АЛЛEРГИЯ АСТМА И КЛИНИЧEСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ М 2000 107 С 7

ПАРАКРИННЫЕ И АУТОКРИННЫЕ МЕХАНИЗМЫ
ЦИТОКИНОВОЙ ИММУНОРЕГУЛЯЦИИ
И.С.Фрейдлин
Институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург

Цитокины продуцируются и секретируются клетками иммунной системы и выполняют функции медиаторов иммунной системы, обеспечивающих межклеточные кооперации, позитивную и негативную иммунорегуляцию. Цитокины регулируют амплитуду и продолжительность воспалительного и иммунного ответа, поэтому они должны продуцироваться и секретироваться транзиторно (индуцибельно) и иметь короткий полупериод жизни. Цитокины действуют в очень низких концентрациях (10-15 М), связываясь с высокоаффинными рецепторами на поверхности клеток-мишеней. Некоторые из цитокинов существуют не только в форме циркулирующих молекул, но и в виде молекул, тесно связанных с мембраной клетки-продуцента (TNF?, IL-1)?1?. Для цитокинов характерны: плеотропность, дублирующие и перекрывающиеся эффекты, взаимодействие разных цитокинов в каскадах единой регуляторной сети. Каскадный характер действия цитокинов объясняется тем, что один цитокин индуцирует продукцию другого цитокина (например, IL-1 индуцирует продукциюIL-2, IL-6, IL-8, TNF? и других цитокинов). Не менее распространено взаимодействие цитокинов путем влияния на экспрессию цитокиновых рецепторов: например, IL-1 усиливает продукцию Т-лимфоцитами IL-2 и экспрессию его рецепторов, IL-4 и IL-5 повышают экспрессию IL-2R, а TGF? снижает ее. Потеря TNFR или недостаточность их синтеза являются причинами резистентности к действию TNF. Внеклеточные части рецепторов могут существовать вне клеток как растворимые рецепторы (sTNFR55 и sTNFR75), сохраняющие способность связывать TNF?. Они могут образоваться в результате шеддинга рецепторов с мембран клеток при активации моноцитов (Мн). Экспрессия TNFR75 на мембране макрофагов (Мф) снижается чаще за счет их шеддинга, а снижение экспрессии TNFR55 чаще связано с процессами их интернализации при связывании молекул TNF. Модуляция экспрессии TNFR может быть опосредована: самим TNF?, IFN?, IL-1?43?.
Взаимодействие цитокинов характеризуется синергизмом (например,TNF? с IFN?) или антагонизмом (например, IL-4 с IFN?). Сбалансированность цитокиновой регуляции основывается на равновесии альтернативных по биологической активности пулов молекул, нарушение которого ведет к патологии?3, 24?.
Цитокины активно участвуют в регуляции миеломоноцитопоэза и лимфопоэза. Провоспалительные и противовоспалительные цитокины контролируют процессы воспаления. Многие цитокины участвуют в регуляции специфического иммунного ответа. Наличие у некоторых цитокинов системных, генерализованных эффектов (способность IL-1, TNF? вызывать гипертермию, кахексию, лейкоцитоз) позволяет сравнивать продуцирующие эти цитокины мононуклеарные фагоциты с "дисперсным эндокринным органом"?21?. Однако, в большинстве случаев для цитокинов характерны короткодистантные варианты аутокринного действия - на сами клетки-продуценты или паракринного действия - на другие клетки-мишени.

Паракринная и аутокринная цитокиновая регуляция пролиферации и
дифференцировки клеток-предшественников

Продукция Мн в костном мозге находится под контролем целой группы ростовых факторов: интерлейкин - 3 (IL-3), колониестимулирующие факторы (GM-CSF, M-CSF=CSF-1) стимулируют митотическую активность предшественников Мн, а простагландин Е (PGE) и интерфероны ? и ? (IFN?, IFN?) ингибируют деление этих клеток. Специализированным фактором роста для мононуклеарных фагоцитов считается M-CSF, продуцентами которого служат стромальные клетки костного мозга, фибробласты?2?.
При воспалении продукция Мн резко возрастает, чтобы обеспечить возросшие потребности в фагоцитирующих клетках. В качестве факторов, усиливающих моноцитопоэз, выступают провоспалительные цитокины, которые продуцируются и секретируются Мф в очаге воспаления. Провоспалительные цитокины IL-1?, TNF? индуцируют продукцию GM-CSF. Таким образом осуществляется позитивная регуляция моноцитопоэза с обратной связью ?2?.
Сравнительно недавно удалось показать, что гемопоэтические предшественники, экспрессирующие на своей поверхности антиген CD34, могут служить предшественниками как Мф, так и дендритных клеток (ДК) ?13?. Альтернативные пути дифференцировки этих клеток определяются цитокинами: моноцитарным колониестимулирующим фактором (M-CSF), гранулоцитарно-макрофагальным колониестимулирующим фактором (GM-CSF), фактором некроза опухолей-? (TNF-?), интерлейкином-4 (IL-4), гамма-интерфероном (IFN?). В отсутствие GM-CSF и TNF-? или в присутствии M-CSF клетки-предшественники дифференцируются в направлении Мф [40]. Те же гемопоэтические предшественники под влиянием GM-CSF, IL-4 и TNF-? дифференцируются в направлении ДК [14]. Мн периферической крови также в зависимости от цитокинового микроокружения могут развиваться или в направлении Мф (в присутствии M-CSF), или в направлении ДК (в присутствии IL-4 и GM-CSF) [37]. Антагонистом IL-4 в индукции созревания Мн в ДК является IFN? [29]. До момента поглощения антигена незрелые ДК несут на своей поверхности рецепторы для M-CSF, но утрачивают их после индукции созревания. В присутствии IL-4 Мн крови человека претерпевают существенные морфологические, фенотипические и функциональные изменения: они утрачивают фагоцитарную активность, способность секретировать монокины и дифференцируются в направлении ДК, предназначенных для усиленной презентации антигенов ?34?. TNF? стимулирует миграцию дендритных клеток с периферии в лимфатические узлы, их созревание в нефагоцитирующие клетки с высокой костимулирующей и антиген-презентирующей активностью, что необходимо для запуска специфического иммунного ответа. TNF-?, IL-1 способствуют миграции и созреванию незрелых ДК, захвативших антиген, под влиянием этих цитокинов снижается способность поглощать (вследствие снижения экспрессии Fc?RII и MMR) и процессировать антиген, но увеличивается способность презентировать захваченные антигены ?35?.

Паракринные и аутокринные эффекты провоспалительных цитокинов

Контакт с возбудителем является сигналом секреции Мн/Мф провоспалительных цитокинов: IL-1, IL-6, IL-8, IL-12, TNF?. Аутокринная стимуляция Мф этими цитокинами сопровождается продукцией и секрецией и других биологически активных молекул: супероксидных и нитроксидных радикалов, простагландинов, лейкотриенов, а также индукцией экспрессии адгезионных молекул на поверхности фагоцитов. Мишенями паракринного действия тех же провоспалительных цитокинов становятся эндотелиальные клетки кровеносных сосудов, на которых индуцируется экспрессия адгезионных молекул, связывающих циркулирующие нейтрофилы и Мн. Этим обеспечивается приток циркулирующих нейтрофилов, а затем и Мн в очаг инфекции ?2, 5?. Цитокины IFN?, IL-1, TNF?, являясь антагонистами пролиферации человеческих эндотелиальных клеток, влияют на их морфологию и экспрессию многих генов, в том числе генов, контролирующих адгезионные молекулы и продукцию цитокинов самими эндотелиальными клетками. Провоспалительные цитокины IL-1, TNF? в наномолярных концентрациях паракринно стимулируют экспрессию генов хемокинов: IL-8, MCP-1 и генов адгезионных молекул: ICAM-1, ELAM-1 у эндотелиальных клеток. Очевидно, ранние макрофагальные цитокины способны индуцировать адгезию лейкоцитов к эндотелию и продукцию эндотелиальными клетками более поздних хемокинов ?26?. IL-8 является аутокринным хемоаттрактантом для эндотелиальных клеток, в условиях in vivo этот хемокин может функционировать как ангиогенный фактор ?17?.
Между отдельными провоспалительными цитокинами наряду с синергизмом существуют достаточно сложные взаимнорегулирующие отношения. В частности, IL-6 аутокринно ингибирует продукцию Мф IL-1 и TNF?, которые оба являются активными индукторами синтеза IL-6. В отличие от IL-1 и TNF? IL-6 не индуцирует экспрессию адгезионных молекул на эндотелиальных клетках. В последние годы показана способность IL-6 индуцировать экспрессию в клетках особого гена SOCS-1, который срабатывает как "выключатель" сигнального пути JAK/STAT. Кроме того, IL-6 через гипоталамус-гипофизарное регуляторное звено усиливает продукцию кортизола, который, в свою очередь, действует на клетки печени, усиливая индукцию IL-6 острофазных белков, но ингибирует экспрессию гена IL-6, как и генов других провоспалительных цитокинов. Наряду с провоспалительными эффектами для IL-6 характерны и противовоспалительные эффекты, опосредованные синтезом и секрецией антагонистов провоспалительных цитокинов: IL-1ra, sTNFRp55, обеспечивающих негативную регуляцию воспаления ?41?.
Как Мф, так и ДК сами являются продуцентами цитокинов. При фагоцитозе микроорганизмов Мф или инфицировании ДК компоненты микрорганизма могут индуцировать продукцию IL-12 этими клетками, после чего IL-12 паракринно индуцирует продукцию IFN? естественными киллерами (ЕК) и Т-лимфоцитами ?4?.
Для ЕК характерен транзиторный синтез IFN-?, предназначенный для контроля развития ранней стадии инфекции. Их связывает с макрофагами паракринная, позитивная с обратной связью петля регуляции, которая обеспечивает раннюю продукцию и секрецию IFN?, необходимого для дифференцировки Th1. За последние годы было показано, что ЕK могут продуцировать и секретировать иммунорегуляторные цитокины: IFN?, TNF?, IL-1?, GM-CSF, TGF?1, важнейшим из которых является IFN? ?24?.
Одновременно ЕK несут рецепторы для следующих цитокинов: IL-2, IFN?/?, TGF?1, IFN?, IL-4, IL-10, IL-12. Под влиянием IFN?/?, как и под влиянием IL-12, цитолитическая активность ЕK повышается в 20-100 раз. IL-12 индуцирует пролиферацию ЕK, усиливает синтез IFN? в синергизме с IL-2 и TNF?. Активированные под влиянием IL-2 ЕK с широким спектром цитолитической активности получили название лимфокин-активированные киллеры (LAK). Провоспалительные цитокины, секретируемые Мф в ответ на индукцию микробными компонентами и продуктами (ИЛ-1, ТНФ-?), являются синергистами ИЛ-12 в индукции синтеза ИФН-? ЕК. Кроме того, ИЛ-12 в синергизме с ИЛ-4 индуцирует пролиферацию ЕК ?10?. ИЛ-1? является синергистом ИЛ-12 при стимуляции синтеза ИФН? ЕК в период раннего Т-независимого воспалительного ответа ?24?. При кооперативной активации ЕК и Тh1 продуцируемые Мф IL-12 и IL-18 действуют каждый через свой рецептор и через независимые пути трансдукции сигнала активации ?20?. IL-12 повышает экспрессию рецепторов IL-18. Как и IL-12, IL-18 способствует преимущественной дифференцировке Th0 в направлении Th1, усиливая продукцию IFN? ? 32?.
Альтернативным регуляторным цитокином для ЕK является IL-10, который ингибирует продукцию IFN? как ЕK , так и Т-лимфоцитами (Тh1). IL-10 ингибирует продукцию Мф цитокинов, активирующих ЕK , в частности, TNF? и IL-12. Следует отметить, что как стимулирующие ЕK цитокины (IL-12, TNF?), так и ингибирующий эти клетки цитокин IL-10 продуцируются Мф. Среди цитокинов, продуцируемых самими естественными киллерами IFN? может активировать их аутокринно ?16?.

