<< Пред. стр. 39 (из 116) След. >>
Список литературы по разделу
испытания стандартного и испытуемого препаратов неомицина при
дозах 100 и 200 мкг в 1 мл; активность характеризуется диаметром
зоны угнетения в миллиметрах. Использован латинский квадрат вида
(II.4.1). В этой же таблице показаны расчеты, приводящие к
2 2
величинам SUM d и SUM d , а в табл. II.4.2 показано вычисление
i i j j 2
средних дозовых эффективностей и величины SUM d .
i,j
2
Таким образом, SUM d = 14,00 + 28,75 + 5,00 + 8,75 = 56,50,
i,j
0
а так как в данном случае n = 4, k = 4, r = 2, r = 2, то по
формуле II.4.2 получаем:
56,50 - 4 x (5,125 + 2,125)
V = --------------------------- = 1,146.
4 x (16 - 8 - 2 - 2 + 2)
Данное испытание относится к типу 2;2, так что использование
соответствующего раздела табл. IV приложения вместе с формулами
II.3.4 - II.3.10 дает:
G = 219,0 - 230,75 - 221,50 + 232,75 = - 0,50;
---
V = 4 х 1,146 = 4,584; ЈGЈ / / V = 0,233 < 2,447
G / G
(t(95%, f) для f = (4 - 1)(4 - 2) = 6), поэтому одинаковость
наклонов двух дозовых прямых не отвергается; далее:
Е = (- 219,0 + 230,75 - 221,50 + 232,75) / 2 = 11,50;
F = (- 219,0 - 230,75 + 221,50 + 232,75) / 2 = 2,25;
2
A = V = 1,146; I = lg 200 - lg 100 = 0,301; B = V/I = 12,65;
0
b = 11,50/0,301 = 38,2; M = 2,25/38,2 = 0,0589; D /D = 114,5%;
2 2
g = 12,65 х 2,447 /38,2 = 0,052; 1 - g = 0,948;
0,0589
M = ------- +/-
H, B 0,948
--------------------------------
2,447 / 2
+/- ------------ / 1,146 х 0,948 + 12,65 х 0,0589 =
38,2 х 0,948
= 0,062 +/- 0,0718 = [- 0,0097; 0,1340];
0
(D /D) = 97,8%; 136,1%.
H, B
При проведении испытания по методу латинского квадрата потеря
отдельных результатов нарушает всю схему расчетов, поэтому
необходимо "заместить" их надлежащими оценками. Проще всего это
можно сделать, подставив на место выпавшего результата среднее из
оставшихся результатов для той же дозы того же препарата.
Применяемый в дисперсионном анализе более сложный способ оценки
выпавшего значения не дает в задаче определения эквивалентных доз
существенного повышения точности общих результатов испытания.
Таблица II.4.1
Љ"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""'"""""""'""""""'"""""'""""""Ї
Ј _ Ј Ј Ј Ј 2 Ј
Ј Результаты испытания, у ЈSUM у Ј у Ј d Ј d Ј
Ј ij Ј j ijЈ i Ј i Ј i Ј
""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""•"""""""•""""""•"""""•""""""¤
Ј 0 0 Ј Ј Ј Ј Ј
Ју = 222 у = 229 у1 = 222 у2 = 235 Ј 908 Ј227,00Ј1,00 Ј1,0000Ј
Ј 1 2 Ј Ј Ј Ј Ј
