<< Пред.           стр. 2 (из 3)           След. >>

Список литературы по разделу

 Показатели перекисного окисления липидов в крови крыс после двусторонней перевязки сонных артерий на фоне четырехнедельного применения
 "Активит Антиоксидант"
 Показатель Группа Интактные
 (без перевязки) Дистиллированная вода
 (контроль) БАД, рецептура № 2, 1 доза Активность каталазы 0,250+0,009 0,242+0,021 0,219+0,025* Восстановление
 дифенилпикрилгидразила 0,573+0,023 0,556+0,028 0,474+0,026* Диеновые конъюгаты -изопропанольная фракция 0,201+0,031 0,238+0,029 0,166+0,035 Диеновые конъюгаты -
 гептанольная фракция 0,842+0,031 0,851+0,057 0,735+0,027* Примечание: * - различие с позитивным контролем достоверно
  При исследовании крови животных выявлены наиболее существенные различия между показателями контрольных групп и группы с применением БАД. Доказано, что активность каталазы в крови у животных, принимавших "Активит Антиоксидант" остается на низком уровне, что отражает отсутствие субстрата для данного фермента, появляющегося в ходе реакций оксидативного стресса. Не исключено, что даже в случае появления перекиси водорода в крови она будет инактивирована неферментативным звеном антиоксидантной системы, о чем свидетельствует высокий уровень инактивации дифенилпикрилгидразина у крыс, в течение четырех недель употреблявших в пищу антиоксидантные препараты. Диеновые конъюгаты гидроперекисей жирных кислот выявляли в крови подопытных крыс в гораздо меньшем количестве, по сравнению с контрольными группами.
  Все прослеженные изменения позволяют предполагать, что применение антиоксидантных БАД способствует инактивации свободных радикалов и снижает повреждающие эффекты последних при развитии сосудистой патологии.
  Кроме характеристик содержания продуктов перекисного окисления липидов в крови проводили изучение процессов перекисного окисления непосредственно в очаге повреждения. Результаты спектрофотометрии проб гомогенатов головного мозга приведены в таблице 1.5.2.
 
 
 
 Таблица 1.5.2
 Показатели перекисного окисления липидов в головном мозге крыс после двусторонней перевязки сонных артерий на фоне четырехнедельного применения "Активит-эколоджи"
 Показатель Группа Интактные
 (без перевязки) Дистиллированная вода
 (контроль) БАД, рецептура № 2, 1 доза Восстановление
 дифенилпикрилгидразила 0,095+0,022 0,103+0,035 0,048+0,010* Диеновые конъюгаты -изопропанольная фракция 0,179+0,035 0,168+0,021 0,145+0,008* Диеновые конъюгаты -
 гептанольная фракция 0,555+0,030 0,546+0,009 0,552+0,005 Примечание: * - различие с позитивным контролем достоверно
  Результаты, приведенные в таблице 1.5.2 дают основание считать, что применение БАД снижает содержание диеновых конъюгатов в экстрагируемой изопропанолом фосфолипидной мембранной фракции, чем обеспечивает защитный эффект на уровне клеток и тканей. Применение БАД способствует существенной активации неферментативного звена антиоксидантной защиты.
  Таким образом, применение исследованных БАД в течение четырех недель позволяет достичь адекватного цитопротективного эффекта, сопряженного с ограничение пероксидации липидов и существенной активацией неферментативного звена антиоксидантной системы.
  В целом, исследованные рецептуры БАД (особенно рецептура № 1) по результатам комплексных тестов проявили достаточную активность и могут быть рекомендованы для широкого применения в качестве нутрицевтиков с парафармацевтическими свойствами, обладающие значимым цитопротективным эффектом.
 2.
 Предварительное изучение безопасности рецептур БАД "Активит Антиоксидант"
  Острую токсичность БАД определяли табличным методом В.Б. Прозоровского на мышах посредством перорального введения добавки в виде водной эмульсии через зонд. Установлено, что при введении БАД мышам в дозе 2,0 г/кг из расчета 0,2 мл суспензии на 10 г массы тела гибели животных в течение 3-х суток не отмечено. БАД признаны низкотоксичными, вследствие чего ЛД50 не уточнялась.
  Для оценки подострой токсичности БАД вводили крысам внутрижелудочно через зонд в дозе, эквивалентной приему человеком 60 кг капсулы с 390 мг рецептуры, в виде водной эмульсии один раз в день ежедневно на протяжении 28 суток.
 
 2.1. Влияние БАД на прирост массы тела крыс
  Оценка динамики массы тела крыс представляет собой объективный показатель, часто используемый для интегральной характеристики общетоксического действия БАД. Крыс взвешивали еженедельно в течение всего периода введения БАД в виде масляных суспензий. Взвешивание осуществляли утром до кормления. Динамика массы тела крыс при приеме БАД в одиночной и удвоенной дозе, а также в контрольной группе отражена в таблице 2.1.1.
  Несмотря на отсутствие достоверных различий в динамике прироста массы тела между крысами контрольной и подопытных групп, более выраженная потеря массы тела крысами, получавшими БАД в удвоенной дозе, послужила основанием для анализа причин подобного эффекта. Было предположено, что токсические эффекты могли быть связаны с высокой дозой селена, тогда как остальные компоненты рецептуры в выбранных дозах не проявляют значимой токсичности, что доказано ранее проведенными многочисленными многоцентровыми исследованиями.
  Отсутствие потери массы тела в группе, получавшей БАД в одной дозе, позволило обосновать снижение дозы селена до 0,03 мг и испытать рецептуру в соответствие с прописью № 1.
 
