиппович И.В. // Радиац. биология. Радиоэкология. - 1995. - Т.35, № 2. - С. 162-180.
13. Кругликова Г.О., Штутман Ц.М. // Укр. бiохим. журн. -. 1976. - Т. 48, № 2. - С. 223-228.
14. Мамучишвили Н.К., Фролов Ю.И., Гончар-Зайкин А.П., Яковлев А.Я. // Воен.-мед. журн. - 1996. - № 1. - С.29-31.
15. Меджидов М.М., Алиев А.А., Рзаева Д.А. и др. // Тез. докл. IV конф. "Биоантиоксидант". - М., 1993. - Т. 1. - С. 138.
16. Меньщикова Е.Б., Зенков Н.К. // Успехи соврем.биологии. - 1993. - Т. 113, № 4. - С. 442-455.
17. Меньщикова Е.Б., Зенков Н.К. // Успехи соврем.биологии. - 1997. - Т. 117, № 2. - С. 155-171.
18. Морозова Т.С., Суколинский В.Н., Стрельников А.В. // Вопр. мед. химии. - 1991. - Т. 37., № 6. - С. 59-61.
19. Новиков Ю.В., Плитман С.И., Секлетина Н.И., Ноаров Ю.А. // Гигиена и санитария. - 1984. - № 9. - С. 66-68.
20. Общая органическая химия / Под ред. Д. Бартона, В.Д. Оллиса. - М.: Химия, 1982. - Т. 2. - 528 с.
21. Паранич А.В. // Физиол. журн. - 1984. - № 2. - С. 217-222.
22. Плужников Н.Н., Бакулина Л.С., Легеза В.И. и др. // Актуальные проблемы и перспективы развития военной медицины. - Т. 4. Под ред. Н.Н. Плужникова. - СПб, 2003. - С. 123-139.
23. Плужников Н.Н., Чиж С.И., Юзвинкевич Л.С. и др. // Актуальные проблемы и перспективы развития военной медицины. - Т. 2. Под ред. Н.Н. Плужникова. - СПб, 2000. - С. 193-223.
24. Рутковская Ж.А. Антиоксидантная система организма и ее коррекция новым комплексом ?-каротина и витаминов А, Е, С при действии ионизирующего излучения: Автореф. дисс. ... канд. биол. наук. - Минск, 1996. - 17 с.
25. Рябченко Н.И., Иванник Б.П., Хорохорина В.А. и др. // Радиац. биология. Радиоэкология. - 1996. - Т. 36., № 6. - С. 895-898.
26. Соколовский В.В. // Вопр.мед.химии. - 1988. - Т.34, № 6. - С.2-11.
27. Соколовский В.В. Толдисульфидное соотношение крови как показатель неспецифической резистентности организма: Учеб. пособие. - СПб.: МАПО, 1996. - 29 с.
28. Степуро И.И. // Вопр. мед. химии. - 1992. - Т. 38, № 4. - С. 26-33.
29. Суколинский В.Н. // Вопр. онкологии. - 1990. - Т. 36, № 2. - С. 138-144.
30. Тимофеев-Ресовский Н.В., Савич А.В., Шальнов М.И. Введение в молекулярную радиобиологию (физико-химические основы). - М.: Медицина, 1981. - 320 с.
31. Тиунов Л.А. // Вестн.РАМН. - 1995. - № 3. - С.9-13.
32. Тиунов Л.А., Иванова В.А. // Вестн. АМН СССР. - 1988. - № 1. - С.62-69.
33. Турьян Я.И. Окислительно-восстановительные потенциалы в аналитической химии. - М.: Химия, 1989. - 243 с.
34. Ушаков И.Б., Лапаев В.Э., Воронцова З.А., Должанов А.Я. Радиация и алкоголь. - Воронеж, 1998. - 248 с.
35. Холмухамедова Н.М. // Тез. докл. IV конф. "Биоантиоксидант". - М., 1993. - Т. 2. - С. 93-94.