""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""•"""""""•""""""•"""""•""""""¤
Ј 0 0 Ј Ј Ј Ј Ј
Ју2 = 231 у = 217 у = 231 у1 = 220 Ј 899 Ј224,75Ј-1,25Ј1,5625Ј
Ј 1 2 Ј Ј Ј Ј Ј
""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""•"""""""•""""""•"""""•""""""¤
Ј 0 0 Ј Ј Ј Ј Ј
Ју1 = 221 у2 = 233 у = 218 у = 228 Ј 900 Ј225,00Ј-1,00Ј1,0000Ј
Ј 1 2 Ј Ј Ј Ј Ј
Ј Ј Ј Ј Ј Ј
""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""•"""""""•""""""•"""""•""""""¤
Ј 0 0 Ј Ј Ј Ј Ј
Ју = 235 у1 = 223 у2 = 232 у = 219 Ј 909 Ј227,25Ј1,25 Ј1,5625Ј
Ј 2 1 Ј Ј Ј Ј Ј
""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""•"""""""'""""""'"""""'""""""¤
Ј Ј 2 Ј
ЈSUM у 909 902 903 902 Ј 3616 SUM d = 5,12 Ј
Ј i i,j Ј i i Ј
Ј Ј _ Ј
Ју 227,25 225,50 225,75 225,50Ј у = 226,00 Ј
Ј j Ј Ј
Јd 1,25 - 0,50 - 0,25 - 0,50Ј Ј
Ј j Ј Ј
Ј 2 Ј 2 Ј
Јd 1,5625 0,2500 0,0625 0,2500Ј SUM d = 2,125 Ј
Ј j Ј j j Ј
ђ"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""'"""""""""""""""""""""""""""‰
Таблица II.4.2
Љ"""""""'""""""'"""'""'""""""'""""""'"""""""'""""""'"""""'""""'""""""'""""""'""""""Ї
Ј Ј 0 Ј Ј 2Ј 0 Ј Ј 2 Ј Ј Ј 2 Ј Ј Ј 2 Ј
Ј Ј y Ј d Јd Ј y Ј d Ј d Ј y1 Ј d Ј d Ј y Ј d Ј d Ј
Ј Ј 1 Ј Ј Ј 2 Ј Ј Ј Ј Ј Ј 2 Ј Ј Ј
""""""""•""""""•"""•""•""""""•""""""•"""""""•""""""•"""""•""""•""""""•""""""•""""""¤
Ј Ј 222 Ј 3 Ј9 Ј 229 Ј- 1,75Ј 3,0625Ј 222 Ј 0,5 Ј0,25Ј 235 Ј 2,25 Ј5,0625Ј
Ј Ј 217 Ј- 2Ј4 Ј 231 Ј 0,25Ј 0,0625Ј 220 Ј- 1,5Ј2,25Ј 231 Ј- 1,75Ј3,0626Ј
Ј Ј 218 Ј- 1Ј1 Ј 228 Ј- 2,75Ј 7,5625Ј 221 Ј- 0,5Ј0,25Ј 233 Ј 0,25 Ј0,0625Ј
Ј Ј 219 Ј 0 Ј0 Ј 235 Ј 4,25Ј18,0625Ј 233 Ј 1,5 Ј2,25Ј 232 Ј- 0,75Ј0,5625Ј
""""""""•""""""•"""•""•""""""•""""""•"""""""•""""""•"""""•""""•""""""•""""""•""""""¤
ЈСумма Ј 876 Ј 0 Ј14Ј 923 Ј 0 Ј 28,75 Ј 886 Ј 0 Ј 5 Ј 931 Ј 0 Ј 8,75 Ј
ЈСреднееЈ219,00Ј Ј Ј230,75Ј Ј Ј221,50Ј Ј Ј232,75Ј Ј Ј
ђ"""""""'""""""'"""'""'""""""'""""""'"""""""'""""""'"""""'""""'""""""'""""""'""""""‰
II.5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ МЕТОДОМ
ДИФФУЗИИ В АГАР НА ЧАШКАХ ПЕТРИ
Описанная в предыдущем параграфе методика определения
активности антибиотиков по схеме латинского квадрата предполагает
использование лотков. Возможен и другой способ определения этой
активности - по диффузии в агар на чашках Петри. Ниже описан
трехдозный вариант этого метода <*>.
--------------------------------
<*> Этот раздел основан на разработке Всесоюзного НИИ
антибиотиков и Государственного НИИ по стандартизации и контролю
лекарственных средств Министерства здравоохранения СССР.