Паракринная и аутокринная цитокиновая регуляция формы иммунного ответа

В отличие от ЕК Т-лимфоциты для начала продукции IFN? нуждаются, как минимум, в двух сигналах активации: от TCR, от адгезионных или костимулирующих молекул или от рецептора цитокина, например, IL-12 ?36?. Активация Th ведет , прежде всего, к синтезу IL-2, IL-2R ( высоко аффинных). IL-2 - аутокринный и паракринный Т-клеточный ростовой фактор, его накопление связано со специфическим иммунным ответом. По мере накопления клона активированных Th они продуцируют и другие цитокины, усиливающие пролиферацию: IL-4, IL-6. Параллельно начинают накапливаться цитокины, ограничивающие пролиферацию Th. TGF? блокирует IL-2 - индуцированную пролиферацию. Продукция с одной стороны - TNF?,?, IFN?, а с другой стороны - IL-4, IL-10 обеспечивает взаимный антагонизм Th1 и Th2 ?8?.
Cекретируемый Th1 IFN? паракринно активирует Мф к продукции IL-12 в синергизме с аутокринным действием TNF? ?45?. Этим обеспечивается паракринная позитивная регуляция с обратной связью: IL-12 активирует продукцию IFN?, который , в свою очередь, активирует Мф к продукции IL-12 ?18?. IFN-? повышает экспрессию антигенов МНС I и II классов на Мн/Мф, тем самым повышая эффективность презентации антигенов. Следует особо отметить, что IFN?, который стимулирует экспрессию HLA II класса на большинстве клеток, угнетает экспрессию тех же молекул на мембране В-лимфоцитов, ингибирует их пролиферацию и дифференцировку ?30?.
Экспрессия костимулирующих молекул на мембранах Мф модулируется цитокинами и цитокины могут действовать в синергизме с костимулирующими молекулами. Так IFN? стимулирует продукцию Мф не только IL-12, но и костимулирующих молекул В7.1 (CD80) и В7.2 (CD86). На Т-лимфоцитах лигандами для костимулирующих молекул В7 служат молекулы CD28 и CTLA-4. Кинетика взаимодействия APC с Th характеризуется переключением через 2-3 суток с костимуляции, опосредованной взаимодействием поверхностных молекул В7 и CD28, на супрессию, опосредованную взаимодействием В7 с аналогом CD28 - молекулой CTLA-4 ?19?. Индукция синтеза IL-12 ДК и МФ может быть следствием их контактного взаимодействия с активированными Th1 через посредство костимулирующих молекул CD40 - CD40L. В этом случае последовательность событий следующая: Th1 активируются при связывании антигенного пептида в комплексе с HLA класса II с TCR, начинают экспрессировать CD40L и секретировать GM-CSF и IL-3. Последние паракринно стимулируют экспрессию CD40 на APC. Связывание CD40L с CD40 на мембране APC индуцирует продукцию ими IL-12, который выполняет роль костимулятора пролиферации активированных антигеном Th1 и продукции ими IFN?. IFN? активирует Мф, усиливая продукцию ими IL-12 и ингибируя продукцию IL-10 ?11?.
IFN? является синергистом IL-12, который обеспечивает аутокринный костимулирующий сигнал при индукции дифференцировки Th1 и повышает чувствительность наивных Т-лимфоцитов к стимулирующему действию IL-12 ?44?. И Th1, и Th2 экспрессируют ?1-цепь рецептора IL-12, но только Th1 экспрессируют ?2-цепь рецептора. С неполноценностью IL-12R связывают неспособность Th2 ответить активацией на действие IL-12. Индукция IFN? синтеза IL-12 служит способом ауторегуляции продукции самого IFN?, т.к. его синтез индуцируется под влиянием IL-12.
Активация Мф под влиянием IFN? (паракринная регуляция) проявляется: повышением микробицидности, противовирусной активности, противоопухолевой цитотоксичности, экспрессии HLA класса II, Fc?RI, продукции супероксидных и нитроксидных радикалов, продукции ряда цитокинов и хемокинов (IFN?, IL-1, TNF?, IL-12), антиген-презентирующей активности, усилением дифференцировки. Индуцированные при этом провоспалительные цитокины, в первую очередь TNF?, оказывают аутокринное стимулирующее действие на Мф в синергизме с IFN?. TNF? и IFN? синергидно действуют и на ЕС, повышая выход защитных клеток и молекул из сосудов в ткани, где разыгрывается иммунное воспаление ?5?.
Т-лимфоциты в процессе активации приобретают усиленную экспрессию рецепторов для IL-2 и TNF?. В синергизме с IL-2 TNF? усиливает продукцию Т-клетками IFN?. CD8+-эффекторные Т-лимфоциты несут IL-2R и их пролиферация и активация зависят от присутствия IL-2, но сами они не продуцируют IL-2, а продуцируют, в основном, интерферон-гамма (IFN?). IL-2 является основным ростовым фактором Т-лимфоцитов. Его продуцируют сами активированные Т-лимфоциты и он обеспечивает их клональную экспансию при ответе на распознавание антигена TCR. Однако, терминально дифференцированные Th1-клоны используют в качестве ростового фактора не IL-2, а IL-12. На экспериментальных моделях показано, что Т-лимфоциты, приобретающие в процессах дифференцировки способность продуцировать IL-4 или IFN?, утрачивают при этом способность продуцировать IL-2 ?31?.
Активированный IFN? Мф выполняет функции эффекторной клетки в защитных и повреждающих реакциях клеточного иммунитета - гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). Активированные Мф синтезируют и секретируют широкий спектр цитокинов, обладающих эффекторной и регуляторной активностью, разрушительных ферментов, а также высоко токсичные супероксидные и нитроксидные радикалы, которые, в свою очередь, вносят вклад в негативную регуляцию опосредованного Th1-ответа ?25?. Продукция IL-12 и IFN?, в свою очередь, контролируется альтернативной субпопуляцией Th2, продуцирующих IL-10. При отсутствии должного контроля синтез IL-12 ведет к избыточной активации иммунной системы с иммунопатологическими последствиями ?15?.
Кроме стимулирующего действия на продукцию IFN? Т-лимфоцитами IL-12 оказывает ингибирующее действие на продукцию Т-лимфоцитами памяти IL-4, причем это ингибирующее действие опосредовано через АПК. IL-4 , в свою очередь, является важнейшим ограничителем усиления продукции IL-12 дендритными клетками ?30?.