36. Холмухамедова Н.М., Зиямутдинова З.К., Николаев А.И. // Тез. докл. IV конф. "Биоантиоксидант". - М., 1993. - Т. 1. - С. 180.
37. Храпова Н.Г. // Биофизика. - 1977. - Т. 22, № 3. - С. 436-443.
38. Arnhold J. Hammerschmidt S., Arnold K. // Biohim.Biophys.Acta. - 1991. - Vol. 1097, № 2. - P.145-151.
39. Fliss H., Menard M. // Arch. Biochem. Biophys. - 1992. - Vol.293, № 1. - P.195-199.
40. Friedman S.L. // Semin. Liver Dis. - 1999. - Vol. 19, N 2. - P. 129-140.
41. Fukuzawa K., Chida M., Duchi S. et al. // Vitamins. - 1982. - Vol. 56, N 12. - P. 641-652.
42. Halpner A.D., Handelman G.J., Harris J.M. et al. // Arch. Biochem. Biophis. - 1998. - Vol. 359, N 2. - P. 305-309.
43. Harrison J.H., Conrad H.R. // J. Dairy Sci. - 1984. - Vol. 67, N 19. - P. 2464-2470.
44. May S.M., An Z., Mendiratta S. // Arch. Biochem. Biophis. - 1998. - Vol. 359, N 2. - P. 281-289.
45. Meister A., Anderson M.E. Glutathione // Ann.Rev.Biochem. - 1983. - Vol.52, № 3. - P.711-760.
46. Scarpa M., Regio A., Majorino M. et al. // Biochem. Biophis. Acta. - 1985. - Vol. 801. - N. 2. - P. 201-237.
47. Shamberger R.T. // Biochem. Essent. Ultratruse. Elem. - N.Y., 1984. - P. 215-219.
48. Tesoriere L., Bongiorno A., Pintandi A.M. et al. // Arch. biochem. biophis. - 1996. - Vol. 326, N 1. - P. 57-63.
49. Trojsi E., Battaglia D., Costume A., Bertini A. II ruolo della riperfusione nella patogenesi della sindrome da schiacciamento // G. Med. Milit. - 1997. - Vol.143, № 2. - P.180-183.
50. Zee-Chang K.Y., Cheng C.C. // J. Heterocycl. Chem. - 1967. - Vol. 4, N 1. - P. 163-165.

3. Методические подходы к созданию антиоксидантных рецептур
Совершенствование знаний о механизмах окислительного повреждения при развитии различных патологических процессов позволит направленно применять препараты, блокирующие образование свободных радикалов, однако в настоящее время реализовать данный подход к профилактике и терапии повреждений не представляется возможным. Его реализация не может обеспечить универсального безопасного применения антиоксидантных рецептур по аналогии с естественными метаболитами - ловушками свободных радикалов.
Известны попытки создания фармакопейных витаминно-минеральных комплексов и БАД, содержащих несколько антиоксидантов, однако ни в одном случае, кроме рецептур семейства "Активит" не был реализован комплексный подход к формированию антиоксидантной рецептуры.
Фирма ICN осуществляла выпуск препарата "Олигогал-Se", включающий витамины А, С и Е, а также органически связанный Se. К сожалению, этот высокоэффективный комплекс в настоящее время отсутствует на фармацевтическом рынке. Наиболее близким аналогом этого препарата являются сложные витаминно-минеральные комплексы "Триовит" и "Сельмевит". Из числа инъекционных форм следует привести препарат "Аскотиол", содержащий тиосульфат натрия, трансформирующийся в SH-содержащий изомер, и аскорбиновую кислоту. Препарат удобен для неотложной терапии, однако в этом случае липотропные антиоксиданты должны добавляться отдельно.