 Таблица 2.1.1.
 Изменение массы тела крыс при введении БАД с антиоксидантами
 Экспериментальная группа Показатель Продолжительность приема БАД, сутки Исходные
 показатели 7 14 21 28 Дистиллированная вода
  (контроль 1) Масса 219+5 243+5 243+4 248+5 250+5 Прибавка за неделю - 24+2 0+1 5+2 2+3 "АктивитАнтиоксидант", рецептура
 № 2, 1 доза Масса 224+5 239+5 242+6 248+5 254+5 Прибавка за неделю - 15+3 3+2 6+3 6+2 "АктивитАнтиоксидант", рецептура
 № 2, 2 дозы Масса 233+6 243+6 231+10 241+9 251+8 Прибавка за неделю - 10+0 -13+6 10+3 10+3 "АктивитАнтиоксидант", рецептура
 № 1, 1 доза Масса 227+4 232+4 238+4 243+5 249+4 Прибавка за неделю - 5+1 7+3 4+3 7+2 Отсутствие токсических эффектов при приеме БАД в одной дозе при доказанной эффективности композиции позволяет предположить возможность приема БАД (рецептура № 1) два раза в день в течение короткого промежутка времени для быстрого достижения требуемого адаптационного эффекта.
 
 
 2.2. Влияние БАД на поведение крыс и их условно-рефлекторную деятельность
  Проявление токсического действия лекарственных средств и БАД может сопровождаться нарушениями регуляции движений и процессов сенсомоторной координации, вызывать ощущения дискомфорта и настороженности, что отражается на поведении животных. Эти обстоятельства определяют целесообразность проведения исследований, позволяющих выявить особенности ориентировочно-исследовательской деятельности и оценить уровень эмоциональной реактивности животных, получавших исследуемую БАД в различных вариантах компановки в одной и двух дозах.
  С этой целью традиционно применяют тест "черно-белая камера". Этот тест используют, прежде всего, в силу его простоты и адекватности, высокой чувствительности и возможности выявления эффектов воздействия на ЦНС различных химических соединений в пороговых дозах и концентрациях. Тест "черно-белая камера" основан на противодействии ориентировочно-исследовательской реакции и чувства страха, в данном случае перед освещенным открытым пространством светлого отсека камеры. Черно-белая камера представляет собой закрытый ящик из оргстекла с центральной перегородкой посередине, состоящий из двух равных отсеков размерами 25 х 25 х 25 см. Отсеки сообщаются между собой через отверстие в перегородке (5х10 см). Сверху оба отсека снабжены открывающимися наверх крышками. Один из отсеков (а также перегородка и ее дверца, пол и крышка), изнутри поверх оргстекла полностью обклеен черной светонепроницаемой бумагой ("темный отсек"). Стенки "светлого отсека" остаются прозрачными, сверху по центру на высоте 15 см над его прозрачной крышкой располагают электрическую лампу мощностью 40 Вт.
  Для оценки изменений поведения крыс при введении БАД животных опытной и контрольной групп поодиночке помещали в светлый отсек, в течение 5 минут регистрировали количество стоек в светлом отсеке (вертикальная ориентировочная активность), время латентного периода первого перехода из светлого отсека в темный, и количество переходов из отсека в отсек (норковое поведение, горизонтальная ориентировочная активность). По окончании наблюдения подсчитывали количество животных, которые не входят в темный отсек, и рассматривали их как крыс с нарушенным норковым рефлексом.
  Результаты оценки поведения крыс при приеме "Активит Антиоксидант" приведены в таблице 2.2.1.
  Результаты исследований позволяют сделать заключение о том, что применение БАД, составленной по прописи № 2 в удвоенной дозе приводит к срыву норкового рефлекса у крыс, что свидетельствует о передозировке селен-содержащих продуктов в композиции. Отсутствие токсических эффектов у крыс, употреблявших БАД, составленной по прописи № 2 и № 1, в одной дозе свидетельствуют о том, что срыв показателей высшей нервной деятельности у животных действительно связан с передозировкой селенита натрия, который в отличие от ранее заявленных рецептур, содержащих аскорбиновую кислоту и дрожжевую основу, представлен в "Активит Антиоксидант" в иной комбинации компонентов.
  Таким образом, на основании результатов проведенных экспериментов обоснована безвредность БАД в виде композиции, составленной по прописи № 1. Учитывая данные группы, получавшей БАД в виде композиции по прописи № 2 в одной дозе, можно допустить прием "Активит Антиоксидант" (рецептура № 1) два раза в день.
 