Аутокринная и паракринная негативная цитокиновая регуляция

Альтернативным регулирующим цитокином для Мф является типичный противовоспалительный цитокин IL-10, который ингибирует все те свойства и функции Мф, которые стимулирует IFN?. Его продуцентами могут быть либо сами Мн/Мф, либо активированные Тh2 и, как показано недавно, активированные Th1. Этот цитокин является физиологическим антагонистом и ингибитором синтеза IL-12, ингибирует продукцию IFN-? и весь Тh1-ответ ?27?. IL-10 ингибирует: продукцию макрофагами всех провоспалительных цитокинов (IL-1, IL-6, IL-8, IL-12, TNF?, MIF), экспрессию рецепторов TNF-? и IL-12 на ЕК. Способность IL-10 ингибировать продукцию IL-1, IL-6, TNF? макрофагами и их окислительный взрыв связана с его способностью угнетать продукцию IL-12 ?23?. IL-10 ингибирует продукцию IFN? Т-лимфоцитами, супрессируя экспрессию на мембране АПК костимулирующих молекул B7 и синтез макрофагами IL-12. Обращает на себя внимание способность самих Мф продуцировать этот цитокин, являющийся для них сильнейшим аутокринным ингибитором. Как правило, Мф продуцируют и секретируют последовательно: провоспалительные цитокины, в том числе IL-12, а затем IL-10, но с преобладанием IL-12 ?39?. Однако иногда продукция IL-10 резко усиливается. Такое действие на Мф оказывают, например, иммунные комплексы ?7?. При этом избыток IL-10 ведет к снижению противоинфекционной защиты и развитию хронических инфекций [42]. Продуцируемый Т-лимфоцитами IFN? ингибирует продукцию IL-10 Мф, что, в свою очередь, снижает IL-10-опосредованное аутокринное угнетение продукции IL-12 АПК. После предобработки Мн GM-CSF ингибирующее действие IL-10 на их хемотаксис проявляется значительно сильнее, что можно связать с усилением экспрессии IL-10R на Мн под влиянием GM-CSF. Многие ингибирующие эффекты IL-10 связывают с его способностью ингибировать активацию NF-?B ?30?.
Ингибирующее действие IL-10 на специфический иммунный ответ опосредовано через ингибицию функций АПК, в частности, он ингибирует как конститутивную, так и индуцированную IFN? экспрессию HLAII на макрофагах. Кроме того, IL-10 ингибирует продукцию и секрецию всех цитокинов всеми Т-хелперами, включая и IL-4, и IL-5. Вместе с тем, описаны отдельные позитивные эффекты IL-10: этот цитокин служит хемоаттрактантом для CD8+-Т-клеток, усиливает их и пролиферацию ЕК, дифференцировку, цитотоксичность, с чем связано усиление противоопухолевого иммунного ответа и на аутоантигены. IL-10 является синергистом IL-3 и IL-4 в стимуляции пролиферации тучных клеток, участвует в усилении пролиферации и дифференцировки В-лимфоцитов, в защите их от апоптоза, индуцирует экспрессию на них молекул HLA класса II (антагонистичекий эффект в отношении IFN?) ?30?.
IL-10 ингибирует воспалительный ответ независимо от принадлежности участвующих в нем клеток к той или иной субпопуляции Th. Повышенная чувствительность Th1-клеток к негативной регуляции IL-10 связана с их зависимостью от паракринной регуляции их дифференцировки интерлейкином 12, продукцию которого антигенпрезентирующими клетками ингибирует IL-10. По сравнению с Th1-ответом Th2-ответ менее жестко контролируется, чем можно отчасти объяснить высокую частоту атопических заболеваний среди людей ?31?.
Кроме IL-10 ингибирующим цитокином является трансформирующий ростовой фактор бета (TGF?), продуцируемый всеми типами лейкоцитов, в том числе - лимфоцитами, Мф, ДК. Он выполняет функции аутокринного и паракринного регулятора процессов пролиферации, дифференцировки и активации лимфоцитов наряду с более известной его ролью в регуляции пролиферации и дифференцировки эпителиальных клеток и процессов канцерогенеза. Среди эффектов TGF? описаны как провоспалительные (хемоаттрактант для гранулоцитов, Мн и лимфоцитов, стимулятор экспрессии рецепторов некоторых провоспалительных цитокинов ), так и противовоспалительные ( супрессия пролиферации лимфоцитов, ингибиция В-лимфоцитов и цитотоксичности Т-лимфоцитов, ингибиция продукции провоспалительных цитокинов, ингибиция антимикробных защитных функций Мф). Эффекты TGF? в значительной степени зависят от "контекста", т.е. от присутствия других цитокинов. Так, TGF? ингибирует IL-2, IL-4, IL-7 - зависимую пролиферацию тимоцитов, индуцированную IL-2 продукцию Т-клетками цитокинов и активированные IL-2 цитолитические функции клеток. Вместе с тем описаны активирующие эффекты TGF? в отношении наивных Т-лимфоцитов, проявляющиеся защитой их от апоптоза и повышением чувствительности к последующей стимуляции. В частности, TGF? в синергизме с TNF? способствует развитию тимических предшественников CD8+ клеток. Показана способность TGF? защищать от апоптоза ДК и способствовать их дифференцировке. Отмечена способность TGF? аутокринно усиливать экспрессию некоторых интегринов ( LFA-1, VLA-3, VLA-5) и Fc?RIII на Мн крови. Тем не менее у TGF? явно преобладают ингибирующие эффекты. Особенность этого цитокина состоит в том, что он угнетает продукцию цитокинов и ответ на цитокины обеих альтернативных субпопуляций: Th1 и Th2. В связи с этим антиген-специфические Т-лимфоциты, продуцирующие исключительно TGF?, были выделены в особую субпопуляцию - Th3. Наиболее выраженные антагонистические взаимоотношения между TGF? с одной стороны и IL-12, IFN? - с другой рассматриваются как причина индукции периферической иммунологической толерантности в ответ на пероральное введение антигена. Для В-лимфоцитов TGF? играет роль негативного аутокринного регулятора с обратной связью, т.к. активированные В-клетки начинают секретировать активный TGF?, который ингибирует их дальнейшую пролиферацию и даже индуцирует их апоптоз. Для действия TGF? на В-лимфоциты характерна избирательная активация продукции IgA, преключение синтеза иммуноглобулинов именно на этот изотип иммуноглобулинов. Ингибирующее действие TGF? на тканевые Мф в очаге воспаления опосредовано ограничением продукции IFN?. Как и другие противовопалительные цитокины, TGF? сдерживает процесс чрезмерной активации Мф, ведущий к разрушительным последствиям?28?.
IL-4 по многим биологическим свойствам является цитокином, альтернативным IFN?. При формировании преимущественно гуморального иммунного ответа В-лимфоциты выполняют функции АПК для Th2. При этом активация В-клеток Т-хелперами через TCR-распознавание комплекса антигенный пептид + MHC класса II при участии костимулирующих молекул CD40L / CD40 ведет к повышению экспрессии на В-лимфоцитах IL-4R. Местная продукция IL-4 Тh2-хелперами ведет к сильной клональной пролиферации и экспансии активированных В-клеток. Этому способствуют IL-2, IL-13.
Под влиянием IL-4 образовавшийся клон может дифференцироваться и созревать в IgE - синтезирующие клетки. В присутствии TGF? происходит переключение на синтез IgA, этому способствует IL-5. IgM-синтезирующие клетки созревают под влиянием IL-4 и IL-5, а продуценты IgG созревают под влиянием IL4, 5, 6 и IFN?. Даже при ответе на тимус-независимые антигены, которые непосредственно активируют В-лимфоциты, В-клетки нуждаются в цитокинах для эффективной пролиферации и продукции Ig. Для них "поставщиками" цитокинов могут быть ЕК или популяция NK1+-Т-лимфоцитов с лектиноподобными рецепторами ?9?.
IL-4 в большинстве случаев выступает в качестве антагониста IFN? при воздействии на Мф, Т-хелперы, В-лимфоциты. Прежде всего, IL-4 ингибирует продукцию Мф провоспалительных цитокинов и хемокинов: TNF?, IL-1?, IL-12 (p40), IP-10, синтез которых индуцируется или стимулируется IFN?. Параллельно IL-4 ингибирует продукцию Мф супероксидных и нитроксидных радикалов и нарушает ответ Мф на действие отдельных субклассов Ig, изменяя экспрессию соответствующих FcR. Способность IL-4 ингибировать все IFN? - индуцибельные свойства Мф может быть опосредована через супрессию транскрипции соответствующих генов?33?. Синергистами IL-4 в подавлении IFN? - индуцибельных свойств Мф являются другие противовоспалительные цитокины: IL-13, IL-10, TGF? ?22, 46?.
Вместе с тем описан ряд позитивных эффектов IL-4. Он повышает экспрессию на Мн адгезионных молекул CD11b/ CD11c/ CD18, CD49e, CD29, причем экспрессия двух последних молекул ингибируется IFN?. IL-4 усиливает экспрессию молекул HLA класса II, маннозного рецептора, некоторых адгезионных молекул на мембране Мф. Более того, в индукции HLAII, интегринов у Мф и VCAM-1 у эндотелиальных клеток IL-4 выступает в качестве синергиста IFN?. Однако, IL-4 ингибирует вызванную IFN? индукцию экспрессии адгезионных молекул ICAM-1, E-селектина на эндотелиальных клетках ?33?.