Стандартный (S) и испытуемый (U) образцы растворяют из расчета
1 мг в 1 мл (основной раствор), затем готовят по три концентрации
S S S
рабочих растворов стандарта (D1, D2, D3) и испытуемого образца
U U U
(D1, D2, D3), относящиеся друг к другу как 1:2:4. Все 6
растворов закапывают на одну чашку Петри, причем
последовательность внесения растворов в цилиндры или в лунки
должна быть случайной (возможные последовательности внесения
растворов приведены в табл. II.5.1). Число чашек n должно быть не
меньше 6.
Для уменьшения влияния колебаний во времени между внесением
различных растворов рекомендуется после внесения растворов
выдерживать чашки в течение 1-2 ч при комнатной температуре. После
S U
измерения зон угнетения роста результаты опыта у , и у
i,j i,j
(i = 1, 2, 3 - номера доз, j = 1, 2, ..., n - номера чашек)
записывают в таблицу (как показано в приведенном ниже численном
примере). Там же записывают получаемые расчетом следующие
вспомогательные величины:
S U
Si = SUM у и Ui = SUM у (II.5.1)
j i,j j i,j
- суммы по чашкам для каждой дозы стандарта и испытуемого образца;
S U
Tj = SUM у + SUM у , (II.5.2)
i i,j i i,j
- суммы по всем дозам для каждой чашки;
у = SUM у = (S1 + S2 + S3) +(U1 + U2 + U3) = SUM Tj (II.5.3)
i,j i,j j
- суммы всех диаметров зон задержки роста по всем дозам и чашкам.
Далее вычисляют:
S = S1 + S2 + S3 и U = U1 + U2 + U3 (II.5.4)
- суммы всех диаметров зон задержки роста отдельно для стандарта и
для испытуемого образца;
L = S3 - S1 и L = U3 - U1 (II.5.5)
S U
- "линейные контрасты" для стандарта и для испытуемого образца;
Q = S1 - 2S2 + S3 и Q = U1 - 2U2 + U3 (II.5.6)
S U
"квадратичные контрасты" для стандарта и для испытуемого образца.
Для проверки законности дальнейших расчетов следует провести
дисперсионный анализ результатов опыта в соответствии с
табл. II.5.2, а именно должно получиться F < F(95%; f, fост) для
строк 2, 3, 4 и F > F (95%) для строки 1.
Выполнение первого условия одновременно означает, что вариации
в этих строках 2, 3, 4 должны рассматриваться как случайные, и
поэтому их следует включить в остаточную вариацию, произведя также
перерасчет значимости линейной регрессии (кстати, это относится и
к вариациям в строках 5 и 6, если они окажутся незначимыми).
Разумеется, при указанном перерасчете степени свободы вариаций,