 Таблица 2.2.1
 Влияние БАД на поведение крыс в тесте "черно-белая камера"
 Экспериментальная группа Время регистрации
 (продолжительность приема БАД) Показатель Латентный период первого перехода, сек Количество переходов Количество стоек Дистиллированная вода
 (контроль) Исходное состояние 12,00+2,74 2,67+0,67 0,33+0,21 2 недели 4,83+0,83 2,67+0,49 0,33+0,21 4 недели 3,67+0,49 1,33+0,21 0,17+0,17 "Активит Антиоксидант",
 рецептура № 2,
 1 доза Исходное состояние 10,17+4,38 3,5+0,62 0,83+0,54 2 недели 5,17+1,90 1,83+0,31 0,00+0,00 4 недели 11,33+4,33 1,50+0,34 0,67+0,33 "Активит Антиоксидант",
 рецептура № 2,
 2 дозы Исходное состояние 9,00+2,07 3,17+0,79 1,17+0,75 2 недели 5,00+0,86 1,33+0,21 0,00+0,00 4 недели 31,17+18,40* 1,00+0,00 0,17+0,17 "Активит Антиоксидант",
 рецептура № 1,
 1 доза Исходное состояние 13,50+3,77 3,50+0,76 0,83+0,54 2 недели 8,50+1,95 1,33+0,21 0,33+0,21 4 недели 5,00+0,97 1,17+0,17 0,33+0,33 Примечание: * - различие с контролем достоверны
 
 2.3. Влияние БАД на гематологические показатели у крыс
  Влияние рецептур БАД "Активит Антиоксидант"в одной и двух дозах на кровь оценивали стандартными методами. Количество гемоглобина определяли с помощью гемометра Сали. Подсчет лейкоцитарной формулы проводили на мазках крови из хвостовой вены крысы, окрашенных азур-эозином по Романовскому-Гимзе.
  Показатели свойств и состава периферической крови при применении БАД, а также при применении растворителя - дистиллированной воды в эквивалентной дозе представлены в таблицах 2.3.1, 2.3.2 и 2.3.3.
  Согласно данным, представленным в таблице 2.3.1., при применении БАД "Активит Антиоксидант" (рецептура № 2) в одной дозе достоверных изменений гематологических показателей у подопытных крыс не выявлено.
 
 Таблица 2.3.1
 Гематологические показатели у крыс, получавших в течение 4-х недель дистиллированную воду (контроль) (X+mx, n=6)
 Показатель Продолжительность применения, сутки Исходное состояние 14 28 Гемоглобин, г/л 136,7+3,6 136,3+1,58 141,3+3,08 Время свертывания (фибриновые нити), сек 21,5+5,41 17,7+2,16 19,0+2,29 Время свертывания (сформированный сгусток), сек 250,0+12,58 214,2+8,00 200,0+5,32 Количество эритроцитов, x1012 5,1+0,35 4,6+0,19 4,5+0,13 Количество лейкоцитов, x109 19,6+2,11 14,7+1,80 15,5+1,97 Палочкоядерные нейтрофильные гранулоциты, % 0,8+0,17 0,7+0,21 1,0+0,00 Сегментоядерные нейтрофильные гранулоциты, % 46,8+1,30 46,8+1,40 44,8+1,89 Базофильные гранулоциты, % 0,3+0,21 0,3+0,21 0,5+0,22 Эозинофильные гранулоциты, % 1,8+0,40 2,5+0,43 2,7+0,33 Моноциты, % 2,5+0,50 2,5+0,50 2,8+0,48 Лимфоциты, % 47,7+1,23 47,2+1,05 48,5+1,54
 Таблица 2.3.2
 Гематологические показатели у крыс, получавших в течение 4-х недель БАД "Активит Антиоксидант" (рецептура № 2) в одной эквивалентной дозе (X+mx, n=6)
 Показатель Продолжительность применения БАД, сутки Исходное состояние 14 28 Гемоглобин, г/л 140,3+2,89 138,0+1,71 141,7+1,74 Время свертывания (фибриновые нити), сек 21,0+1,97 19,0+2,67 22,5+1,18 Время свертывания (сформированный сгусток), сек 241,7+13,70 232,5+11,67 183,3+11,67 Количество эритроцитов,
 x1012 5,7+0,16 5,0+0,12 5,4+0,12 Количество лейкоцитов, x109 20,6+2,78 17,2+1,75 18,5+2,37 Палочкоядерные нейтрофильные гранулоциты, % 0,2+0,17 0,7+0,21 0,3+0,21 Сегментоядерные нейтрофильные гранулоциты, % 45,8+1,99 46,2+1,58 43,2+1,78 Базофильные гранулоциты, % 0,7+0,21 0,5+0,22 0,2+0,17 Эозинофильные гранулоциты, % 2,3+0,42 2,8+0,48 1,5+0,43 Моноциты, % 4,3+0,42 3,8+0,40 3,2+0,31 Лимфоциты, % 46,5+1,69 46,0+1,69 51,7+1,69
 Таблица 2.3.3
 Гематологические показатели у крыс, получавших в течение 4-х недель БАД "Активит Антиоксидант" (рецептура № 2) в удвоенной дозе (X+mx, n=6)
 Показатель Продолжительность применения БАД, сутки Исходное состояние 14 28 Гемоглобин, г/л 140,3+1,96 138,5+2,45 139,7+3,2 Время свертывания (фибриновые нити), сек 20,0+3,44 19,5+2,38 18,7+2,20 Время свертывания (сформированный сгусток), сек 239,2+14,17 187,5+3,82 180,0+9,66 Количество эритроцитов,
  х1012 4,9+0,28 4,7+0,17 5,2+0,14 Количество лейкоцитов, х109 15,4+1,65 15,4+1,35 19,4+2,11 Палочкоядерные нейтрофильные гранулоциты, % 1,2+0,31 0,8+0,17 0,3+0,21 Сегментоядерные нейтрофильные гранулоциты, % 46,2+2,23 46,7+1,67 46,0+1,48 Базофильные гранулоциты, % 0,7+0,21 0,3+0,21 0,3+0,21 Эозинофильные гранулоциты, % 1,8+0,48 1,5+0,22 1,5+0,22 Моноциты, % 4,5+0,56 4,2+0,60 4,5+0,56 Лимфоциты, % 45,5+1,43 46,7+1,86 47,3+1,63
  При применении БАД в удвоенной дозе также не отмечали никаких отклонений в показателях клеточного состава и физико-химических свойств крови от данных контрольной группы.
  В целом результаты экспериментов свидетельствуют об отсутствии токсического влияния исследованной БАД на гемопоэз и свойства крови.
 