Известен опыт создания БАД с антиоксидантами. В частности препарат "Селен-актив" содержит 50 мг аскорбиновой кислоты и органически связанный селен. Хорошо изучены антиоксидантные свойства БАД, содержащих ?-каротин, витамины С и Е. Эти препараты оказывали умеренное адаптогенное действие и рекомендовались для применения в гериатрической практике для продления работоспособного возраста пожилых людей. Вместе с тем ни один препарат не содержит обоснованного набора компонентов, способных эффективно взаимодействовать друг с другом в составе антиоксидантных комплексов. Необходимость введения серы в состав рецептур впервые после гомеопатических средств была актуализирована фирмой "Эскомон", которая организовала производство пивных дрожжей с селеном, серой, аскорбиновой кислотой, цинком и др. Остается сожалеть, что данные компоненты вводились в рецептуру поодиночке. Вместе с тем, это достаточно эффективные комплексы, которые в определенной степени можно считать прототипами заявляемых препаратов, однако ни в одном из них принцип комплексного составления антиоксидантных рецептур не реализован полностью. Отсутствует адекватно обоснованное соотношение антиоксидантов с учетом их роли в процессах детоксикации свободных радикалов, что снижает антирадикальную емкость рецептур.
Предметом дискуссии остается включение в профилактическую рецептуру других витаминов и микроэлементов, наподобие препарата "Сельмевит". Известно, что при комбинации более 7 средств побочные эффекты препаратов могут превышать прямой терапевтический эффект. Проблема обостряется тем, что в многокомпонентных препаратах зачастую компоненты, содержащиеся в микроколичествах, инактивируются друг другом или компонентом наиболее представленным в комплексе. Эти обстоятельства существенно снижают ценность большинства многокомпонентных рецептур, составленных только на основании суточной потребности организма в определенных витаминах и микроэлементах. При создании рецептур группы "Активит" было установлено, что Активит Антиоксидант как восстановитель взаимодействует с селенитом натрия как сильным окислителем. Этим, с одной стороны, снижаются прооксидантные свойства селенита при его трансформации в элементарный селен, который хорошо усваивается в организме. С другой стороны, при окислении аскорбиновой кислоты в дигидроаскорбиновую ее антиоксидантные свойства существенно не меняются, особенно при избытке аскорбата.
Особый вопрос возникает при дозировании препаратов селена. Многочисленные опыты на крысах, проведенные при участии специалистов ЗАО "Фармпроект", свидетельствуют о токсических эффектах селена при месячном применении в дозах, рекомендованных американскими учеными. Вследствие этого при создании рецептур группы "Активит" учтены данные новосибирских исследователей, а дозы селена приняты оптимальная за 25-30 мкг, максимальная - 50 мкг.
Накапливаются данные об опасности передозировки витамина А, проявляющейся в том числе и в остеопорозе и повышенном риске тератогенеза, что является препятствием к беременности на протяжении 6 месяцев после приема препарата в стандартной терапевтической дозировке. Это было учтено при создании комплекса "АктивиАнтиоксидант", в который витамин А введен в объеме суточной потребности организма для потенцирования эффектов токоферола.
Учитывая большую метаболическую значимость тиолов, целесообразно применять препараты, которые при своем метаболизме образуют структурные компоненты глутатиона, как компонента биологической антиоксидантной защиты клеток. К числу таких средств относится метионин. Кроме того, следует учитывать, что липоевая (тиоктовая) кислота, кроме своей антиоксидантной сущности является кофактором ферментативных реакций, в том числе и пируватдегидрогеназного комплекса, обеспечивающего сопряжение цитозольных и митохондриальных процессов энергетического обмена клеток.
Анализируя вышеизложенное следует заключить, что эффективно только комплексное применение низкомолекулярных антиоксидантов совместно с восстанавливающими их тиолами и блокаторами металлов переменной валентности. Подобная комбинация обеспечивает взаимное усиление эффектов и предупреждает возможность развития прооксидантных свойств. Учитывая двойственную сущность низкомолекулярных антиоксидантов, их способность при определенных условиях выступать в качестве прооксидантов, чрезвычайно важно соблюдение строго определенного молярного соотношения тиолов и других компонентов в комплексе препаратов, а также соблюдение общей антирадикальной емкости рецептуры. В создании нового поколения рецептур "Активит" учтена возможность использования тиолов (липоевой кислоты) с дополнительной метаболической активностью, что также можно рассматривать как новый принцип в построении подобных БАД.