Аутокринная и паракринная цитокиновая регуляция опухолевого роста

Цитокинам отводится важная роль в регуляции опухолевого роста ?8?. Опухолевые клетки могут продуцировать цитокины в качестве аутокринных ростовых факторов: IL-6 при миеломе, волосатоклеточном лейкозе, саркоме Капоши, карциноме почки; TNF при лейкемии, нейробластоме; IL-10 при лимфоме. Опухолевые клетки могут стимулировать ближайшие иммунокомпетентные клетки к продукции цитокинов - паракринных ростовых факторов: IL-6 - при миеломе; IL-10, IL-2, TNF - при лимфомах. В организме больных с опухолями, как правило, высок уровень IL-6, который препятствует эффективной иммунотерапии с применением IL-2 или IFN?. Многие опухоли продуцируют иммуносупрессирующие цитокины, природа которых мало изучена. В надосадочной жидкости культур опухолевых клеток был, в частности, идентифицирован TGF?, который является типичным иммуносупрессирующим цитокином, ингибирующим продукцию провоспалительных цитокинов и функции Т-хелперов. Как аутокринная (TGF?), так и паракринная (TNF?) цитокиновая регуляция опухолевого роста может быть опосредована через модуляцию ангиогенеза ?17?.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Паракринные механизмы цитокиновой регуляции преобладают на ранних этапах пролиферации и дифференцировки предшественников иммунокомпетентных клеток. По мере созревания клеток они приобретают способность продуцировать цитокины и начинают экспрессировать соответствующие цитокиновые рецепторы. С этого момента в цитокиновой регуляции их дальнейшей пролиферации, дифференцировки и функций участвуют не только паракринные, но и аутокринные механизмы. В частности, быстрая клональная экспансия Т-лимфоцитов после распознавания антигена и соответствующей активации обеспечивается аутокринной стимуляцией при участии продуцируемых ими цитокинов: IL-2, IL-4. Способность продуцировать аутокринные ростовые факторы, обеспечивающие быструю пролиферацию, характерна не только для иммунокомпетентных, но и для опухолевых клеток. Следует отметить, что клетки с преобладающей аутокринной регуляцией пролиферации и дифференцировки (Th2, продуцирующие и использующие IL-4) имеют селективные преимущества перед клетками, которые нуждаются в паракринных факторах стимуляции (Th1, нуждающиеся в IL-12, продуцируемом Мф или ДК. Филогенетически наиболее древние защитные клетки - мононуклеарные фагоциты - имеют наиболее совершенную аутокринную регуляцию собственных функций, что позволяет говорить о самодостаточности этих клеток в процессе их активации. Вместе с тем, обилие рецепторов для лимфокинов на мембране Мф делает его мишенью паракринной регуляции, которая вносит свой вклад в активацию или ингибицию функций этих клеток.
Клетки, гиперактивация которых чревата повреждающими последствиями, снабжены механизмами аутокринной негативной регуляции: Мф на определенном этапе воспаления сами начинают продуцировать супрессирующие их функции цитокины: IL-10, TGF?. Созревание Т-лимфоцитов сопряжено с утратой способности продуцировать аутокринный ростовой фактор IL-2 параллельно с приобретением способности к усиленной продукции паракринно действующих цитокинов IFN?, IL-4. Утрата отдельных цитокиновых рецепторов в процессе дифференцировки клеток объясняет селективный характер паракринной цитокиновой регуляции Th1, Th2, ДК. Паракринные механизмы обеспечивают различные варианты цитокиновых каскадов, позитивной и негативной цитокиновой регуляции с обратной связью.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Кетлинский С.А.,Симбирцев А.С., Воробьев А.А. Эндогенные иммуномодуляторы. - СПб., 1992. - 255 c.
2. Тотолян А.А., Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы. - СПб., 2000. - 231с.
3. Фрейдлин И.С. Иммунная система и ее дефекты.- СПб., 1998. - 110 с.
4. Фрейдлин И.С. Интерлейкин -12 - ключевой цитокин иммунорегуляции. // Иммунология. - 1999. - № 5. - C.3 - 11.
5. Фрейдлин И.С., Назаров П.Г. Регуляторные функции провоспалительных цитокинов и острофазных белков.// Вестник Российской Академии Медицинских Наук. - 1999. - №5. - С. 28 - 32.
6. Фрейдлин И.С. Структура, функции и регуляция иммунной системы. // Иммунодефицитные состояния / Под ред. В.С.Смирнова,И.С.Фрейдлин. - СПб, 2000.-С.17 -90.
7. Фрейдлин И.С., Кузнецова С.А. Иммунные комплексы и цитокины. // Медицинская иммунология. - 1999. - №1-2. - С. 27-36.
8. Ярилин А.А. Основы иммунологии: Учебник. - М., 1999. - 608с.
9. Armitage R., Alderson M. B-cell stimulation // Current Opinion in Immunol.- 1995.- Vol.7.- P.243-247.
10. Biron Ch.,Gazzinelly R. Effects of IL-12 on immune responses to microbial infections: a key mediator in regulating disease outcome // Current Opinion in Immunology. - 1995. - Vol.7. - P.485-496.
11. Blotta V., Marshall J., DeKruyff R., Umetsu D Cross-linking of the CD40 ligand on human CD4+ T lymphocytes generates a costimulatory signal that up-regulates IL-4 synthesis // J. Immunol. - 1996. - Vol.156. - P. 3133-3140.
12. Callard R., Gearing A. The cytokine. Facts book. London. - 1994. - 265 p.
13. Caux C., Vanbervliet B., Massacrier C., Dezutter-Dambuyant C., de Saint-Vis B., Jacquet C., Yoneda K., Imamura S., Schmitt D., Banchereau J. CD34+ hematopoietic progenitors from human cord blood differentiate along two independent dendritic cell pathways in response to GM-CSF+TNF alpha.// J.Exp.Med.- 1996. - Vol.184. - P. 695-706.
14. Cella M., Sallusto F., Lancavecchia A. Origin, maturation antigen presenting function of dendritic cells.// Curr.Opin. Immunol. - 1997.- Vol. 9. - P. 10-16.
15. D'Elios M., Del Prete G. Th1/Th2 balance in human disease // Transplantation Proceedings. - 1998. - Vol.30. - P. 2373-2377.
16. De Maeyer E., De Maeyer-Guignard J. Interferon-?.// Curr.Opin.Immun. - 1992. - Vol.4. - P. 321-326.
17. Desai S., Libutti S. Tumor angiogenesis and endothelial cell modulatory factors//Immunotherapy. - 1999. - Vol.22. - P.186-211.
18. Doherty T.M. T-cell regulation of macrophage function.// Curr.Opin.Immun. - 1995. - Vol.7. - P. 400-404.
19. Freidlin I. Cells of immune system: development, activation,effector functions// Russian Journal of Immunology. - 1999. - Vol.4. - N3.- P.220 - 223.
20. Gillespie M.,Horwood N. Interleukin -18: perspectives on the newest interleukin // Cytokine & Growth Factor Reviews. - 1998. - Vol.9 - P.109-116.
21. Gordon S., Clarke S., Greaves D., Doile A. Molecular immunobiology of macrophages: recent progress.// Curr.Opin.Immun.. - 1995. - Vol.7. - P. 24-33.
22. Hart P., Bonder C., Balogh J., Dickensheets H., Donnelly R., Finlay-Jones J. Differential responses of human monocytes and macrophages to IL-4 and IL-13.// J. Leukoc. Biol. - 1999. - Vol.66. - P. 575-578.
23. Isomaki P., Luukkainen R., Saario R. et al. Interleukin-10 functions as an antiinflammatory cytokine in rheumatoid synovium .// Arthritis. Rheum. - 1996. - Vol. 39. - P. 386-395.
24. Janeway Ch., Travers P., Walport M., Capra J. Immunobiology: the immune system in health and disease. London. - 1999. - 635 p.
25. Kolb H., Kolb-Bachofen V. Nitric oxide in autoimmune disease: cytotoxic or regulatory mediator? // Immunol. Today. - 1998. - Vol. 19. - P. 556-562.
26. Krishnaswamy G., Kelley J., Yerra L., Smith J., Chi D. Human endothelium as a source of multifunctional cytokines: molecular regulation and possible role in human disease // J. Interferon and Cytokine Research. - 1999. - Vol. 19. - P..91 - 104.
27. Lester M., Hofer M., Gately M., Trumble A., Leung D. Down-regulating effects of IL-4 and IL-10 on the IFN-? response in atopic dermatitis // J. Immunol. - 1995. - Vol.154. - P.6174 - 6181.
28. Letterio J., Roberts A. Regulation of immune responses by TGF-? // Annu. Rev. Immunol.- 1998.- Vol.16. - P.137-161.
29. Lutz M.B., Assmann C.U., Girolomoni G, Rcciardi-Castagnoli P. Different cytokines regulate antigen uptake and presentation of a precursor dendritic cell line.// Eur.J.Immunol. - 1996. - Vol. 26.- P. 586-594.
30. Morel P., Oriss T. Crossregulation between Th1 and Th2 cells. // Critical Reviews in Immunology. - 1998.- Vol.18.- P. 275-303.
31. Muraille E., Leo O. Revisiting the Th1/Th2 paradigm // Scand. J. Immunol.. - 1998. - Vol.47. - P. 1-9.
32. Okamura H., Kashiwamura S., Tsutsui H., Yoshimoto T., Nakanishi K. Regulation of interferon-? production by IL-12 and IL-18 // Current Opinion in Immunol.- 1998.- Vol.10.- P.259-264.
33. Paludan S. Interleukin-4 and Interferon-?: the quintessence of a mutual antagonistic relationship // Scand. J. Immunol. - 1998. - Vol.48. - P. 459-468.
34. Peters J.H.,Gieseler R.,Thiele B.,Steinbach F. Dendritic cells: from ontogenetic orphans to myelomonocytic descendants// Immunol.Today. - 1996. - Vol. 17. -P. 273-278.
35. Peters J.H., Xu H., Ruppert J., Ostermeier D., Friedrichs D., Gieseler R.K. Signals required for differentiating dendritic cells from human monocytes in vitro.// Adv. Exp.Med.& Biol. - 1993. - Vol. 329. - P. 275-280.
36. Robey E.,Allison J. T-cell activation: integration of signals from the antigen receptor and costimulatory molecules. // Immunol. Today. - 1995. - Vol. 16. - P. 306-310.
37. Sallusto F., Lanzavecchia A. Efficient presentation of soluble antigen by cultured human dendritic cells is maintained by granulocyte/macrophage colony-stimulating factor plus interleukin 4 and downregulated by tumor necrosis factor alpha. // J.Exp.Med. - 1994. - Vol. 179. - P. 1109-1118.
38. Stocker C., Sugars K., Harari O., Landis R., Morley B., Haskard D. TNF-?, IL-4, and IFN-? regulate differential expression of P- and E-selectin expression by porcine aortic endothelial cells. // J. Immunol. - 2000. - Vol.164. - P.3309 - 3315.
39. Sutterwala F., Mosser D. The taming of IL-12: suppressing the production of proinflammatory cytokines // J. Leukoc. Biol.- 1999.- Vol.65.- P. 543-551.
40. Szabolcs P., Avigan D., Gezelter S., Ciocon D.H., Moore M.A., Steinman R.M., Young J.W. Dendritic cells and macrophages can mature independently from a human bone marrow-derived, post-colony-forming unit intermediate. // Blood. - 1996. - Vol. 87. - P. 4520-4530.
41. Tilg H., Dinarello Ch., Mier J. IL-6 and APPs: anti-inflammatory and immunosuppressive mediators // Immunol. Today. - 1997. - Vol.18. - P.428-432.
42. Tripp C.S., Beckerman K.P., Unanue E.P. Immune complexes inhibit antimicrobial responses through interleukin-10 production. // J. Clin. Invest. - 1995. - Vol 95. - P. 1628-1634.
43. Thomson A, ed. The Cytokine Handbook. : London. - 1992. - 418 p.
44. Wenner C. et al. Roles of IFN-? and IFN-? in IL-12-induced T helper cell-1 development. // J. Immunol.. - 1996. - Vol. 156. - P. 1442-1447.
45. Yoshida A. et al. IFN-? induces IL-12 mRNA expression by a murine macrophage cell line J.774 .// Biochem. Biophys. Res.Comm. - 1994. - Vol. 198 - P. 857-861.
46. Zurawski G., de Vries J. Interleukin-13, interleukin-4-like cytokine that acts on monocytes and B cells, but not on T cells // Immunol. Today. - 1994. - Vol.15. - P.19-24

МИЕЛОПЕПТИДЫ И ИХ РОЛЬ В ФУНКЦИОНИРОВАНИИ
ИММУННОЙ СИСТЕМЫ
А.А.Михайлова
Институт биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН, Москва

Описаны особенности механизма иммунорегуляторного действия пептидов костного мозга - миелопептидов. На примерах иммунокорригирующих эффектов МП-1, МП-2 и МП-3 показана роль этих медиаторов в поддержании нормального функционирования иммунной системы.