 
 2.4. Влияние БАД на выделительную функцию почек
  Влияние БАД на процессы формирования мочи и мочевыделения оценивали стандартными методами. Животных на сутки высаживали в специальные собирательные клетки с дозированным количеством воды (10-15 мл) и пищи. Устройство клетки позволяло собирать суточную мочу в охлаждаемую тару. Измеряли количество мочи, ее плотность, кислотность, наличие уробилиногена, билирубина, кетонов, глюкозы и белка. Пробы мочи центрифугировали и проводили микроскопию осадка, подсчитывая количество цилиндров и кристаллов солей.
  Изменяемые показатели свойств мочи сведены в таблице 2.4.1.
 
 Таблица 2.4.1
 Влияние БАД при четырехнедельном приеме на свойства суточной мочи
 Экспериментальная группа Время
 регистрации Показатель Общее количество, мл Плотность, ед Кислотность, ед Дистиллированная вода (контроль) Исходное
 состояние 4,00+0,59 1,018+0,004 5,00+0,00 2 недели 5,97+1,28 1,017+0,003 5,00+0,00 4 недели 5,60+0,62 1,013+0,004 6,17+0,17 "Активит Антиоксидант",
 рецептура № 2, 1 доза Исходное
 состояние 7,05+1,52 1,014+0,003 5,67+0,21 2 недели 5,28+0,76 1,018+0,002 5,20+0,20 4 недели 4,05+0,89 1,013+0,001 5,00+0,00 "Активит Антиоксидант",
 рецептура № 2, 2 дозы Исходное
 состояние 4,23+1,23 1,017+0,003 5,67+0,21 2 недели 2,78+1,12 1,015+0,004 5,00+0,00 4 недели 2,37+0,64 1,016+0,002 5,50+0,34 Установлено, что в моче отдельных крыс в минимально определяемых количествах присутствовали следы белка и уробилиногена. Эти явления отмечали с одинаковой частотой, как в контрольной группе, так и в группах крыс, получавших БАД, в разные сроки наблюдения. Учитывая возможность таких изменений у половозрелых крыс-самцов в норме, они не расценивались как патологические и в дальнейшем анализе не учитывались. При микроскопии осадка мочи патологических изменений не выявлено.
  Концентрационная функция почек остается без изменений, плотность мочи, равно как и ее количество, при одинаковом водопотреблении значимо не снижается.
  Таким образом, данных о токсическом действии БАД на процессы мочеобразования и нарушениях мочевыделительной системы при их применении не получено.
 
 
 2.5. Влияние БАД на биохимические показатели у крыс
  Интегральная оценка влияния БАД на системы детаксикации была проведена в ходе исследования продолжительности барбамилового сна. Результаты этих экспериментов изложены в таблице 1.3.1 и свидетельствуют об отсутствии токсических эффектов у композиций "Активит-эколоджи". Метаболические процессы в организме изучены в ходе биохимического исследования крови. Определение биохимических параметров выполняли после окончания эксперимента у интактных крыс, а также у животных, получавших в течение 28 суток дистиллированную воду и водные эмульсии рецептур БАД. Кровь отбирали после декапитации животных. Плазму отделяли при центрифугировании и замораживали при температуре t= -18 оС. Объем проб был достаточным, для выполнения исследования на аппарате Техникон без объединения образцов. Биохимический анализ выполняли в биохимической лаборатории больницы № 28 Санкт-Петербурга.
  Результаты биохимических исследований обобщены в таблице 2.5.1.
  Показано, что по используемым контролируемым параметрам исследованные рецептуры БАД не обладают токсическим действием на метаболизм. Различия между группами недостоверны.
 Таблица 2.5.1
 Биохимические показатели плазмы крови крыс при четырехнедельном применении БАД с антиоксидантными свойствами (Х+m, n=6)
 Показатель Единица измерения Вариант введения БАД Дистиллированная вода (контроль) "Активит-эколоджи",
 рецептура № 2,
  1 доза "Активит-эколоджи",
  рецептура № 2, 2 дозы АлАТ мМ/л 117,0+3,78 124,33+5,48 127,5+6,84 АсАТ мМ/л 280,3+5,90 269,5+5,63 263,67+6,58 Билирубин общий мкМ/л 17,67+1,15 14,88+1,76 13,47+1,58 Мочевина мМ/л 6,07+0,66 5,93+0,66 6,27+0,56 Креатинин мкМ/л 65,67+7,77 67+6,31 54,3+4,11 Глюкоза мМ/л 5,7+0,39 6,17+0,31 6,32+0,32 Холестерин мМ/л 4,35+0,54 4,52+0,33 4,33+0,28 Общий белок г/л 75,17+2,47 75,0+3,75 80,17+2,72 Фибриноген г/л 3,24+0,34 4,75+0,69 4,72+0,71 Протромбиновый индекс % 99,5+2,27 99,0+3,85 96,83+4,24 Натрий ммоль/л 150,17+7,45 148,33+6,46 153,0+5,56 Калий ммоль/л 7,77+0,17 7,2+0,19 7,17+0,22 2.6.
 Влияние БАД на сердечно-сосудистую систему
  Влияние "Активит Антиоксидант"на функции сердечно-сосудистой системы оценивали посредством измерения артериального давления непрямым методом в артериях хвоста крысы, а также при ЭКГ-исследовании крыс под тиопенталовым наркозом. Регистрацию систолического артериального давления и ЭКГ-показателей выполняли с помощью полиграфа RM-400.
  Систолическое артериальное давление у крыс было чрезвычайно вариабельным и колебалось в пределах 110-150 мм рт. ст. Достоверных различий между крысами контрольной группы и животными, получавшими БАД (рецептура № 2) в одной и двух дозах, не получено.
  Электрокардиографические показатели сведены в таблице 2.6.1.
 