Таким образом, при создании БАД "Активит Антиоксидант" были применены три варианта рецептур, различающихся по содержанию селенита натрия:
Рецептура № 1:
Витамин Е - ацетат - 50 мг Витамин А - ацетат - 1,5 мг Витамин С - 80 мг Селенит натрия (в пересчете на селен) - 0,02 мг Метионин - 100 мг Липоевая кислота - 80 мг Микрокристалическая целлюлоза - до массы содержимого капсулы 390 мг
Рецептура № 2:
Витамин Е - ацетат - 50 мг Витамин А - ацетат - 1,5 мг Витамин С - 80 мг Селенит натрия (в пересчете на селен) - 0,05 мг Метионин - 100 мг Липоевая кислота - 80 мг Микрокристалическая целлюлоза - до массы содержимого капсулы 390 мг
Для выбора наиболее биологически активной и безопасной рецептуры были проведены предварительные скрининговые эксперименты. Их результаты представлены в следующем разделе.
ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ
1. Предварительное изучение биологической активности рецептур БАД "Активит Антиоксидант"
Эффективность БАД оценивали на крысах после четырехнедельного ежедневного однократного внутрижелудочного (через зонд) применения рецептур "Активит Антиоксидант" в одиночной и удвоенной дозе. Дозу БАД рассчитывали, исходя из массы капсулы (390 мг), предназначенной для приема среднестатистическим человеком массой 60 кг. Опыты выполняли на белых крысах-самцах, полученных из питомника РАМН "Рапполово" с начальной массой тела 220-300 г. Животных содержали в стандартных условиях вивария на пищевом рационе, регламентированном приказом МЗ № 1179 от 10.10.83 г.

1.1. Влияние БАД на устойчивость крыс к воздействию высоких температур
Воздействие температурного фактора традиционно используется для оценки адаптогенных свойств БАД и позволяет провести комплексную оценку влияния средств на метаболичекие системы, устойчивость функционирования которых в условиях гипертермии определяет выживаемость особей.
Для оценки устойчивости крыс в условиях гипертермии группы по 6 животных в клетке (одна экспериментальная группа) помещали в вентилируемый термостат и выдерживали при температуре 60 оС. Устройство термокамеры позволяло обеспечить адекватный газообмен, достаточный для предупреждения кислородной недостаточности, и предусматривало наблюдение за животными через смотровое застекленное отверстие. В ходе наблюдения регистрировали развитие симптоматики поражения и отмечали время манифестации судорожного синдрома и время гибели особей. Результаты экспериментов приведены в таблице 1.1.1.
Таблица 1.1.1
Влияние комплексных антиоксидантных БАД при четырехнедельном введении на устойчивость крыс к воздействию высоких температур (X+mx, n=6)
Вариант введения БАД Контролируемый показатель, мин Начало судорог Время гибели Дистиллированная вода (контроль) 33,2+1,6 40,0+2,2 "Активит-эколоджи", рецептура № 1, 1 доза 40,8+1,7 44,7+1,9 "Активит-эколоджи", рецептура № 2, 1 доза 37,5+2,2 40,7+2,0 Примечание: различия с контролем не достоверны
Данные, приведенные в таблице 1.1.1, свидетельствуют о том, что исследуемые рецептуры БАД при четырехнедельном применении оказывают положительное влияние на устойчивость крыс к гипертермии. Насыщение тканей тиоловыми антиоксидантами, по-видимому, способствует более интенсивной инактивации кислородных и азотистых радикалов, роль которых в развитии судорожной готовности в настоящее время считается доказанной. Скорость развития судорожного синдрома у животных, получавших БАД, имела отчетливую тенденцию к снижению, а продолжительность жизни животных подопытных групп в условиях гипертермии достоверно увеличивалась при приеме БАД с низким содержанием селена (рецептура № 1).