Стремительное развитие клеточной и молекулярной иммунологии за последние три десятиления привело к выявлению множества различных молекулярных субстанций, играющих существенную роль в реализации сложной системы иммунорегуляции. Известно, сколь далеко продвинуты исследования в области изучения различных цитокинов, хемокинов, факторов внутрисистемных и межсистемных взаимодействий. Если в 60-е годы преобладало понятие автономности иммунной системы, обладающей собственными внутрисистемными регуляторными механизмами, то теперь пришло понимание общебиологической значимости иммунорегуляторных факторов, появился подход рассмотрения иммунных реакций в рамках функционирования организма в целом. И связи с этим, изучение структуры, функции и механизма действия новых эндогенных биорегуляторов становится особенно актуальным в плане выявления закономерностей функционирования иммунной системы в организме.
Среди множества эндогенных биорегуляторных молекул особое место занимают низкомолекулярные пептиды. В настоящее время известно три класса таких пептидов: нейропептиды, пептиды тимуса и пептиды костного мозга (миелопептиды - МП).
Первые два класса регуляторных пептидов выявлены и охарактеризованы сравнительно давно, определена их роль в становлении иммунитета и нейроиммунных взаимодействиях. МП были обнаружены Петровым и соавт. еще в 70-е годы, однако их выделение и структурная характеристика относятся к 90-ым годам [3, 7]. Определение аминокислотных последовательностей индивидуальных МП, получение их химическим синтезом открыло возможность детального исследования биологической активности и механизма действия этих новых эндогенных биорегуляторов.
К настоящему времени выделено и структурно охарактеризовано 6 индивидуальных МП, обладающих иммунорегуляторными свойствами, но отличающихся один от другого по своим конечным эффектам и механизму действия:

Phe-Leu- Gly- Phe- Pro-Thr MP-1; Leu-Val-Val-Tyr-Pro-Trp MP-2; Leu-Val-Cys-Tyr-Pro-Gln MP-3; Phe-Arg-Pro-Arg-Ile-Met-Thr-Pro MP-4; Val-Val-Tyr-Pro-Asp MP-5 ; Val-Asp-Pro-Pro MP-6.
На основании имеющихся экспериментальных данных по биологической активности выделенных МП можно утверждать, что эти соединения являются эндогенными регуляторами, каждый из которых выполняет определенную функцию в сложной цепи иммунорегуляторных процессов, обеспечивающих нормальное функционирование иммунной системы в организме. В основе механизма реализации их иммунокорригирующих эффектов лежит общебиологический принцип - лиганд-рецепторные взаимодействия, обеспечивающие направленное и своевременное включение функций определенных типов иммунокомпетентных клеток за счет экспрессии на их поверхности специфических рецепторов к соответствующей иммунорегуляторной молекуле. Проиллюстрировать это положение можно конкретными экспериментальными данными по реализации функциональной активности отдельных МП.
Известно, что миелопептид-1 (МП-1) обладает выраженной способностью восстанавливать уровень антителообразования при иммунодефицитах различной этиологии [5, 6]. Введение этого пептида мышам, подвергнутым воздействию ионизирующей радиации, цитостатиков или антибиотиков повышает сниженный уровень антителообразования в ряде случаев до нормы (рис. 1). Цитофлуориметрический анализ с использованием приема двойного флуоресцентного окрашивания позволил установить факт специфического связывания этого регуляторного пептида с рецепторами на поверхности клетки-мишени, каковой является Т-лимфоцит фенотипа CD-4, или Т-хелпер.

Рис. 1. Влияние МП-1 на уровень антителообразования в селезенке мышей,
получавших циклофосфамид (ЦФ).

Оказалось, что коррекция уровня антителообразования у иммунодефицитных мышей под влиянием МП-1 происходит за счет способности данного пептида восстанавливать баланс регуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов CD4/CD8 клеток, сдвиг которого характерен для большинства иммунодефицитных состояний.
На рис. 2 представлены данные по связыванию меченного родамином МП-1 с меченными флуоресцеином CD4+- и CD8+-Т-лимфоцитами в суспензии клеток селезенки мышей в норме и при сдвинутом соотношении этих субпопуляций. Экспериментальный сдвиг соотношения CD4+/CD8+ Т-клеток в сторону преобладания CD8+ клеток в мышиной селезенке был достигнут введением мышам Koн A в определенном режиме. В такой дефектной суспензии клеток селезенки связывание меченого МП-1 с CD8+-Т-лимфоцитами увеличивается, однако, оно носит неспецифический характер и происходит за счет прироста абсолютного числа CD8+-клеток в мышиной селезенке под влиянием Koн A. Инкубация "дефектной" суспензии спленоцитов с МП-1 приводит к увеличению специфического связывания меченого МП-1 с CD4+-Т-лимфоцитами, результатом чего является восстановление сдвинутого баланса. Очевидно, что при возникновении в организме дисбаланса CD4+/CD8+ клеток по каким-либо причинам в сторону избытка CD8+-клеток, на CD4+-Т-лимфоцитах усиливается экспрессия специфических рецепторов к МП-1. Этот регуляторный пептид, связываясь со своей клеткой-мишенью, коррегирует сдвинутое соотношение регуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов, следствием чего является нормализация сниженного уровня антителообразования [2].
Включение активности другого выделенного регуляторного пептида, МП-2, также происходит при нарушении функциональной активности Т-лимфоцитов под воздействием продуктов опухолевых клеток. Развитие злокачественного новообразования в организме сопровождается подавлением иммунной системы хозяина под влиянием продуктов опухолевых клеток [4]. Страдают, в частности, Т-лимфоциты и NK-клетки - главные участники противоопухолевой защиты. Как удалось показать, под влиянием супернатанта лейкозной клеточной линии HL-60 Т-лимфоциты периферической крови здоровых доноров теряют способность полноценного пролиферативного ответа на ФГА in vitro. При этом происходят резкие нарушения фенотипа CD-3+-и CD4+-клеток. Среди CD-4+-Т-лимфоцитов появляется некая "дефектная" субпопуляция с крайне низкой экспрессией CD-4+-антигена на их поверхности. Инкубация этих Т-лимфоцитов с МП-2 восстанавливает возникшие фенотипические сдвиги, а также нарушенный ответ Т-лимфоцитов к митогену [8].

Рис. 2. Связывание родамин-меченого МП-1 с CD4+-или CD8+-клетками, полученными из селезенки нормальных мышей или от мышей с КонА-индуцированной Т-супрессией

Способность МП-2 восстанавливать функциональную активность Т-лимфоцитов, подавленную продуктами опухолевых клеток, лежит в основе конечного эффекта этого эндогенного регулятора - подавление роста опухоли. На модели трансплантированных мышиных опухолей показано, что введение МП-2 in vivo на 70-80% тормозит рост таких опухолей как лимфолейкоз Р-388, аденокарцинома молочной железы Са 475, саркома S-180, меланома В-16 и др. Пример влияния МП-2 на рост трансплантированной мышам меланомы В-16 представлен на рис. 3.
Следует отметить, что эксперименты in vivo подтвердили иммунорегуляторный механизм противоопухолевого действия МП-2. При трансплантации меланомы В-16 бестимусным мышам nude введение МП-2 не оказывало эффекта на опухолевый рост. Назначение МП-2 в комбинации с ИЛ-2 или цитостатиком цисплатином для лечения мышей с трансплантированными опухолями показало, что МП-2 не усиливает противоопухолевый эффект ИЛ-2. В то же время наблюдается выраженный синергизм в действии МП-2 и цисплатина: введение МП-2 позволило на порядок снизить эффективную дозу такого токсичного цитостатика, как цисплатин (рис. 4). Полученный результат объясняется различными точками приложения действия цитостатика и иммунорегуляторного пептида МП-2. Цитостатик впрямую подавляет опухолевые клетки, а МП-2 в дополнение к этому подключает к борьбе с опухолью иммунную систему, подавленную в организме опухоленосителя. Имеющийся экспериментальный материал по механизму противоопухолевого действия МП-2 свидетельствует о несомненном участии этого пептида в процессах антиканцерогенеза, обеспечивающих противодействие развитию злокачественных новообразований в здоровом организме. Как и в случае с МП-1, МП-2 корригирует возникающие нарушения в иммунной системе, поддерживая тем самым ее нормальное функционирование. Показано, что МП-2, как и МП-1, связывается со специфическими рецепторами на поверхности Т-лимфоцитов, что характеризует механизм действия эндогенных иммунорегуляторов.

Рис. 3. Влияние МП-2 на рост меланомы B-16, трансплантированной мышам

Мишенью действия гексапептида МП-3 являются макрофаги. МП-3 стимулирует активность этих клеток, усиливая фагоцитоз, экспрессию Ia антигенов на клеточной поверхности, антигенпредставляющую функцию, цитотоксический эффект. Эта его способность лежит в основе защитного действия данного пептида при бактериальном заражении животных [1]. Следует подчеркнуть, что активация макрофагального звена иммунитета под влиянием МП-3 также носит корригирующий характер. Стимулирующий эффект данного эндогенного регулятора на макрофагальные функции увеличивается при их сниженном по каким-либо причинам исходном уровне. Проиллюстрировать это положение можно на примере влияния МП-3 на цитотоксическую активность макрофагов in vitro, которая оценивалась по лизису клеток-мишеней мышиных фибробластов линии ATCC-NCTC 929 (L929). Из данных, представленных на рис. 5 можно видеть, что при оптимальном соотношении эффектор/мишень (20:1) МП-3 не оказывает влияния на величину цитотоксического эффекта макрофагов. В случае же уменьшения числа макрофагов по сравнению с числом клеток-мишеней (соотношение эффектор/мишень 10:1 или 5:1) МП-3 оказывает статистически достоверный эффект стимуляции, т.е. "помогает" макрофагам осуществить полноценный цитотоксический эффект при неблагоприятных условиях.