 Таблица 2.6.1
 Влияние БАД на электрическую активность сердца крыс при четырехнедельном применении (Х+m, n=6)
 Показатель Вариант введения БАД Дистиллированная вода (контроль) "Активит Антиоксидант",
 рецептура № 2,
 1 доза "Активит Антиоксидант",
 рецептура № 2,
 2 дозы ЧСС, уд/мин 408,4+15,2 398,5+23,0 401,2+18,9 R-R, сек 0,15+0,01 0,15+0,01 0,15+0,01 Амплитуда зубца Р, мВ 0,19+0,01 0,20+0,02 0,19+0,02 Амплитуда зубца Q, мВ 0,15+0,02 0,16+0,02 0,14+0,02 Амплитуда зубца R, мВ 1,33+0,14 1,32+0,12 1,30+0,15 Амплитуда зубца S, мВ 0,83+0,12 0,75+0,13 0,82+0,13 Амплитуда зубца T, мВ 0,39+0,03 0,31+0,03 0,35+0,04
  Результаты наблюдений, представленные в таблице, дают основание заключить, что исследуемые композиции БАД значимо не влияют на автоматизм и проведение импульса в сердечной мышце (рисунки 2.6.1-2.6.3).
  Таким образом, исследованная БАД "Активит Антиоксидант" не оказывает токсического действия на сердечно сосудистую систему и по этому показателю также может быть признана безвредной.
 
 
 Рис. 2.6.1. Вариант нормальной ЭКГ крысы при четырехнедельном введении дистиллированной воды
 
 Рис. 2.6.2. Вариант нормальной ЭКГ крысы при четырехнедельном введении "Активит Антиоксидант" (рецептура № 2) в одной дозе
 
 Рис. 2.6.2. Вариант нормальной ЭКГ крысы при четырехнедельном введении "Активит Антиоксидант" (рецептура № 2) в удвоенной дозе
 2.7.
 Влияние БАД на структуру внутренних органов
  По окончании эксперимента крыс групп контроля и животных, получавших БАД "Активит Антиоксидант" в одной и двух дозах, декапитировали. Состояние внутренних органов оценено визуально при аутопсии, измерена масса органов и рассчитаны удельные значения этого показателя, а также после высушивания в муфельном шкафу определена степень влагонасыщения тканей перенхиматозных органов. Учитывая, что выраженных патологических изменений у крыс как контрольной, так и подопытных групп не отмечено, выполняли гистологическое исследование случайным образом отобранных образцов тканей крыс по три из каждой группы, а также места введения БАД (гастродуоденальная зона) у всех крыс.
  Образцы тканей фиксировали нейтральным формалином, проводили через спирты возрастающей крепости и заливали в парафин. Готовили парафиновые срезы, которые окрашивали гематоксилином-эозином и исследовали при увеличении стандартного светового микроскопа.
  При определении относительной массы органов (таблица 2.7.1) убедительных данных о наличии отека тканей, нарушении кровоснабжения или кровоизлияний не получено. Достоверных различий между группами по гравиметрическим коэффициентам не выявлено.
 
 Таблица 2.7.1
 Удельная масса внутренних органов при четырехнедельном введении БАД с антиоксидантами
 Орган Группа Дистиллированная вода (контроль) "Активит Антиоксидант", рецептура № 2, 1 доза "Активит Антиоксидант",
 рецептура № 2, 1 доза Мозг
 Печень
 Легкие
 Почка
 Сердце
 Селезенка
 Тимус
 Надпочечник
 Семенник 0,80+0,04
 4,17+0,20
 0,68+0,02
 0,31+0,01
 0,33+0,01
 0,37+0,03
 0,059+0,004
 0,0077+0,0004
 
 0,53+0,05 0,71+0,02
 3,73+0,38
 0,62+0,03
 0,26+0,02
 0,35+0,02
 0,33+0,02
 0,052+0,005
 0,0072+0,0003
 
 0,52+0,03 0,73+0,02
 3,95+0,32
 0,79+0,08
 0,33+0,01
 0,37+0,01
 0,36+0,04
 0,043+0,005
 0,0083+0,0010
 