включаемых в остаточную вариацию, должны прибавляться к числу
степеней свободы последней (fост).
Таблица II.5.1
Расположение растворов стандарта и испытуемого образца
при трехдозном варианте метода диффузии в агар
Љ"""""'""""""""""""""""""""""""""'"""""'""""""""""""""""""""""""""Ї
ЈНомерЈПорядок внесения растворовЈНомерЈПорядок внесения растворовЈ
ЈчашекЈ в цилиндры ЈчашекЈ в цилиндры Ј
Ј """"'"""'"""'""""'""""'""""•"""""•""""'""""'"""'"""'"""'""""¤
Ј Ј 1 Ј 2 Ј 3 Ј 4 Ј 5 Ј 6 Ј Ј 1 Ј 2 Ј 3 Ј 4 Ј 5 Ј 6 Ј
""""""•"""•"""•"""•""""•""""•""""•"""""•""""•""""•"""•"""•"""•""""¤
Ј Ј S Ј S Ј U Ј S Ј U Ј U Ј Ј S Ј U Ј U Ј S Ј SЈ U Ј
Ј1 ЈD1 ЈD2 ЈD2 ЈD3 ЈD1 ЈD2 Ј 17 Ј D1 ЈD2 ЈD3 ЈD1 Ј D3Ј D2 Ј
""""""•"""•"""•"""•""""•""""•""""•"""""•""""•""""•"""•"""•"""•""""¤
Ј Ј S Ј S Ј U Ј S Ј U Ј U Ј Ј S Ј U Ј S Ј S Ј UЈ U Ј
Ј2 ЈD1 ЈD2 ЈD1 ЈD3 ЈD3 ЈD2 Ј 18 Ј D1 ЈD2 ЈD3 ЈD2 Ј D3Ј D1 Ј
""""""•"""•"""•"""•""""•""""•""""•"""""•""""•""""•"""•"""•"""•""""¤
Ј Ј S Ј S Ј U Ј U Ј S Ј U Ј Ј S Ј U Ј S Ј S Ј UЈ U Ј
Ј3 ЈD1 ЈD2 ЈD3 ЈD2 ЈD3 ЈD1 Ј 19 Ј D1 ЈD2 ЈD3 ЈD2 Ј D1Ј D3 Ј
""""""•"""•"""•"""•""""•""""•""""•"""""•""""•""""•"""•"""•"""•""""¤
Ј Ј S Ј S Ј U Ј U Ј S Ј U Ј Ј S Ј U Ј U Ј S Ј UЈ S Ј
Ј4 ЈD1 ЈD2 ЈD1 ЈD3 ЈD3 ЈD2 Ј 20 Ј D1 ЈD2 ЈD3 ЈD3 Ј D1Ј D2 Ј
""""""•"""•"""•"""•""""•""""•""""•"""""•""""•""""•"""•"""•"""•""""¤
Ј Ј S Ј S Ј U Ј U Ј S Ј U Ј Ј S Ј U Ј U Ј S Ј UЈ S Ј
Ј5 ЈD1 ЈD2 ЈD1 ЈD2 ЈD3 ЈD3 Ј 21 Ј D1 ЈD2 ЈD1 ЈD3 Ј D3Ј D2 Ј
""""""•"""•"""•"""•""""•""""•""""•"""""•""""•""""•"""•"""•"""•""""¤
Ј Ј S Ј S Ј U Ј U Ј S Ј U Ј Ј S Ј U Ј U Ј S Ј UЈ S Ј
Ј6 ЈD1 ЈD2 ЈD3 ЈD1 ЈD2 ЈD3 Ј 22 Ј D1 ЈD2 ЈD3 ЈD2 Ј D1Ј D3 Ј
""""""•"""•"""•"""•""""•""""•""""•"""""•""""•""""•"""•"""•"""•""""¤
Ј Ј S Ј S Ј U Ј S Ј U Ј U Ј Ј S Ј U Ј U Ј S Ј UЈ S Ј
Ј7 ЈD1 ЈD3 ЈD1 ЈD2 ЈD3 ЈD2 Ј 23 Ј D1 ЈD2 ЈD1 ЈD2 Ј D3Ј D3 Ј
""""""•"""•"""•"""•""""•""""•""""•"""""•""""•""""•"""•"""•"""•""""¤
Ј Ј S Ј S Ј U Ј S Ј U Ј U Ј Ј S Ј U Ј S Ј U Ј UЈ S Ј
Ј8 ЈD1 ЈD3 ЈD3 ЈD2 ЈD1 ЈD2 Ј 24 Ј D1 ЈD2 ЈD3 ЈD3 Ј D1Ј D2 Ј
""""""•"""•"""•"""•""""•""""•""""•"""""•""""•""""•"""•"""•"""•""""¤
Ј Ј S Ј S Ј U Ј U Ј S Ј U Ј Ј S Ј U Ј S Ј U Ј UЈ S Ј
Ј9 ЈD1 ЈD3 ЈD2 ЈD3 ЈD2 ЈD1 Ј 25 Ј D1 ЈD2 ЈD3 ЈD1 Ј D3Ј D2 Ј
""""""•"""•"""•"""•""""•""""•""""•"""""•""""•""""•"""•"""•"""•""""¤