Рис. 4. Эффективность комбинированного применения МП-2 с различными дозами цисплатина
на мышах с трансплантированной опухолью Р-338.
Vо - исходный объем опухоли; Vt - объем опухоли после лечения.
*p < 0.05
Рис. 5. Влияние МП-3 на цитотоксическую активность макрофагов in vitro
при различном соотношении эффектор/мишень (макрофаги/клетки линии L929)
Пептиды МП-4 и МП-6 являются факторами клеточной дифференцировки. Они индуцируют терминальную дифференцировку в миелоидных лейкозных клеточных линиях HL-60 (миелобластный лейкоз) и К 562 (эритробластный лейкоз), отменяя блок дифференцировки, характерный для этих лейкозных клеток [9]. Очевидно, что МП-4 и МП-6 играют определенную роль в процессах, регулирующих гемопоэз.
Представленные примеры иммунорегуляторных эффектов индивидуальных МП показывают строгую направленность их действия на нарушенное звено иммунитета или гемопоэза и восстановление имеющихся нарушений. Такая направленность действия эндогенных регуляторов обеспечивается экспрессией рецепторов на соответствующих клетках-мишенях - механизмом, лежащим в основе реализации системы биорегуляции. Можно предполагать, что МП представляют собой отдельный класс эндогенных низкомолекулярных пептидных регуляторов, которые, наряду с нейропептидами и пептидами тимуса, участвуют в сложной цепи биорегуляторных процессов, обеспечивающих сохранение гомеостаза.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Белевская Р.Г., Михайлова А.А.// Докл. РАН. - 1998. - Т. 358. - С. 847-849.
2. Кирилина Е.А., Михайлова А.А., Малахов А.А. и др. // Иммунология. - 1998. - N 4. - С. 26-29.
3. Петров Р.В., Михайлова А.А., Фонина Л.А.// Биоорг. химия. - 1999. - Т. 25. - N 11. - С. 811-815.
4. Chiao J.W., Arlin Z., Lutten J.D. et al.// Proc. Nat. Acad. Sci. USA. - 1986. - Vol. 83. - P. 3432.
5. Mikhailova A.A., Fonina L.A., Kirilina E.A. et al.// Regulat. Peptid. - 1994. - Vol. 53. - P. 203-209.
6. Mikhailova A.A., Shanurin S.Yu., Petrov R.V.// Immunology Letters. - 1995. - Vol. 47. - P. 199-203.
7. Petrov R.V. Mikhailova A.A., Stepanenko R.N., Zakharova L.A..// Cell. Immunol. - 1975. - Vol. 27. - P. 342.
8. Strelkov L.A., Mikhailova A.A., Sapozhnikov A.M. et al.// Immunology Letters. - 1996. - Vol. 50. - P. 143-147.
9. Strelkov L.A., Mikhailova A.A., Fonina L.A., Petrov R.V.// FEBS Letters. - 2000. - Vol. 470. - P. 281-284.

РОЛЬ Т-ХЕЛПЕРОВ 1-го и 2-го ТИПОВ В РЕГУЛЯЦИИ КЛЕТОЧНОГО И ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА
С.А.Кетлинский
Государственный научный центр - Институт особо чистых биопрепаратов МЗ РФ,
Санкт-Петербург

В обзоре обсуждены данные о физиологических механизмах регуляции иммунного ответа, поддерживаемого Тh1 или Тh2. Изучение молекулярных механизмов поддержания стабильности Тh1 и Тh2 привело к открытию молекул, участвующих в проведении сигнала от рецепторов, локализованных на мембране Т-хелперов, до специфических транскрипционных факторов, которые обеспечивают экспрессию генов ключевых цитокинов и их рецепторов. Вскрыты механизмы генетической регуляции Th1/Th2, которая осуществляется доминантным кластером генов цитокинов, расположенных на длинном плече 5 хромосомы человека. Наличие аллелей генов цитокинов, характерных для Тh1 или Th2, определяет естественное преобладание направленности иммунитета. Однако при активации иммунитета антигены могут изменять эту направленность.
Рассмотренные данные о возможности изменения направленности клеточного иммунитета в гуморальный и наоборот, дают основание для развития новых иммунофармакологических подходов к профилактике и коррекции патологии иммунной системы. Среди факторов, модулирующих иммунный ответ, рассматриваются цитокины и другие субстанции, которые в дальнейшем могут быть использованы в практике.

Физиологические проявления иммунитета связаны с регуляцией пролиферации и дифференцировки Т- и В-лимфоцитов, которые затем в ответ на антиген формируют эффекторные клетки, способные связать, нейтрализовать и вывести из организма патоген. Одним из важнейших событий в иммунном ответе является представление антигена, в котором участвуют антиген-представляющие клетки (АРС), молекулы II класса гистосовместимости (МНСII) и Т-хелперы с экспонированными на поверхностной мембране Т-клеточным рецептором (TCR) и ко-рецептором CD4, а также с внутриклеточными молекулами, усиливающими проведение сигнала от ТСR внутрь Т-хелпера. Эта совокупность взаимосвязанных молекул, которые выполняет множество функций, связанных с распознаванием "своего" и "чужого", представлением антигена, активацией продукции медиаторов, генерацией и проведением сигнала в клетку, может быть названа иммунологическим синапсом.
Т-хелперы, участвующие в распознавании антигенов в совокупности с МНСII класса, не являются гомогенной популяцией клеток. Выяснилось, что в результате дифференцировки наивных Т-клеток образуются два типа Т-хелперов - Тh1 и Th2.
Oткрытие методов количественного анализа цитокинов позволили T.R. Мossman и соавторам (28) показать гетерогенность Т-хелперов. Оказалось, что Т-хелперы различаются между собой набором продуцируемых цитокинов. Так, Т-хелперы 1-го типа (Тh1) продуцируют IFN-?, IL-2, TNF-?, тогда как Т-хелперы 2-го типа - IL-4, IL-5, IL-10 и IL-13.
В последущие годы изучение этого феномена интенсивно продолжалось. Анализ продукции цитокинов на уровне одной клетки, привел к выводу о существовании Тh0 клеток, имеющих смешанный набор цитокинов, характерных для Т-хелперов типов 1 и 2 (23).
Кроме того, были описаны Т-клетки с индивидуальным набором синтезируемых цитокинов, которые продуцируют TGF-? и IL-10 или IL-2, IL-4, IL-5 и IFN-?, которые были также отнесены к Тh0. Этот феномен поднял вопрос о недостатке сведений о фенотипических и генотипических различиях между выявляемыми типами и подтипами Т-хелперов (1).
Дальнейший поиск селективных маркеров Тh1 и Тh2 человека показал, что удается выявить несколько молекул преимущественно связанных с Тh1 - CD26, мембранная форма IFN-?, LAG-3 (ген активирующий лимфоцит), CCR5, CXCR3 и с Тh2 - CD62L, CD30, CCR3, CCR4, CCR8 (2).
Однако несмотря на трудности фенотипирования Т-хелперов был получен ряд закономерностей, которые касались взаимосвязи между различными патогенами и типами защитного иммунитета. Так было показано, что защита организма от внутриклеточных патогенов происходит с помощью формирования клеточного иммунитета, зависимого от Тh1, тогда как внеклеточные патогены нейтрализуются и выводятся из организма благодаря гуморальному иммунитету, поддерживаемому Тh2 (47).

Генетическая регуляция Тh1 и Тh2

Давно известно, что ряд мышиных линий, и в частности ВАlВ/c, в ответ на антиген преимущественно развивают гуморальный ответ, тогда как В10.D2 - клеточный. Такие же различия обнаружены у мышей линий СВА и C57BL. Оказалось, что лимфоциты, выделенные из мышей линии BALB/c, в ответ на действие антигена продуцируют IL-4 и не чувствительны к действию IL-12, тогда как лимфоциты мышей линии B10.D2 проявляют в течение длительного времени чувствительность к IL-12 (5, 37).
Эти данные привели к предположению, что генетический контроль осуществляется доминантным локусом генов. Вскоре оно нашло подтверждение в том, что в локусе q23.3 - q31.1 хромосомы 5, расположены гены цитокинов и CSF (4). Среди них можно отметить IL-4, IL-5 и IL-13, продуцируемые Тh2, а также обе субъединицы IL-12 - р40 и р70 и IRF (интерферон, регулирующий фактор), которые участвуют в экспрессии гена IFN-? и активации Тh1. Логично предположить, что у мышей, различно реагирующих на антиген, содержатся доминантные аллели того или иного набора генов цитокинов. Это соответствует также наблюдениям, что мыши линии ВАLB/c более чувствительны к инфекциям, вызванным Leishmania major, а D10.B2 - менее (17). Это значит, что защитный иммунитет против L.major является клеточным и он выражен сильнее у мышей D10.B2. Интересными оказались данные о селективной чувствительности мышей различных линий к радиации. Более чувствительными оказались BALB/c в сравнении С57BL. Объяснение этих данных состоит в том, что под влиянием радиации происходит выброс IFN-?, который активирует макрофаги к продукции факторов роста миелоидных стволовых клеток, что приводит к ранней репопуляции клеток костного мозга и защите животных от гибели (Кетлинский С.А., Гребенюк А.Н., Сидоров Д.А.).