 0,59+0,03
  После высушивания паренхиматозных органов определяли степень влагонасыщения, характеризующую развитие отека тканей при формировании воспалительного процесса. Результаты исследований приведены в таблице 2.7.2.
 Таблица 2.7.2
 Степень влагонасыщения внутренних органов при четырехнедельном введении БАД с антиоксидантами
 Орган Группа эксперимента Дистиллированная вода (контроль) "Активит Антиоксидант", рецептура № 2, 1 доза "Активит Антиоксидант", рецептура № 2, 1 доза Сердце
 Печень
 Почки
 Мозг
 Легкие
 Селезенка 77,5+0,3
 75,5+1,1
 74,9+0,4
 78,7+0,2
 78,9+0,2
 77,3+1,2 78,6+1,2
 73,6+1,2
 74,7+1,2
 79,4+0,9
 76,6+1,4
 77,4+0,9 77,6+1,8
 73,0+1,2
 69,2+6,8
 78,2+0,2
 76,9+0,6
 75,3+0,7
  Различий в степени влагонасыщения органов у животных экспериментальных групп не выявлено.
  При гистологическом исследовании образцов тканей внутренних органов крыс контрольных и опытных групп отклонений от нормы не обнаружено. Варианты строения тканей представлены на рисунках 2.8.1 и 2.8.2.
  Таким образом, по данным гравиметрических тестов и результатам гистологических исследований токсических эффектов БАД не выявлено.
 
 
 2.8. Местно-раздражающее действие БАД
  При оценке подострой токсичности БАД "Активит Антиоксидант" рецептуры вводили в виде водной эмульсии внутрижелудочно через зонд. Результаты исследований распадаемости капсул указывают на то, что их содержимое будет высвобождаться уже через 3-10 минуты после приема, то есть также поступать в желудок.
  При макроскопическом исследовании во время аутопсии крыс, получавших БАД в одной и двух дозах, данных о наличии изъязвлений, патологических очаговых или тотальных гиперемий слизистой желудка не получено.
 
 
 Рис. 2.8.1. Варианты нормального строения коры головного мозга (а), печени (б), легких (в), и миокарда (г) у крыс после четырехнедельного применения "Активит Антиоксидант" (рецептура № 2) в удвоенной дозе. Окраска гематоксилин-эозин. Ув. 40х3х1,25
 
 
 Рис. 2.8.2 Почка крысы, получавшей БАД "Активит Антиоксидант" (рецептура № 1) в одиночной дозе. Патологических изменений в органе не выявлено
 
  При гистологическом исследовании образцов тканей желудка и двенадцатиперстной кишки, окрашенных гематоксилин-эозином патологических изменений также не выявлено (рисунок 2.8.3).
 
 
 Рис 2.8.3. Неизмененная слизистая оболочка двенадцатиперстной кишки крысы, получавшей "Активит Антиоксидант", рецептура № 2, в одной дозе на протяжении 4 недель. Окраска гематоксилин-эозином, ув. х100
 
  Результаты экспериментов могут свидетельствовать о том, что исследуемые БАД не обладают местно-раздражающим действием.
 
  Таким образом, результаты проведенного исследования позволяют обосновать состав нового БАД, безвредного при применении в течение 28 суток, и оказывающего положительное влияние на процессы обмена веществ, повышая устойчивость к воздействиям неблагоприятных факторов:
 
 Витамин Е - ацетат - 50 мг Витамин А - ацетат - 1,5 мг Витамин С - 80 мг Селенит натрия (в пересчете на селен) - 0,02 мг Метионин - 100 мг Липоевая кислота - 80 мг Микрокристалическая целлюлоза - до массы содержимого капсулы 390 мг
 
 
 3. Исследование безопасности новой отобранной рецептуры БАД "АКТИВИТ АНТИОКСИДАНТ"
 3.1. Санитарно-химический анализ
  Подготовка проб проводилась по ГОСТ 26929-86 "Сырье и продукты пищевые. Подготовка проб. Минерализация для определения токсичных элементов". Токсичные элементы и вещества определялись по методическим указаниям № 01-19/47-11, ГОСТ 26930, 30171-96, 26927 и МУ 3208-85 с использованием газожидкостного хроматографа "Карло Эрба" (модель HRGC 5700, заводской номер 205485) и атомно-адсорбционного спектрометра "Перкин-Элмер" (модель 303, заводской номер 50463).
  Суммарная удельная радиоактивность образцов БАД измерялась на гамма-спектрометре "УСК-Гамма-плюс" (Россия).
  Результаты исследования представлены в таблицах 3.1.1 и 3.1.2.
 
 
 Таблица 3.1.1
 Содержание токсичных элементов и токсикантов
 Показатели Норма по СанПиН 2.3.2.1078-01, п. 1.5.2 БАД
 "Активит Антиоксидант" Элементы Свинец, мг/кг 1.0 0.01 Кадмий, мг/кг 0.1 0.03 Ртуть, мг/кг 0.01 0.002 Мышьяк, мг/кг 1.0 0.01
 Хлорорганические пестициды ГХЦГ, мг/кг, контроль по сырью 0.005 <0.001 ДДТ и метаболиты, мг/кг 0.005 <0.001
 
 Таблица 3.1.2
 Удельная радиоактивность образцов БАД, Бк/кг
 Радионуклиды Норма по СанПиН 2.3.2.1078-01, п.1.5.2 БАД
 "Активит Антиоксидант" 90Sr 100 25 137Cs 160 32
 
  Таким образом, по результатам проведенных измерений содержание вредных и опасных для здоровья веществ в БАД "Активит Антиоксидант" не превышает допустимых уровней.
 