Ј Ј S Ј U Ј U Ј U Ј S Ј U Ј Ј S Ј U Ј U Ј S Ј SЈ U Ј
Ј10 ЈD1 ЈD3 ЈD2 ЈD1 ЈD2 ЈD3 Ј 26 Ј D1 ЈD3 ЈD1 ЈD2 Ј D3Ј D2 Ј
""""""•"""•"""•"""•""""•""""•""""•"""""•""""•""""•"""•"""•"""•""""¤
Ј Ј S Ј U Ј U Ј S Ј S Ј U Ј Ј S Ј U Ј S Ј S Ј UЈ U Ј
Ј11 ЈD1 ЈD1 ЈD2 ЈD3 ЈD2 ЈD3 Ј 27 Ј D1 ЈD3 ЈD2 ЈD3 Ј D2Ј D1 Ј
""""""•"""•"""•"""•""""•""""•""""•"""""•""""•""""•"""•"""•"""•""""¤
Ј Ј S Ј U Ј U Ј S Ј S Ј U Ј Ј S Ј U Ј S Ј S Ј UЈ U Ј
Ј12 ЈD1 ЈD1 ЈD3 ЈD2 ЈD3 ЈD3 Ј 28 Ј D1 ЈD3 ЈD3 ЈD2 Ј D1Ј D2 Ј
""""""•"""•"""•"""•""""•""""•""""•"""""•""""•""""•"""•"""•"""•""""¤
Ј Ј S Ј U Ј S Ј S Ј U Ј U Ј Ј S Ј U Ј U Ј S Ј UЈ S Ј
Ј13 ЈD1 ЈD1 ЈD2 ЈD3 ЈD2 ЈD3 Ј 29 Ј D1 ЈD3 ЈD1 ЈD3 Ј D2Ј D2 Ј
""""""•"""•"""•"""•""""•""""•""""•"""""•""""•""""•"""•"""•"""•""""¤
Ј Ј S Ј U Ј S Ј U Ј U Ј S Ј Ј S Ј U Ј S Ј U Ј UЈ S Ј
Ј14 ЈD1 ЈD1 ЈD3 ЈD2 ЈD3 ЈD2 Ј 30 Ј D1 ЈD3 ЈD3 ЈD2 Ј D1Ј D2 Ј
""""""•"""•"""•"""•""""•""""•""""•"""""•""""•""""•"""•"""•"""•""""¤
Ј Ј S Ј U Ј S Ј U Ј U Ј S Ј Ј S Ј U Ј S Ј U Ј UЈ S Ј
Ј15 ЈD1 ЈD1 ЈD2 ЈD3 ЈD2 ЈD3 Ј 31 Ј D2 ЈD3 ЈD2 ЈD1 Ј D2Ј D3 Ј
""""""•"""•"""•"""•""""•""""•""""•"""""•""""•""""•"""•"""•"""•""""¤
Ј Ј S Ј U Ј U Ј S Ј S Ј U Ј Ј S Ј U Ј U Ј S Ј SЈ U Ј
Ј16 ЈD1 ЈD2 ЈD3 ЈD2 ЈD3 ЈD1 Ј 32 Ј D1 ЈD3 ЈD1 ЈD2 Ј D3Ј D2 Ј
ђ"""""'"""'"""'"""'""""'""""'""""'"""""'""""'""""'"""'"""'"""'""""‰
Если дисперсионный анализ дал нужный результат (т.е.
выполняются указанные выше условия), то вычисляется логарифм
отношения активностей испытуемого образца и стандарта по формуле:
А
U 4 U - S
M = lg ---- = --- I ---------, (II.5.7)
A 3 L + L
S U S
где A и A - активности, соответствующие рабочим растворам, а I -
U S
логарифм знаменателя прогрессии разведения (в данном случае I =
lg 2 = 0,301). Тогда отношение активностей равно:
R = antilg M (II.5.8)
Чтобы найти отношение активностей основных растворов
а /а , надо умножить величину R на коэффициент, учитывающий
U S
соответствующие (например, максимальные) степени разведения
основных растворов стандарта и образца ("гамма " и "гамма ").
S U
Тогда имеем:
"гамма "
U
а = а R --------. (II.5.9)
U S "гамма "
S
Границы 95%-ного доверительного интервала для логарифма
отношения активностей вычисляются по формуле:
---------------------
/ 2 8 2
M = CM +/- /(С - 1)(CM + --- I ) , (II.5.10)
H, B 3
<< Пред. стр. 39 (из 116) След. >>
Список литературы по разделу