Механизмы стабильности Тh1 и Тh2

В настоящее время большинством исследователей принято, что Тh1 и Тh2 представляют собой альтернативные состояния экспрессии генов и функции СD4+-Т-лимфоцитов (1). T.R. Mosmann et. al. (28, 29, 30), используя многократно перевиваемые культуры со сменой среды, выявили стабильность поддержания Тh1 и Тh2 с неизменным постоянством набора синтезируемых цитокинов.
Эксперименты с нокаут-мышами подтвердили факт стабильности Тh1 и Тh 2 in vivo и показали, что ключевыми факторами, определяющими тип иммунитета, являются IFN-? и IL-4. Так, в отсутствии гена IFN-? нарушается иммунный ответ по клеточному типу, поддерживаемый Тh1 (9), элиминация IL-4 блокирует Тh2-зависимый гуморальный ответ (25).
Приведенные данные поднимают новые вопросы о том, могут ли Тh1 переходить в Тh2 и наоборот. Исследование этого вопроса показало, что эта трансформация невозможна (31). Pяд исследователей предполагает, что переход в Тh1 и Тh2 происходит в результате направленной дифференцировки Тh0 в Тh1 или в Тh2. Он осуществляется двумя основными цитокинами IL-12 и IL-4, соответственно. В связи с этим особый интерес проявляется к изучению возможных механизмов регуляции экспрессии генов обоих цитокинов.
Считается, что IL-4 является основным фактором в определении дифференцировки стимулированных антигеном наивных CD4+-Т-клеток в Тh2. Экспрессия гена IL-4 происходит в результате активации STAT6, который связывается с определенным участком (мотивом) регуляторной области гена IL-4. STAT6-зависимая продукция IL-4 присуща только Th2. NKT-клетки, способные продуцировать IL-4, не требуют STAT6. Авторы этих данных считают, что STAT6 требуется для программы дифференцировки Тh2, а не для продукции IL-4 (21). К такому же выводу приводят эксперименты с использованием мышей дефицитных по STAT6. Эти животные после иммунизации ослиными антителами к мышиному IgD способны продуцировать IL-4 (10).
Биологическое действие IL-4 проявляется после того, как он связывает IL-4 рецептор (IL4R). IL4R состоит из двух цепей - ?, которая обладает высокой аффинностью в связывании IL-4, и ?-цепи (?с), являющейся общей для IL-2, IL-7, IL-9 и IL-15 (38). Cвязывание IL-4 с IL4R приводит к активации тирозинкиназ JAK-1 и JAK-3 (Janus kinase), играющими критическую роль в функции IL-4. Клетки с мутациями в JAK-1 и JAK-3 (8) утрачивают способность фосфорилировать субстрат инсулинового рецептора (IRS-1/2). Этот субстрат фосфорилируется в нормальных клетках под действием IL-4. Было также показано, что домен IRS-1/2-субстрата, связывающий фосфотирозин, является важным в регуляции роста клеток, стимулированных IL-4 (22).
Мыши, дефицитные по ?-цепи IL4R или по STAT-6, который отвечает за активацию транскрипции гена IL-4 и проведения сигнала, не способны формировать CD4-клетки, продуцирующие IL-4 (21, 39, 43).
У нокаут-мышей, у которых удален ген STAT6, отсутствуют экспрессия антигенов MHC класса II, CD23 на поверхностной мембране В лимфоцитов, а также продукция ими IgЕ (39). В-лимфоциты и тимоциты, выделенные из этих мышей, не пролиферируют в ответ на действие IL-4. Несмотря на эти данные, молекулярный механизм действия STAT6 оставался неизвестным. В предпринятых экспериментах для решения этого вопроса (9) был использован фьюз-белок STAT6-эстрогенный рецептор, который мог быть активированным гидрокситамоксифеном в отсутствии эндогенного STAT6 и c-maf. Введение с помощью ретровирусной системы генa STAT6-ER в развивающиеся Th1 клетки способствовало продукции цитокинов, характерных для Тh2, и ингибированию IFN-?. При этом наблюдалась также индукция экспрессии фактора GATA-3, относящегося к семейству белков, связывающих ДНК, и протоонкогена c-maf, что сопровождалось снижением экспрессии рецептора для IL-12. Эти изменения в Тh1 приводили к синтезу цитокинов характерных для Тh2, что свидетельствует о том, что функция STAT6 состоит в активации транскрипционных факторов GATA-3 и c-maf, которые и вызывают развитие Тh2. Показано, что вовлечение в процесс дифференцировки Т-клеток транскрипционного фактора GATA-3 , приводит к активации STAT6 в Тh2 и депрессии STAT4 в Тh1. Роль GATA-3 в активации Тh2 подтверждается тем, что экспрессия доминантного негативного мутанта GATA-3 в мышах приводит к ингибированию экспериментального аллергического воспаления, то есть выключает IL-4, индуцирующего продукцию IgE.
Таким образом эти данные указывают на возможность изменения сигнального пути в Тh1, приводящего к синтезу цитокинов, свойственных Тh2.
Приведенные данные указывают, что GATA-3 и c-mif являются основными факторами в развитии Тh2. Тh1 и Тh2 отличаются друг от друга множеством важных признаков. Тh1 не могут синтезировать IL-4 и даже не способны поддержать транскрипцию репортерного гена, нахоящегося под контролем IL-4-промотора (6, 41, 44 ,46). I.C. Ho и соавт. (15) показали, что протоонкоген c-maf ответственен за тканеспецифическую экспрессию IL-4, а трансфекция Тh1 этим протоонкогеном позволяет транскрибировать репортерный ген, находящийся под промотором IL-4. В более поздней работе I.C. Но и соавторов (16) было выявлено, что с-maf усиливает дифференцировку Тh2 IL-4 зависимым путем, но угнетение дифференцировки Тh1 происходит Th2-независимым путем. J.I. Kim и соавт. (24) показали, что транскрипционный фактор c-mаf контролирует продукцию только IL-4, но не других цитокинов, продуцирующихся Тh2. Использование нокаут-мышей, дефицитных по транскрипционному фактору c-mаf, показало, что Тh2 утрачивают способность продуцировать IL-4, но синтезируют нормальный уровень IL-13 и IgЕ. В том случае, если дефицитные по с-mаf Т-клетки дифференцируются под воздействием экзогенно добавленного IL-4, то происходит продукция других цитокинов, характерных для Тh2.
Важным является тот факт, что для проведения сигнала IL-4 требуется стимуляция синтеза IRS-2 (субстрат для инсулинового рецептора), который индуцируется в Тh2, но не Тh1. Отсутствие чувствительности Тh1 к IL-4 может объясняться тем, что не происходит активации IRS-2 в этих клетках. В Тh1 и Т-клеточной гибридоме IL-4 не вызывает фосфорилирование STAT6, что возможно связано с тем, что проведение сигнала, обусловленного IL-4, отсутствует в Тh1. С другой стороны Тh1 не только не отвечают на IL-4, но и и не продуцируют его, что объясняется наличием сайленсера, который локализован в гене IL-4 в том месте, где находится STAT6. Активации гена IL-4 не может произойти, так как сайленсер связывается со STAT6 (26). Было также показано, что уже в процессе дифференцировки Тh1 утрачивают способность продуцировать IL-4 (31).
В Тh2 наблюдается другая картина - активация гена IL-4 происходит благодаря тому, что сайленсер блокируется, освобождая STAT6 для фосфорилирования (31). Анализ данных свидетельствует о том, что роль в клеточно-специфической индукции IL-4 играет STAT6, который фофорилирует молекулы c-maf и GATA-3, свойственные только для Тh2. STAT6 экспрессируется в Тh1 и Тh2, но его фосфорилирование находится под контролем регуляторных молекул специфичных для Тh2.
Представленые выше данные показывают, что сигнальный путь, приводящий к экспрессии гена IL-4, оказался гораздо сложнее, чем это представлялось ранее. Новые эксперименты показывают, что STAT6 является не единственной молекулой, участвующей в экспрессии продукции IL-4. Предполагается, что STAT6 участвует в программе дифференцировки Тh2, которая может быть зависима и независима от IL-4. Продукция IL-4 Тh0, зрелыми антигенспецифическими Тh2 или NK-Тхелперами не зависит от STAT6.
Почему же дефицитные по STAT6 мыши не продуцируют IL-4? Этот вопрос не имеет на данное время четкого ответа. Судя по представленным данным, STAT6 является пусковым фактором синтеза IL-4, а регуляция или поддержание его продукции осуществляется другими транскрипционными факторами. Возможно, что на определенных этапах дифференцировки Тh2 STAT6 блокируется или не активируется. Существенным было бы также отметить, что при изменении сигнального пути в Тh1 генетическими методами начинается синтез цитокинов свойственный Тh2.
Кроме этих причин в настоящее время высказываются сомнения в том, что IL-4 является первичным сигналом дифференцировки Тh2-лимфоцитов. Так было показано, что у мышей дефектных по IL-4 и IL4R определялись цитокины, свойственные Тh2. Эти данные были подтверждены на модели гельминтной инфекции (10). При этом использовался анализ цитокинов, синтезируемых Тh2-клетками, на уровне отдельных лимфоцитов. У инфицированных мышей, дефицитных по STAT6, не отмечено снижения синтеза цитокинов Тh2. В целом авторы приходят к выводу, что сигнальный путь IL-4/STAT6 не является основным для развития Th2-клеток. Предполагается, что IL-4/STAT6 играет роль в поддержании и распространении Тh2 (20).
IL-18 является провоспалительным цитокином, который активирует Th1-зависимый иммунитет путем индукции синтеза IFN-?. Наиболее выраженная продукция IFN-? наблюдается при использовании IL-18 в сочетании с IL-12. Было отмечено, что одновременное использование этих интерлейкинов вызывает антиаллергическое действие. Однако введение одного IL-18 приводит к стимуляции продукции IL-4 и IL-13 тучными клетками и базофилами, которые, как выяснилось, имеют рецепторы для IL-18. Введение IL-18 мышам, дефицитным по IFN-?, приводит к усилению продукции базофилами IL-4 и гистамина (48). Представленные данные показывают, что IL-18 может стимулировать продукцию цитокинов, свойственных Тh2 клеткам. Остается не ясным может ли IL-18 влиять на продукцию IL-4 Th2 клетками или на дифференцировку Тh0 в Th2. В настоящее время это одна из горячих точек в понимании регуляции Th2-зависимого иммунитета. Особая важность этих данных подчеркивается тем, что в уже принятой схеме появляется фактор, влияющий на продукцию IgE. Для доказательства этих гипотетических представлений необходимо показать может ли сам IL-18 индуцировать IgE или его действие связано с IL-4.
В противоположность Тh2, механизмы развития Тh1 менее известны. Тh1 характеризуются продукцией IFN-?, но не IL-4, и требуют IL-12 для активации транскрипционного фактора STAT4. Важность STAT4 в развитии Тh1 была продемонстрирована на нокаут мышах с отсутствием STAT4. При этом наблюдалось отсутствие продукции IFN-? в ответ на действие IL-12 (19, 45).
В отличии от Тh2, у Тh1 до недавнего времени не были обнаружены специфические транскрипционные факторы. STAT4, хотя и является транскрипционным фактором для IFN-?, не обладает клеточной специфичностью так как экспрессируется как в Тh1, так и в Тh2 (42). STAT4 активируется под воздействием IL -12 в том случае, когда на поверхностной мембране Тh1 экспрессируется субъединица рецептора IL-12 (32).
В дальнейших исследованиях было показано, что трансгенные клетки по Т-клеточному рецептору индуцирует развитие Тh1, не требуя активации STAT4. Поиски других факторов привели к идентификации семейства специфических транскрипционных факторов Ets, в котором один из членов этого семейства ERM, экспрессирующийcя под влиянием IL-12 и STAT4 исключительно в Тh1. Однако у STAT4-дефицитных мышей, у которых отсутствует продукция IFN-?, ЕRM не компенсирует дефект. По мнению авторов ERM не является транскрипционным фактором, ответственным за высокую продукцию IFN-?. Хотя ERM может усиливать транскрипционную активность STAT4 в продукции IFN-? у гетерозиготных мышей, продуцирующих низкие уровни этого цитокина. Авторы приходят к выводу, что ERM кооперирует с STAT4 или с пока еще неоткрытыми факторами, активирующими STAT-4, в индукции продукции IFN-? (34).