 
 
 3.2. Исследование острой токсичности
  Для определения показателей острой токсичности содержимое капсул БАД "Активит Антиоксидант" в виде водных разведений вводили белым крысам обоего пола внутрижелудочно (через атравматичный металлический зонд) в возрастающих дозах по Литчфилду-Уилкоксону. Большие дозы вводили повторно в течение 15 минут. Расчеты средней эффективной дозы и ее ошибки проводили по В.Б. Прозоровскому. Контрольным животным вводили аналогичные объемы воды (контроль объема).
  Гибель животных при внутрижелудочном введении смертельных доз БАД (более 7 г/кг) наблюдалась в течение 1,5-5 часов от момента введения при явлениях возбуждения, последующей вялости, заторможенности, оглушения, бокового положения, резкого поверхностного дыхания, судорог в агональной стадии и паралича.
  Зависимые от дозы эффекты представлены в таблице 3.2.1.
  Вскрытие погибших при внутрижелудочном введении животных выявило, помимо признаков венозного полнокровия внутренних органов, субплевральные, субдуральные кровоизлияния, а также мелкие кровоизлияния в продолговатом мозге и больших полушариях коры. В желудке и кишечнике наблюдались признаки раздражения слизистых оболочек.
 
 Таблица 3.2.1
 Летальные эффекты (пало/всего) БАД при в/ж введении крысам обоего пола
 БАД Доза, мг/кг 5000 6000 7000 8000 9000 10000 "Активит-эколоджи" 0/5 0/5 1/5 2/5 3/5 5/5
  ЛД50 "Активит-эколоджи" = 8500 ? 500 мг/кг
 
  Таким образом, результаты токсикометрии, данные наблюдений за экспериментальными животными в периоде после острого отравления, а также данные патоморфологических исследований позволяют позиционировать БАД "Активит-эколоджи" как практически нетоксичное парафармацевтическое средство (V класс практически нетоксичных лекарственных веществ) (H. Hodge et al. Clinical Toxicology of Commercial Products. Acute Poisoning. Ed. IV, Baltimore, 1975, 427 p.; K.K. Сидоров, 1973).
 
  По результатам вскрытия и макроскопического исследования внутренних органов выживших экспериментальных животных каких-либо патологических изменений не обнаружено.
  Животные нормального телосложения, средней упитанности. Шерсть блестящая, опрятного вида. Очагов облысения не наблюдалось. Выделения из естественных отверстий отсутствовали. Передние и задние конечности изменений не представляли. Зубы сохранены. Видимые слизистые оболочки бледные, блестящие, гладкие. Молочные железы самок без уплотнений на ощупь. Половые органы самцов правильно выражены.
  Листки плевры и органы грудной клетки не изменены. Легкие бледно-розовые, воздушные, без уплотнений на ощупь. Размеры сердца в пределах нормы. В полостях сердца содержится небольшое количество жидкой крови. Мышца сердца плотная, коричневой окраски.
  Желудок заполнен небольшим количеством плотной пищи. Слизистая оболочка блестящая, складчатая, слегка розоватой окраски. Слизистая тонкого кишечника блестящая, гладкая, розоватой окраски.
  Размеры и форма печени не отличаются от контроля. Поверхность печени гладкая. Капсула тонкая, прозрачная. Рисунок печени на разрезе не изменен. Ткань печени умеренно полнокровна.
  Почки обычной величины и формы, коричневатого цвета, плотные, с отчетливыми корковым и мозговым веществом на разрезе. Щитовидная железа, надпочечники и поджелудочная железа по внешнему виду не отличаются от контроля.
  При осмотре гистологических препаратов желудка и паренхиматозных органов отличий в структуре между опытными и контрольными группами не обнаружено.
  Сосуды легких были умеренно полнокровны. Эпителий альвеол и внутрилегочных бронхов изменений не представлял. Альвеолы были заполнены воздухом. Отека либо воспаления легочной ткани не наблюдалось.
  Миофибриллы левого желудочка сердца и межжелудочковой перегородки имели отчетливую поперечную исчерченность, ядра кардиомиоцитов были светлыми. Сосуды миокарда умеренно полнокровные.
  Дольчатое строение печени сохранялось. Границы гепатоцитов были четкими, цитоплазма гепатоцитов -- слабобазофильной, зернистой; ядра с достаточным содержанием хроматина и тонкой ядерной мембраной. При окраске замороженных срезов печени суданом IV признаков жировой дистрофии не наблюдалось.
  Эпителий извитых канальцев почек изменений не представлял. Цитоплазма его была зернистой, оксифильной, ядра светлыми. Сосуды клубочков умеренно полнокровные.
  Строение слизистой оболочки фундальной части желудка не отличалось от контроля. Ядра эпителия слизистой и желез были светлыми. В базальных отделах желез сохранилась зернистость в цитоплазме.
  Эпителий ворсинок и крипт слизистой тонкой кишки был сохранен, в криптах присутствовали митозы.
  Таким образом, по показателю летальной токсичности (ЛД50 выше 5000 мг/кг) и данным морфологического исследования (внутренние органы не изменены) БАД "Активит Антиоксидант" можно отнести к нетоксичным (относительно безвредным по С.Д. Заугольникову) и малоопасным (IV класс опасности по ГОСТ 12.1.007) веществам.
 
 
 3.3. Хроническая токсичность и способность к кумуляции
  Исследования хронической токсичности проводились на белых нелинейных крысах обоего пола в течение 30 дней. Введение БАД осуществлялось внутрижелудочно через атравматичный металлический зонд. Суточная доза составляла 1.0 г/кг, так что за 30 дней общее количество БАД составило 30 г/кг. Контрольные животные получали дистиллированную воду в тех же объемах.
  Измерение основных физиологических показателей производилось в конце исследования, через 30 дней ежедневного введения БАД.
 