Результаты экспериментов дают основание считать, что исследуемые рецептуры БАД, в особенности рецептура № 1, обладают адаптогенным действием и при курсовом применении способны увеличить устойчивость к воздействию экстремальных факторов, а также повысить толерантность организма к физическим нагрузкам.

1.2. Влияние БАД на процессы памяти
Для определения нейротрофических эффектов рецептур БАД с антиоксидантами оценивали их влияние на память крыс, оцениваемую по степени формирования и закрепления у крыс элементарных оборонительных условных рефлексов, в частности условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ). Наблюдение за угасанием УРПИ дает возможность регистрировать нарушения высшей нервной деятельности (ВНД) в динамике и может быть использовано в хроническом опыте.
Аппарат для выработки рефлекса пассивного избегания представлял собой длинный фанерный ящик, разделенный на 6 отсеков. Каждый отсек состоял из освещенной камеры, в которой монтировали лампу накаливания мощностью 40 Вт, и затемненной камеры, пол которой выполнен медными стержнями диаметром 2 мм, к которым через латер и замыкающий ключ подавали ток от сети. Камеры были разделены перегородкой с отверстием, которое перекрывалось заслонкой.
Предварительно производили отбор крыс с легко вырабатываемым рефлексом. Отбраковывали животных, которые после помещения в светлую камеру не заходили в темную зону в течение 60 секунд или находились в ней менее 15 секунд.
Для выработки рефлекса 6 крыс одномоментно помещали в освещенную камеру, хвостом к отверстию в перегородке. Обследуя светлую камеру, крысы находили отверстие и переходили в темную зону. В это время отверстие закрывали перегородкой и крыс подвергали импульсному воздействию электрического тока (пять ударов продолжительностью по 10 секунд при напряжении 40 В). После раздражения отверстие открывали и крысы переходили в ярко освещенные камеры. Рефлекс считался выработанным и сохранившимся в случае пребывания крысы в освещенной зоне более 1 мин. УРПИ формировали через 14 суток после начала применения БАД, а его проявления регистрировали до окончания приема БАД и на протяжении недельного восстановительного периода. Результаты экспериментов представлены на рисунке 1.2.1.

Рисунок 1.2.1. Частота воспроизведения УРПИ после однократной стимуляции крыс (напряжение 10 В, продолжительность 2 секунды) в контрольной группе и при приеме рецептуры № 2 "Активит Антиоксидант" в одной дозе на протяжении 28 суток.

Рисунок 1.2.2. Частота восстановления УРПИ после однократной стимуляции крыс (напряжение 10 В, продолжительность 2 секунды) в контрольной группе и при приеме рецептуры № 2 "Активит Антиоксидант" в одной дозе на протяжении 28 суток.

Результаты экспериментов, представленные на рисунке 1.2.1, дают основание заключить, что применение рецептур БАД "Активит Антиоксидант" позволяет активировать когнитивные процессы и в большей степени закрепить сформированный оборонительный рефлекс. Через 4 и 10 суток после электроболевого воздействия память о нем в большей степени сохраняется у крыс, получавших БАД. В последующем периоде наблюдения достоверных различий между экспериментальными группами и контролем не отмечено. Установлено, что отмена применения БАД не влияет на скорость угасания УРПИ у крыс.
Анализируя лабильность памяти (рисунок 1.2.2) по показателю забывания или восстановления рефлекса пассивного избегания у крыс можно сделать вывод о том, что применение "Активит Антиоксидант" незначительно замедляет забывание болевого раздражения и в большей степени восстанавливает память о нем при длительном приеме.
Таким образом, исследованные БАД оказывают позитивное влияние на когнитивные процессы, а их применение способствует лучшему запоминанию информации, что может быть использовано при операторской деятельности и при необходимости обработки большого количества информации.