Факторы определяющие направления дифференцировки из Тh0 в Th1 и Тh2

Установлено, что дифференцировка Т-хелперов приводит к двум возможным типам Т-клеток, которые отличаются между собой наборам синтезируемых цитокинов и хемокинов. Однако мало известно, какие факторы, помимо цитокинов, могут влиять на направленность дифференцировки Т-хелперов. Проведенный анализ показал, что существует достаточное количество различных субстанций, могущих выполнять эту функцию. Так дифференцировка клеток в Т-хелперы 1 и 2 может поддерживаться или ингибироваться факторами, указанными ниже.
* L-Селектины поддерживают дифференцировку клеток в Тh1. Экспрессия L-селектинов на поверхности Тh1 зависит от IL-12 (3).
* Th1 связываются с Р-селектином и мигрируют в раневую поверхность (3).
* Дегидроэпиандростерон потенциирует активность Тh1 (35).
* Витамин D3 ингибирует формирование Тh1 (35).
* Релаксин стимулирует образование Тh1 (35).
* ДНК вакцины стимулируют образование Тh1 (40).
* CрG олигонуклеотиды стимулируют формирование Тh1 (27).
* Плазмидная ДНК вакцина эффективна в стимуляции IgG2b без IFN-? (14).
* Аллергены стимулируют образование Тh2 (12).
* Адъювант - гидроокись алюминия индуцирует Тh2-ответ.
* IL-2-токсин (DAB389IL-2) ингибирует Th1, но стимулирует IgE (36).
* Глюкокортикоиды ингибируют Тh1-иммунный ответ путем блокирования STAT4, индуцированный IL-12 (11).
Из приведенных данных видно, что факторы, влияющие на дифференцировку Тh1, различны по природе и механизмам действия, но все они активируют синтез ИФН-?. Механизмы этой активации мало известны, но можно предположить, что они действуют на степень активации различных молекул, которые ответственны за экспрессию либо молекул участвующих в индукции ИФН-? (ИЛ-12, IRF, IRS, GAF), либо самого ИФН-?.
Следует отметить, что факторы, направляющие дифференцировку предшественников в Тh2, отличаются от тех, которые индуцируют Тh1, а в некоторых случаях имеют противоположную направленность. Последнее кажется совершенно оправданным, так как развитие Тh2 приводит к синтезу цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10, которые подавляют все активности ИЛ-2, -12, ИФН-?, а также ИЛ-1 и ФНО, которые могут индуцировать рецепторы и синтез Т-клетками ИЛ-2 и ИФН-?. Наблюдается также и противоположная ситуация, когда цитокины Тh1 подавляют продукцию цитокинов свойственных Тh2.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Abbas A.K.,Murphy K., Sher A.// Nature -1996 - Vol. 383, P.787-793.
2. Annunsiato F., Galli G., Cosmi L.// Eur. Cytokine Netw.-1998 - Vol.9, P12-16.
3. Austrup F. Vestveber D., Borges E.// Nature - 1997 - Vol.385, P. 81-83.
4. Bartram C.R.// Hematol. Oncol. Clin. North.Am. - 1992 -Vol.6, P 557-570.
5. Bottomly K.// Immunol. Today - 1988 - Vol.10, P268-274.
6. Brever J.M., Hanter C.A., MohrsM.// J.Immunol - 1999 - Vol.163, P. 6448-6454.
7. Bruhn K.W.,Nelms K, Boulay J.L.//Proc.Natl.Acad.Sci., - 1993 -Vol.90, P 9707-9711.
8. Coffman R.L. Mocci S., O'Garra A. // Current Topics in Microbiol. Immunol.- 1999- CTM 238, P. 1-12.
9. Dalton D.K. //- Science -1993 - Vol 259, P 1739-1742.
10. Finkelman F.D.,Morris S.C., Orehova T.// J.Immunol.- 2000 - Vol.164, P. 2303-231011.
11. Franchimont D., Galon J., Gadina M. //J.Immunol., -2000 - Vol.164, P. 1768-1774.
12. Grunewald S., Brocker E., Sebald W.//Eur.Cytokine Netw 1998 - Vol.9, P. 92-94.
13. Hasset D.,Zhang J., Whitton H //Virology - 1999 - Vol.263, P. 175-183.
14. Но I.C., Hodge M.R., Roony J.W.// Cell -1996 - Vol.85, P. 973-983.
15. Ho I.C. Lo D., Glimcher L.H.// J.Exp.Med. -1998 - Vol.188, P. 1859-1866.
16. Hsiech C.S., Macatonia S.E., O'Garra A.// J. Exp.Res.- 1995 - Vol. 181, P. 713 - 721.
17. Ihle J.N. // Adv.Immunol - 1995 - Vol. 60, P. 1-35.
18. Jacobsen S.E., Okkenhaud C. Myklebust J.// J. Exp. Med - 1995 - Vol.181, P. 1357-1363.
19. Jankovic D., Kullberg M.C. Noben - Trauth N.// J.Immunol - 2000 - Vol.164, P. 3047-3055.
20. Kaplan M.H., Wurster A.L. Smilay V.J.// J.Immunol - 1999 - Vol.163, P. 6536-6540.
21. Keegan A.D., Nelms K.,Wite M. // Cell - 1994 - Vol. 76, P. 811-820.
22. Kelso A.//Immunol today - 1995 - Vol.12, P. 374-379.
23. Kim J.I., Ho I.C. Grusby M.J.// Immunity - 1999 - Vol. 10, P. 745-751.
24. Kopf M. Le Gros G.,Bachmannn M. //-Nature -1993, Vol 362, P. 245-248.
25. Kubo M., Ransom J., Webb D.// EMBO J. - 1997 - Vol.16, P. 4007-4020.
26. McCarty B.,Lin Y.,Czarnitcki//In: Cytokines and desease -2000-N118, P. 56.
27. MossmanT.R,Cherwinski H.,Bond M.V.// J. Immunol - 1986 - Vol.136, P. 2348-2357.
28. Mossman T.R., Coffman R.L.// Ann. Rev.Immunol, -1989 -Vol.7, p. 145-173.
29. Mossman T.R., Li L., Hengartner H. // Ciba Found. Symp, - 1997 - Vol 204, P. 148-154.
30. Murphy E., Shibuya K., Hosken N.//-J.Exp.Med - 1996- Vol.183, P. 901-913.
31. Nishikamori R., Ehrhardt R.O., Strober W.// J.Exp. Med. - 2000 - Vol.191 P. 847-858.
32. Nosaka T., van Deursen J., Tripp R.A.//Science -1995 - Vol.270, P. 800-802.
33. Ouyang W., Jacobson N.G. // Proc. Natl, Acad. Sci. USA -1999 - Vol.96, 3888-3893.
34. Piccinni M.P., Bani D., Beloni L.// Eur. J. Immunol - 1999 - Vol.29, P. 2241-2247.
35. Pullerits T., Lundin S., Dahlgren U.// J.Allergy Clin Immunol - 1999 -Vol.103, P. 843-849.
36. Reiner S.L., Locksley R.M.// Annu. Rev. Immunol.- 1995 - Vol.13, P.129-163.
37. Russell S.V., Keegan A.D., Harda N. //Science - 1993 - Vol.262, P. 1880-1883.
38. Shimoda K., van Deursen J., Sangster M.Y. //Nature - 1996 - Vol. 380, P. 630-633.
39. Song K., Chang Y., Prud'homme G.L.// Gene Ther. - 2000,Vol.7, P. 481-492.
40. Szabo S.J., Gold J.S., Murphy T.L.//Mol.Cell. Biol.- 1993 - Vol.13, P. 4793-4803.
41. Szabo S.J., Jacobson N.G., Dighe U.// Immunity - 1995 - Vol. 2, P. 665-675.
42. Takeda K.T., Tanaka T., Shi W. //Nature - 1996 -Vol.380, P. 627-630.
43. Tara D.,Weiss D.L. 44. Thierfelder W. E., van Deursen., Yamamoto K. // Nature - 1996 - Vol.382, P. 171-174.
45. Todd M.D., Grusby M.J., Lederer J.A.// J. Exp Med - 1993 - Vol.177, P. 1663-1674.
46. Zamojska R, Travers P.// T-cell receptors. 1995 - p. 46-49, Oxford Univ.

<< Пред. стр. 7 (из 8) След. >>

Список литературы по разделу