  На протяжении всего периода наблюдения летальных эффектов не наблюдалось; общее состояние и поведение подопытных оставалось нормальным и не отличалось от контроля в течение всего эксперимента.
  Результаты исследования основных физиологических показателей подопытных и контрольных животных представлены в таблице 3.3.1. Как можно видеть БАД достоверно снижала продолжительность гексеналового сна по сравнению с контролем, что, безусловно, является одним из результатов их фармакологического действия (повышение детоксицирующей функции печени). По остальным из исследованных показателей не имелось статистически значимых (на 95% доверительном уровне) различий с контролем или патологических отклонений за пределы варьирования физиологической нормы.
 Таблица 3.3.1
 Влияние хронического введения БАД "Активит Антиоксидант"
 на показатели общей нелетальной токсичности белых крыс, М ± m
 Показатель и единицы Контроль БАД "Активит-эколоджи" Вес тела, г 212 ± 10 221 ± 4 Массовые индексы органов, г/100 г массы тела легкие 5.9± 0.1 5.9 ± 0.2 печень 29.8 ± 1.1 29.6 ± 1.6 почки 7.5 ± 1.2 7.5 ± 1.5 селезенка 4.8 ± 0.09 5.0 ± 0.2 сердце 3.4 ± 0.1 3.1 ± 0.1 Показатели мочи Белок мочи, мг% 4.2 ± 0.3 4.5 ± 0.5 Удельный вес мочи, г/мм3 1.001 ± 0.045 1.030 ± 0.035 Биохимические показатели крови Сахар крови, мг% 82 ± 6 82 ± 6 Белок сыворотки, г% 7.98 ± 0.19 8.21 ± 0.20 Липидный фосфор, ммоль/л 34.12 ± 0.55 30.70 ± 0.43 АлТ, мккат/л 0.43±0.05 0.40±0.01 АсТ, мккат/л 0.88±0.04 0.89±0.04 ЩФ, мккат/л 0.96 ± 0.16 0.90 ± 0.17 Тимоловая проба, ед. помутн. 1.80 ± 0.21 1.87 ± 0.17 Морфологические показатели крови Эритроциты, млн./мм3 6.2 ± 0.08 6.3 ± 0.08 Гемоглобин, г% 11.9 ± 0.1 12.5 ± 0.4 Лейкоциты, тыс./мм3 6.8 ± 0.2 6.9 ± 0.09 Физиологические показатели СПП, В 14.1 ± 1.3 14.3 ± 1.8 Продолжительность
 гексеналового сна, мин. 34.5 ± 2.5 22.0 ± 2.0*
  * - достоверные отличия от контроля при P<0.05
 
  Патоморфологические исследования проводились на следующий день после последнего введения. По результатам макроскопического исследования изучаемых органов различий между опытными и контрольной группами не установлено. Крысы правильного телосложения, удовлетворительного питания. При наружном осмотре выделений из естественных отверстий не обнаружено. Шерсть блестящая, опрятного вида, очагов облысения не определяется. Зубы сохранены. Видимые слизистые оболочки бледной окраски, блестящие. Молочные железы самок без уплотнений на ощупь, выделения из сосков отсутствовали. Половые органы самцов развиты правильно, деформации или отека конечностей нет.
  Грудная и брюшная полости выпота не содержали. Положение внутренних органов грудной и брюшной полостей нарушений не представляло. Париетальный и висцеральный листки плевры и брюшины тонкие, блестящие, гладкие.
  Подчелюстные лимфатические узлы и слюнные железы овальной формы, бледно-желтого или розоватого цвета, с гладкой поверхностью, тонкой капсулой, не спаяны между собой и подлежащими тканями. Поверхность разреза однородной окраски.
  Щитовидная железа красноватого цвета, обычной величины и формы, умеренно плотной консистенции.
  Тимус треугольной формы, беловатого цвета, умеренно плотной консистенции, обычных размеров.
  Интима аорты гладкая, блестящая, беловатого цвета. Диаметр аорты не изменен. Листки перикарда тонкие, прозрачные, гладкие. Величина и форма сердца изменений не представляют. Левый желудочек сокращен, в правом содержится незначительное количество темной жидкой крови. Клапаны сердца тонкие, блестящие, гладкие. Мышца сердца на разрезе однородной коричневатой окраски, умеренно плотная.
  Просвет трахеи и крупных бронхов не изменен, слизистая оболочка блестящая, гладкая, бледного цвета. Легкие воздушные, без уплотнений на ощупь, бледно-розовой окраски.
  Слизистая пищевода блестящая, гладкая, бледного цвета. Желудок обычной величины и формы, заполнен пищевым содержимым. Слизистая оболочка безжелезистой части желудка складчатая, розоватая, блестящая. Слизистая тела желудка складчатая, розоватая, блестящая. Слизистая оболочка тонкого кишечника бледно-розового цвета, блестящая, гладкая. Слизистая оболочка толстой кишки сероватого цвета, блестящая, гладкая.
  Форма и величина печени изменений не представляли. Поверхность печени гладкая, однородной темно-красной окраски, капсула тонкая, прозрачная. Ткань печени на разрезе полнокровная, умеренно плотная.

<< Пред.           стр. 2 (из 3)           След. >>

Список литературы по разделу