1.3. Влияние БАД на детоксикацию липофильных ксенобиотиков
Тест, характеризующий степень влияния БАД на метаболизм липофильных ксенобиотиков в печени обычно используют при оценке переносимости БАД, определяя степень угнетения метаболических процессов. Вместе с тем, в данном случае результаты экспериментов могут быть приведены как показатель эффективности БАД, способствующих интенсификации процессов печеночной детоксикации.
Крысам контрольной и опытных групп, получавшим на протяжении 28 суток БАД "Активит Антиоксидант" (рецептура № 2) в одной и двух дозах, внутрибрюшинно вводили барбитурат барбамил, претерпевающий печеночный метаболизм, обеспечивающий его детоксикацию и нивелирование терапевтического снотворного действия. Барбитурат вводили внутрибрюшинно в дозе 100 мг/кг, достаточной для достижения снотворного эффекта у 100 % интактных животных. Регистрировали количество заснувших животных в каждой экспериментальной группе. Время наступления сна отмечали в момент принятия животным бокового положения, а временем окончания сна считали момент возвращения крысы в ортостатическое положение. Результаты экспериментов приведены в таблице 1.3.1.
Результаты, представленные в таблице 1.3.1 свидетельствуют о чрезвычайно высокой вариабельности показателей у крыс контрольной и опытной групп. Вместе с тем, при введении крысам исследуемой рецептуры БАД на протяжении 28 суток при отсутствии значимых изменений в продолжительности барбитуратного сна отмечали отсрочку развития каталепсии, приблизительно в два раза превышающую контрольные показатели. Этот эффект не был дозозависимым и не отмечался при приеме БАД в удвоенной дозе. Это свидетельствует, с одной стороны, об адекватной переносимости БАД, а с другой стороны, не исключает их позитивного влияния на процессы печеночной детоксикации липофильных ксенобиотиков, в том числе и алкоголя.
Таблица 1.3.1
Влияние комплексных антиоксидантных БАД при четырехнедельном введении на продолжительность барбамилового сна у крыс (X+mx, n=6)
Группа эксперимента Количество заснувших крыс, голов Контролируемый показатель, мин Время засыпания Время пробуждения Продолжительность сна Крысы, получавшие дистиллированную воду
(контроль) 6 4,73+0,28 120,54+11,41 115,82+11,42 Крысы,
получавшие БАД,
рецептура № 2,
1 доза 6 10,04+3,39* 110,34+8,91 100,3+9,50 Крысы, получавшие БАД,
рецептура № 2,
2 дозы 6 5,94+0,51 116,35+4,49 110,41+4,26 * - различие с контролем достоверно
Результаты этих экспериментов позволяют рекомендовать БАД при приеме токсичных веществ и лекарств, метаболизируемых в печени, с предупреждением о необходимости корректировки их дозы. Не исключено, что предлагаемые БАД могут оказывать мягкое гепатопротективное действие и применяться для восстановления функций органа после операций, травм и воспалительных заболеваний.

1.4. Влияние БАД на устойчивость крыс к воздействию гиперкапнической гипоксии
Традиционно эффективность БАД, обладающих адаптогенными и цитопротективными свойствами, оценивается при гипоксических нагрузках в силу универсальности данного состояния при различных экстремальных воздействиях и патологических состояниях.
Установлено, что достаточной антигипоксической активностью обладают вещества из группы гутимина, основной эффект которых сопряжен с оптимизацией расходования кислорода посредством редукции его потребления альтернативными по отношению к митохондриальной дыхательной цепи процессами. К числу таких процессов, ингибируемых препаратами данной группы, относится гидроксилирование ксенобиотиков в печени при участии цитохрома Р-450 и монооксигеназ смешанных функций. Ранее был показан антигипоксический эффект ингибиторов синтетазы оксида азота. Рассматриваемые БАД содержат тиольные группы, способные связать оксид азота и образовавшиеся свободные радикалы, однако они не препятствуют их образованию. В то же время, было показано позитивное влияние БАД на кислородзависимый процесс детоксикации ксенобиотиков.
Гипоксию моделировали эксикаторе с водяным замком, позволяющим обеспечивать нормобарическую гипоксию при постоянном увеличении количества углекислого газа за счет поступления выдыхаемого животными воздуха. Крыс помещали в камеру попарно (по одной из каждой экспериментальной группы) и наблюдали до развития смертельного исхода, регистрируя частоту и скорость развития судорожного синдрома, а также продолжительность жизни животных. Результаты экспериментов приведены в таблице 1.4.1.
Таблица 1.4.1
Влияние комплексных антиоксидантной БАД при четырехнедельном введении на устойчивость крыс при гиперкапнической гипоксии (X+mx, n=6)
Группа эксперимента Контролируемый показатель, мин Начало судорог Время гибели Крысы, получавшие дистиллированную воду
(контроль) 26,0+1,4 28,8+0,9 Крысы, получавшие БАД, рецептура № 2,
в одной дозе 42,2+2,3* 44,3+2,0* * - различие с контролем достоверно Результаты теста свидетельствуют о том, что применение "Активит Антиоксидант" способствует значимому повышению устойчивости животных при воздействии неблагоприятных факторов, моделирующих условия закрытых помещений, задымленной среды и подземного транспорта. Результаты этих наблюдений могут позволить позиционировать БАД как средство для приема городскими жителями для профилактики экологозависимых патологических состояний.

1.5. Влияние БАД на степень ишемических повреждений головного мозга при стенозе двух сонных артерий
Известно, что наибольшую угрозу среди болезней цивилизации составляют сердечно-сосудистые заболевания, доля которых в общей структуре болезней постоянно возрастает. Совершенно очевидно, что БАД не должны рассматриваться как средства основной терапии сосудистых катастроф, таких как инфаркт миокарда и инсульт головного мозга. Их применение должно снижать риск развития подобных состояний, способствовать ограничению объемов и выраженности повреждений, обеспечивать более быстрое восстановление функций. Исследование эффективности БАД было проведено также на моделях ишемии головного мозга. В этой связи проводили оценку профилактической эффективности созданной БАД на модели ишемического инсульта по показателям развития оксидативного стресса с регистрацией как его выраженности, так и исходов в виде накопления продуктов пероксидации, что позволяет всесторонне охарактеризовать эффекты антиоксидантных БАД.
Из четырех сосудов, принимающих участие в кровоснабжении головного мозга крысы, были одномоментно перевязаны 2 сонные артерии. Операцию выполняли под кетаминовым наркозом. Наблюдение за наркотизированными животными осуществляли в течение 2,5 ч после стенозирования, после чего крыс декапитировали и извлекали головной мозг для биохимического исследования. Активность каталазы эритроцитов оценивали по скорости распада перекиси водорода, введенной в среду в известном количестве. Антирадикальную емкость плазмы крови и гомогенатов головного мозга оценивали по восстановлению свободного радикала, дифенилпикрилгидразила, причем более низкие показатели оптической плотности этого окрашенного продукта свидетельствовали о восстановлении радикала и характеризовали эффект антиоксидантных препаратов. Диеновые конъюгаты гидроперекисей жирных кислот экстрагировали из крови и гомогенатов головного мозга изопропанолом и гептанолом для раздельного определения в фосфолипидной фракции мембран. Известно, что продукты пероксидации способны поглощать проходящий свет с ?=232 нм, тогда как неокисленные двойные связи поглощают при длине волны ?=220 нм. Отношение показателей экстинции свидетельствовало о доли продуктов пероксидации в общей липидной фракции. Определение показателей оптической плотности производили на спектрофотометре СФ-26. Результаты спектрофотометрии проб крови приведены в таблице 1.5.1.

Таблица 1.5.1

<< Пред. стр. 1 (из 3) След. >>

Список литературы по разделу